牛(niú)病(bìng)毒(dú)性 腹瀉 -- 粘膜病（ Bovine viral diarrheamucosal disease ，
BVD-MD）是(shì)由(yóu)牛病毒(dú)性腹(fù)瀉(xiè)病毒（Bovine viml diarrheamucosal disease
virus，BVDV）引起(qǐ)的以粘膜収炎，糜爛(làn)，壞死和(hé)腹瀉(xiè)等特(tè)征為(wéi)主的疾病(bìng)。該病(bìng)
在世界各地廣泛(fàn)流(liú)行(háng)和(hé)傳(chuán)播(bō)，一(yī)些(xiē)畜牧業(yè)収達的國(guó)家尤其嚴重。因此(cǐ)，BVDV 的(dí)
快速準確鑒(jiàn)定(dìng)，對該(gāi)病的預防和檢(jiǎn)疫有(yǒu)著重(zhòng)要作用(yòng)。為(wéi)此本(běn)公司(sī)開収了本(běn)產品(pǐn)，
采(cǎi)用(yòng) RT-PCR 技術檢測(cè)疑(yí)似感染動物血清(qīng)或(huò)組(zǔ)織中(zhōng)的 BVDV。它(tā)具有下(xià)列特點(diǎn)：
1. 用(yòng)於 BVDV 的定(dìng)性鑒定檢測(cè)和分子流(liú)行病(bìng)學調(tiáo)查。
2. 能對(duì)樣品中(zhōng) BVDV 進(jìn)行(háng)快(kuài)速(sù)檢(jiǎn)測(cè)，具有良(liáng)好(hǎo)的特異(yì)性(xìng)和(hé)敏感性(xìng)。
3. 使用(yòng)一管式 RT-PCR 試劑盒(hé)，減少(shǎo)了(liǎo)操(cāo)作(zuò)步驟，降低(dī)了(liǎo)操(cāo)作誤差。

運(yùn)輸及保存:

使用(yòng)方法(fǎ):

一，樣品 RNA 的製備
用(yòng)自(zì)選方法(fǎ)純(chún)化(huà) BVDV 樣(yàng)品(pǐn)的 RNA，也(yě)可以(yǐ)另(lìng)購(gòu)本(běn)公司的一管(guǎn)式病毒(dú)
RANout 或柱式病(bìng)毒(dú) RNAout，上(shàng)述兩款(kuǎn)產品(pǐn)跟(gēn)本(běn)試(shì)劑盒(hé)兼容(róng)。
二，陽(yáng)性(xìng)對(duì)照
1. 為增(zēng)加(jiā)產(chǎn)品穩定性和避(bì)免(miǎn)擴(kuò)散傳(chuán)染性(xìng)病(bìng)原，本產品丌提(tí)供(gōng)活(huó)體病毒(dú)做陽性對
照(zhào)，隻(zhī)提供沒有(yǒu)傳(chuán)染性的，可以直(zhí)接使(shǐ)用的(dí) DNA 片段作為陽性(xìng)對照。
2. 使用(yòng)本(běn)陽性對(duì)照時，由於(yú)其(qí)濃度較高(gāo)，一(yī)定(dìng)要注(zhù)意丌(qí)要(yào)汙染其(qí)他試(shì)劑和(hé)成(chéng)分(fēn)。
最好(hǎo)在專(zhuān)門的區域(yù)操作。
三，設(shè)置(zhì) RT-PCR 反應(yīng)（30 uL 體係）
3. 在(zài) PCR 管中加入下列(liè)成分(fēn)：
成(chéng) 份 樣(yàng)品(pǐn) 陽性對照 陰性對(duì)照
雙酶一管式(shì) RT-PCR Buffer，2× 15 uL 15 uL 15 uL
BVDV 專(zhuān)一性(xìng)引物對 2 uL 2 uL 2 uL
樣品 RNA 1-5 uL 無 無
BVDV 陽(yáng)性對(duì)照 無 2 uL 無(wú)
補超(chāo)純(chún)水到 28 uL 28 uL 28 uL
MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL 2 uL
4. 輕柔混匀後(hòu)上(shàng)機，按下(xià)麵參(cān)數(shù)進行 RT-PCR。
過(guò)程 溫度(dù) 時間
逆轉(zhuǎn)錄(lù) 42℃ 30 min
預變(biàn)性 95℃ 3 min
PCR 反應
（35 個循(xún)環）
95℃ 30 s
58℃ 15 s
72℃ 30 s
延伸(shēn) 72℃ 10 min
5. 電泳檢測(cè) RT-PCR 產(chǎn)物(wù)。預(yù)期(qī)的 PCR 產(chǎn)物(wù)長(cháng)度為 244 bp