豬痢疾(jí)（SD）的(dí)病(bìng)原體是一種(zhǒng)革(gé)蘭氏(shì)陰性的(dí)厭氧性螺旋(xuán)體，先(xiān)後命名為(wéi)豬(zhū)痢(lì)
疾密螺旋體(tǐ)
，豬(zhū)痢(lì)疾(jí)蛇形(xíng)螺旋(xuán)體(tǐ)，現(xiàn)在統(tǒng)一命(mìng)名(míng)為豬(zhū)痢疾短(duǎn)螺(luó)旋體(tǐ)（Brachyspira
hyodysenteriae；B．h）。由豬痢疾短螺旋體引(yǐn)起的豬(zhū)痢疾(jí)是(shì)一(yī)種(zhǒng)腸(cháng)道傳染病，
以(yǐ)黏液性或黏液出血(xiě)性腹瀉為(wéi)特征(zhēng)，也被稱之為弧菌性(xìng)痢疾
，血(xiě)痢
，黑痢等(děng)。該病
在豬(zhū)群中的發病率(shuài)相當高，病豬(zhū)生長發育受阻，耗料增加(jiā)，給(gěi)各地(dì)養豬(zhū)業(yè)造(zào)成很(hěn)大(dà)
的(dí)經(jīng)濟損(sǔn)失。本(běn)產(chǎn)品(pǐn)從動物檢(jiǎn)疫的(dí)實際出(chū)發，建立(lì)了(liǎo) PCR 檢測(cè)方(fāng)法(fǎ)，用於(yú)豬(zhū)痢(lì)疾
短(duǎn)螺旋體(tǐ)的(dí)快(kuài)速(sù)檢測。它(tā)具(jù)有(yǒu)下列(liè)特點(diǎn)
：
1. 即(jí)開(kāi)即(jí)用，用戶(hù)隻需要(yào)提(tí)供樣品(pǐn) DNA 模(mó)板(bǎn)，操作簡單(dān)，定量準確(què)快速。
2. 根(gēn)據(jù)豬痢疾(jí)短(duǎn)螺旋(xuán)體 Nox 基(jī)因設計引(yǐn)物(wù)，引物(wù)經(jīng)過優(yōu)化，特(tè)異(yì)性強(qiáng)。預期(qī)的
PCR 產(chǎn)物(wù)長度為 149 bp。
3. PCR mix 中含上(shàng)樣染料，PCR 後可(kě)以(yǐ)直接上樣電(diàn)泳。
4. 提供(gōng)陽性(xìng)對照(zhào)，便於(yú)分(fēn)析試驗結(jié)果。

運(yùn)輸(shū)及(jí)保(bǎo)存:

使用(yòng)方(fāng)法:

一
，樣(yàng)品(pǐn) DNA 的(dí)製(zhì)備
用自選(xuǎn)方法(fǎ)提取(qǔ)豬(zhū)痢(lì)疾短螺(luó)旋體 DNA。
二
，陽性(xìng)對照
1. 為(wéi)增加產品穩(wěn)定(dìng)性(xìng)和避免(miǎn)擴散傳(chuán)染性(xìng)病原，本產品(pǐn)不提(tí)供(gōng)活(huó)體菌做陽性對(duì)照(zhào)，
隻提供沒有傳(chuán)染(rǎn)性的
，可(kě)以(yǐ)直接(jiē)使用的(dí) DNA 片(piàn)段作(zuò)為(wéi)陽(yáng)性對照(zhào)。
2. 使用(yòng)本陽性對照時(shí)，由於其(qí)濃度(dù)較高(gāo)，一定要注意(yì)不要汙染其他試劑(jì)和成(chéng)分。
最(zuì)好(hǎo)在專(zhuān)門的區(qū)域(yù)操(cāo)作。
三
，設置(zhì) PCR 反應（25 uL 體係）
3. 在(zài) PCR 管中加(jiā)入下(xià)列(liè)成(chéng)分
：
成 份(fèn) 樣(yàng)品(pǐn) 陽性對照 陰(yīn)性(xìng)對照
B．h 專一(yī)性(xìng)引(yǐn)物(wù)一 2 uL 2 uL 2 uL
樣(yàng)品 DNA 1-5 uL 無(wú) 無
B．h 陽(yáng)性對(duì)照 無 2 uL 無(wú)
補超純(chún)水到 12.5 uL 12.5 uL 12.5 uL
即用型 PCR Mix 3.0 12.5 uL 12.5 uL 12.5 uL
4. 輕(qīng)柔(róu)混匀(yún)後(hòu)上機，按(àn)下麵參數(shù)進(jìn)行(háng) PCR。
過程 溫(wēn)度(dù) 時(shí)間
預變性(xìng) 94℃ 5 min
PCR 反(fǎn)應
（30 個循環）
94℃ 40 s
55℃ 30 s
72℃ 30 s
延伸 72℃ 1 min
5. 電泳(yǒng)檢測(cè) PCR 產物(wù)。預期的(dí) PCR 產(chǎn)物長度為(wéi) 149 bp。