試驗原(yuán)理(lǐ)：
TRH試劑盒(hé)是固相(xiāng)夾(jiā)心(xīn)法酶聯(lián)免疫吸(xī)附實驗(yàn)（ELISA）.已知TRH濃度(dù)的(dí)標(biāo)準(zhǔn)品，未知(zhī)濃(nóng)度(dù)的(dí)樣品加(jiā)入(rù)微(wēi)孔酶標(biāo)板內進(jìn)行檢(jiǎn)測。先(xiān)將TRH和生物素標記的抗(kàng)體同(tóng)時溫育。洗滌(dí)後(hòu)，加入(rù)親(qīn)和(hé)素標記(jì)過的HRP。再經(jīng)過(guò)溫(wēn)育和(hé)洗滌，去除未結合(hé)的(dí)酶結(jié)合物(wù)，然後(hòu)加入(rù)底物A，B，和(hé)酶結合(hé)物(wù)同(tóng)時(shí)作用(yòng)。產生顏色。顏色的深淺(qiǎn)和(hé)樣品中TRH的(dí)濃(nóng)度呈(chéng)比例關(guān)係。
試劑盒內(nèi)容及其配製(zhì)
試劑盒(hé)成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配(pèi)置 配(pèi)製
96/48人(rén)份酶(méi)標板 1塊(kuài)板（96T） 半(bàn)塊板(bǎn)（48T） 即(jí)用(yòng)型(xíng)
塑(sù)料(liào)膜(mó)板(bǎn)蓋(gài) 1塊 半(bàn)塊(kuài) 即用型
標(biāo)準品：24ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說(shuō)明書進行稀稀
空(kōng)白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即(jí)用型
標(biāo)準品(pǐn)稀釋緩(huǎn)衝液(yè) 1瓶（5ml） 1瓶(píng)（2.5ml） 即用型
生(shēng)物(wù)素(sù)標記的抗TRH抗(kàng)體 1瓶(píng)（6ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用型(xíng)
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即(jí)用型(xíng)
洗(xǐ)滌(dí)緩衝液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按(àn)說(shuō)明書進(jìn)行(háng)稀釋
底物A 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用(yòng)型(xíng)
底(dǐ)物B 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型(xíng)
終止(zhǐ)液(yè) 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型(xíng)
自(zì)備材料
1． 蒸餾(liù)水(shuǐ)。
2． 加樣器(qì)：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振蕩器(qì)及磁(cí)力(lì)攪拌器(qì)等。
安全(quán)性(xìng)
1． 避(bì)免(miǎn)直接(jiē)接觸終(zhōng)止液(yè)和(hé)底(dǐ)物A，B。一(yī)旦接(jiē)觸(chù)到(dào)這些(xiē)液體，請(qǐng)盡快(kuài)用水衝(chōng)洗。
2． 實(shí)驗(yàn)中不要吃(chī)喝(hē)，抽煙或使用(yòng)化(huà)妝(zhuāng)品(pǐn)。
3． 不要(yào)用嘴(zuǐ)吸取試劑(jì)盒(hé)裏的任何(hé)成(chéng)份。
操作注意事(shì)項
1． 試劑應按(àn)標簽說(shuō)明(míng)書儲存(cún)，使用(yòng)前恢(huī)復(fù)到室溫(wēn)。稀(xī)稀過後的標準(zhǔn)品應丟棄(qì)，不(bù)可(kě)保存。
2． 實驗中(zhōng)不(bù)用的板(bǎn)條應(yīng)立即放回包(bāo)裝(zhuāng)袋(dài)中，密封保存(cún)，以免變質(zhì)。
3． 不用(yòng)的(dí)其(qí)它試(shì)劑應(yīng)包裝(zhuāng)好(hǎo)或(huò)蓋(gài)好。不同批號(hào)的試劑不要(yào)混用(yòng)。保質前(qián)使用(yòng)。
4． 使用一次(cì)性的吸頭以免交叉汙染，吸取終止液和(hé)底物A，B液時，避免(miǎn)使用(yòng)帶金屬部分的加樣器(qì)。
5． 使(shǐ)用幹(gān)淨的(dí)塑料容器(qì)配(pèi)置洗滌液(yè)。使用前充分(fēn)混匀試劑(jì)盒(hé)裏(lǐ)的各種(zhǒng)成份(fèn)及(jí)樣品。
