倉鼠白(bái)介素6IL-6酶聯(lián)檢(jiǎn)測(cè)試(shì)劑盒用於檢測(cè)未(wèi)知(zhī)抗體的(dí)間接(jiē)法(fǎ)

1.用包被緩(huǎn)衝液將(jiāng)已(yǐ)知抗原(yuán)稀釋至(zhì)1～10μg／ml，每(měi)孔加(jiā)0.1ml，4℃過夜
。

2.次(cì)日洗滌3次
。

3.加一(yī)定稀釋的待檢(jiǎn)樣品(未知抗體)0.1ml於上述已(yǐ)包被(bèi)之反(fǎn)應(yīng)孔中(zhōng),置37℃孵育1小(xiǎo)時,洗滌
。(同時(shí)做(zuò)空白，陰性及陽(yáng)性(xìng)孔對(duì)照)於反(fǎn)應孔中(zhōng)，加入新鮮稀釋的酶(méi)標第二抗(kàng)體(抗(kàng)抗體)0.1ml，37℃孵(fū)育30-60分鐘(zhōng)，洗滌,最(zuì)後一遍用DDW洗(xǐ)滌(dí)
。

4. 加底物(wù)液顯(xiǎn)色(sè)：於(yú)各(gè)反應孔中加入臨時配製的(dí)TMB底物(wù)溶(róng)液(yè)0.1ml，37℃10～30分鐘
。

5. 終(zhōng)止反(fǎn)應：於各反應(yīng)孔中加入2M硫(liú)酸0.05ml
。

6. 結果判定(dìng)：可於(yú)白色背(bèi)景上(shàng)，直(zhí)接(jiē)用(yòng)肉眼(yǎn)觀察結果(guǒ)：反(fǎn)應孔(kǒng)內(nèi)顏(yán)色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應為無色(sè)或極(jí)淺，依據所呈(chéng)顏色(sè)的深淺(qiǎn)，以“+”，“-”號(hào)表示(shì)
。也(yě)可測(cè)O·D值：在ELISA檢測儀(yí)上(shàng)，於450nm(若以(yǐ)ABTS顯色，則(zé)410nm)處(chǔ)，以空(kōng)白對照孔調零後測(cè)各孔(kǒng)O·D值，若大(dà)於規定的(dí)陰性對照OD值(zhí)的2.1倍(bèi)，即(jí)為陽性
。