6． 洗滌(dí)酶標板時(shí)應充(chōng)分拍(pāi)幹(gān)，不要將(jiāng)吸(xī)水(shuǐ)紙直接放入酶(méi)標(biāo)反(fǎn)應孔(kǒng)中(zhōng)吸水(shuǐ)。
7． 底物(wù)A應揮發(fā)，避免(miǎn)長時(shí)間打開蓋子。底物(wù)B對(duì)光(guāng)敏感，避免長(cháng)時間暴(bào)露(lòu)於光(guāng)下。避免(miǎn)用手接觸(chù)，有毒。實(shí)驗完成後應立即(jí)讀取OD值。
8． 加入(rù)試(shì)劑的順(shùn)序應一致(zhì)，以保證所(suǒ)有反(fǎn)應板孔溫育(yù)的時間一樣。
9． 按照(zhào)說(shuō)明書中(zhōng)標明的時間(jiān)，加液(yè)的量及順(shùn)序進行溫育操(cāo)作(zuò)。
樣品(pǐn)收集(jí)，處理(lǐ)及保存(cún)方法
1， 血(xiě)清-----操作(zuò)過程(chéng)中避(bì)免(miǎn)任何細胞(bāo)刺激。使用不含(hán)熱(rè)原(yuán)和內毒(dú)素(sù)的試管。收集血液後，1000×g離(lí)心10分(fēn)鐘將血清(qīng)和紅細(xì)胞(bāo)迅速小(xiǎo)心(xīn)地(dì)分離。
2， 血(xiě)漿-----EDTA，檸檬(méng)酸鹽(yán)，肝(gān)素血(xiě)漿可用於檢(jiǎn)測。1000×g離心30分鐘(zhōng)去除(chú)顆(kē)粒。
3， 細胞上清液(yè)---1000×g離(lí)心(xīn)10分鐘去(qù)除顆粒(lì)和(hé)聚合(hé)物。
4， 保存(cún)------如果樣品不立即(jí)使用，應將其分成(chéng)小(xiǎo)部(bù)分-70 ℃保(bǎo)存(cún)，避免反(fǎn)復(fù)冷(lěng)凍。盡可能(néng)的不(bù)要(yào)使用溶(róng)血或(huò)高血(xiě)脂(zhī)血。如果血清中大量顆(kē)粒(lì)，檢(jiǎn)測(cè)前先離(lí)心或(huò)過濾。不要在(zài)37℃或更高的(dí)溫度(dù)加熱解凍。應(yīng)在(zài)室(shì)溫(wēn)下(xià)解(jiě)凍並確保(bǎo)樣品(pǐn)均匀地充(chōng)分解(jiě)凍。
試劑(jì)的(dí)準備
1． 標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)：標準品(pǐn)的(dí)係(xì)列(liè)稀釋應在實驗時準備(bèi)，不能儲存(cún)。稀(xī)釋前(qián)將(jiāng)標準品(pǐn)振(zhèn)蕩混(hùn)匀。稀(xī)釋比例按下表(biǎo)中(zhōng)進(jìn)行：
24 ng/ml （6號標準(zhǔn)品(pǐn)） 原(yuán)倍濃度不用稀(xī)釋(shì)直接加(jiā)入(rù)50ul。
12 ng/ml （5號(hào)標準品） 100ul的(dí)原(yuán)倍(bèi)標準品加(jiā)入100ul的(dí)標準(zhǔn)品稀(xī)釋(shì)液
6.0 ng/ml （4號(hào)標準(zhǔn)品） 100ul的(dí)5號標準(zhǔn)品(pǐn)加(jiā)入(rù)100ul的標(biāo)準品(pǐn)稀釋(shì)液(yè)
3.0 ng/ml （3號(hào)標(biāo)準品(pǐn)） 100ul的4號(hào)標準(zhǔn)品加(jiā)入(rù)100ul的標準(zhǔn)品稀釋(shì)液(yè)
1.5 ng/ml （2號(hào)標準(zhǔn)品） 100ul的3號標(biāo)準品加(jiā)入(rù)100ul的標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液(yè)
0.75 ng/ml （1號標準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的(dí)2號標(biāo)準品(pǐn)加(jiā)入100ul的標(biāo)準品稀(xī)釋液
0 ng/ml （空白對照） 原始濃(nóng)度(dù)不(bù)用(yòng)稀釋(shì)直接(jiē)加(jiā)入50ul。
2． 洗(xǐ)滌(dí)緩衝液(yè)（50×）的稀(xī)釋(shì)：蒸餾水50倍稀(xī)釋。
操(cāo)作步驟
1． 使(shǐ)用前，將所(suǒ)有(yǒu)試劑充(chōng)分(fēn)混匀(yún)。不(bù)要使液體(tǐ)產(chǎn)生大(dà)量的(dí)泡沫(mò)，以免加(jiā)樣時加(jiā)入大量(liáng)的氣泡(pào)，產生加樣(yàng)上(shàng)的誤(wù)差。
2． 根(gēn)據(jù)待測樣品數(shù)量(liáng)加(jiā)上標(biāo)準品(pǐn)的數量決(jué)定所(suǒ)需(xū)的(dí)板(bǎn)條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準品(pǐn)和空(kōng)白孔(kǒng)建(jiàn)議做復(fù)孔(kǒng)。每(měi)個(gè)樣品(pǐn)根據自己的數量來(lái)定，能使用復孔的(dí)盡量(liáng)做復孔。
3． 加入稀釋好後的標準(zhǔn)品(pǐn)50ul於(yú)反應孔(kǒng)，加入待測(cè)樣品(pǐn)50ul於反應孔內。立即加(jiā)入50ul的生(shēng)物素標記(jì)的抗體。蓋上(shàng)膜(mó)板，輕(qīng)輕(qīng)振蕩混(hùn)匀，37℃溫(wēn)育(yù)1小時。
4． 甩去孔(kǒng)內液體，每孔(kǒng)加滿(mǎn)洗(xǐ)滌(dí)液，振蕩30秒(miǎo)，甩(shuǎi)去洗滌(dí)液(yè)，用(yòng)吸水(shuǐ)紙(zhǐ)拍幹。重(zhòng)復此操(cāo)作(zuò)3次(cì)。如(rú)果(guǒ)用洗(xǐ)板機洗滌，洗(xǐ)滌次數增加一(yī)次(cì)。
5． 每(měi)孔(kǒng)加入80ul的親和(hé)鏈酶(méi)素-HRP，輕輕(qīng)振(zhèn)蕩(dàng)混(hùn)匀(yún)，37℃溫育(yù)30分鐘。
6． 甩去孔內液(yè)體(tǐ)，每孔(kǒng)加滿(mǎn)洗(xǐ)滌(dí)液，振蕩(dàng)30秒(miǎo)，甩去洗滌液(yè)，用(yòng)吸(xī)水紙(zhǐ)拍幹。重(zhòng)復此(cǐ)操(cāo)作3次。如(rú)果用洗(xǐ)板(bǎn)機(jī)洗滌，洗滌(dí)次(cì)數(shù)增加一(yī)次。
7． 每(měi)孔加入(rù)底物(wù)A，B各50ul，輕(qīng)輕振蕩混(hùn)匀(yún)，37℃溫(wēn)育(yù)10分鐘。避免光(guāng)照。
8． 取出酶(méi)標板，迅速加入50ul終止(zhǐ)液，加入終止液(yè)後(hòu)應立即(jí)測(cè)定(dìng)結(jié)果(guǒ)。
9． 在450nm波長(cháng)處(chǔ)測定(dìng)各孔(kǒng)的OD值。
建(jiàn)議使(shǐ)用的實驗(yàn)方(fāng)案(àn)
 標(biāo)準品濃度(dù)（ng/ml） 
A 24 24 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品
B 12 12 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品
C 6.0 6.0 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品(pǐn)
D 3.0 3.0 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品
E 1.5 1.5 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品
F 0.75 0.75 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn)
G 0 0 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品
H 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品

局限
6號標(biāo)準品(pǐn)以上(shàng)的結果為非綫(xiàn)性的，根據(jù)此標準(zhǔn)曲(qū)綫(xiàn)無法(fǎ)得到的(dí)結(jié)果(guǒ)。
試劑(jì)盒性能
1. 靈(líng)敏度：zui小(xiǎo)的檢(jiǎn)測濃度小於(yú)1號標準品。稀(xī)釋(shì)度的(dí)綫性。樣品綫性回(huí)歸(guī)與預期(qī)濃(nóng)度(dù)相關係(xì)數R值(zhí)為(wéi)0.990。
2. 特(tè)異(yì)性：不(bù)與其(qí)它細胞因(yīn)子(zǐ)反(fǎn)應。
3. 重(zhòng)復(fù)性：板(bǎn)內，板間變異係數(shù)均小於10%。
結 果(guǒ) 判(pàn) 斷(duàn) 與(yǔ) 分 析(xī)
1，儀器值：於波(bō)長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔(kǒng)的(dí)OD值(zhí)
2，以(yǐ)吸光(guāng)度OD值(zhí)為(wéi)縱坐(zuò)標（Y），相應(yīng)的TRH標(biāo)準品濃度為(wéi)橫(héng)坐標(biāo)（X），做(zuò)得相(xiāng)應的(dí)曲(qū)綫，樣(yàng)品的(dí)TRH含量可根據其OD值由標準曲綫(xiàn)換(huàn)算出(chū)相應的濃度。
3，檢(jiǎn)測值(zhí)範圍：0-24ng/ml
4，敏感(gǎn)度(dù)： 0.1 ng/ml