Alarma Blue細(xì)胞增殖及細(xì)胞(bāo)毒性(xìng)檢(jiǎn)測試劑盒AlamaBlue 細(xì)胞活力(lì)檢(jiǎn)測(cè)試劑盒提(tí)供了一種(zhǒng)可(kě)靠，靈敏(mǐn)，安(ān)全和低(dī)成(chéng)本(běn)的(dí)快速有(yǒu)效檢測(cè)細(xì)胞(bāo)活力(lì)與毒(dú)性(xìng)的(dí)方法(fǎ)。AlamaBlue 通過(guò)在(zài)細胞(bāo)生(shēng)長的(dí)培養(yǎng)基中所產生(shēng)的(dí)化學(xué)還原(yuán)反(fǎn)應(yīng)，將(jiāng)非熒(yíng)光信號(hào)的染料(liào)轉換(huàn)成(chéng)為(wéi)一(yī)紅色熒(yíng)光(guāng)物質，試鹵(lǔ)靈（9-羥基-3-異吩惡(è)嗪(qín)酮7-羥基-3H-吩惡(è)嗪(qín)-3-酮(tóng)），從而(ér)檢(jiǎn)測(cè)細(xì)胞(bāo)的存活率(shuài)。維持細胞生(shēng)產需(xū)要(yào)還原(yuán)性環(huán)境(jìng)而(ér)抑(yì)製生長則(zé)表現為(wéi)氧(yǎng)化型環境。細胞生長(cháng)率相關的(dí)降低(dī)可表現為氧(yǎng)化還原指示劑從氧化型（非熒光素，紫色(sè)）轉(zhuǎn)為還(huán)原型（熒(yíng)光(guāng)素，紅(hóng)色(sè)）。該(gāi)熒光信號可(kě)以用530~560nm 的激發波激發(fā)，在590nm 處可以(yǐ)獲發射(shè)波(bō)，檢測570 和600nm 的的吸光(guāng)度(dù)值(zhí)，校正(zhèng)監測(cè)值，可以減去(qù)相應的570nm 和600nm 的背景吸(xī)光度值(zhí)。檢測(cè)所(suǒ)產(chǎn)生的(dí)熒光(guāng)信(xìn)號是與樣品中(zhōng)的(dí)活(huó)細胞數(shù)成(chéng)正比的(dí)。
AlamaBlue 細胞(bāo)活(huó)性檢測試(shì)劑(jì)盒(hé)的(dí)靈(líng)敏度相(xiāng)似於(yú)[3H]胸(xiōng)苷法(fǎ)檢測(cè)細(xì)胞(bāo)增(zēng)殖(zhí)法。根(gēn)據不同類(lèi)型的細胞(bāo)，AlamaBlue 可以檢(jiǎn)測(cè)到(dào)至(zhì)少(shǎo)40個細胞，同(tóng)時(shí)保(bǎo)證很好(hǎo)的(dí)重現性和靈(líng)敏(mǐn)度(dù)。作(zuò)為試鹵靈（紫紅，紅色(sè)熒光(guāng)）可以進一(yī)步(bù)被還原(yuán)為水(shuǐ)解化的試(shì)鹵(lǔ)靈（無色(sè)，無熒光），當(dāng)細(xì)胞數(shù)量增(zēng)多，所有(yǒu)的(dí)刃天(tiān)青（7-羥基-3-羰(tāng)基-10-氧(yǎng)化-三氫(qīng)吩惡嗪(qín)）被轉換為(wéi)試鹵靈（9-羥(qiǎng)基-3-異(yì)吩(fēn)惡(è)嗪酮(tóng)7-羥基-3H-吩惡(è)嗪-3-酮），試劑(jì)盒的信(xìn)號(hào)反而會(huì)發(fā)生(shēng)衰(shuāi)減(jiǎn)。因此，對(duì)於您(nín)所(suǒ)用(yòng)的試劑(jì)盒來(lái)說，針對(duì)不同(tóng)的細(xì)胞類型，應該(gāi)調(tiáo)整您的(dí)細(xì)胞數，做相(xiāng)應(yīng)的優化，才(cái)能得到(dào)更(gēng)好(hǎo)的(dí)結果(guǒ)。
操作說(shuō)明
以(yǐ)下(xià)操作(zuò)可(kě)用(yòng)作通(tōng)用(yòng)指導建議(yì)。考(kǎo)慮(lǜ)不同(tóng)細胞類(lèi)型與(yǔ)培養條(tiáo)件(jiàn)的差異性，有必要(yào)根(gēn)據實際情況(kuàng)優化(huà)您的(dí)操(cāo)作步(bù)驟(zhòu)。
1. 96 孔細胞培養(yǎng)板每(měi)孔(kǒng)100μL 培養基飼養(yǎng)細胞，控製細(xì)胞數(shù)目(mù)在(zài)40~10000 個/貼壁細胞，2000~500000 個(gè)/懸(xuán)浮細胞。設置空(kōng)培(péi)養(yǎng)基做(zuò)對照。
2. 加入(rù)10μL AlamaBlue 溶(róng)液至培養基中，37 度(dù)孵(fū)育：24 小時（比色法(fǎ)讀數）；5-6 小時（熒光(guāng)讀數）。
3. 檢測(cè)570nm 和600nm 的吸(xī)光(guāng)度(dù)，或(huò)者(zhě)用熒(yíng)光微(wēi)孔板(bǎn)讀數(shù)530nm 激(jī)發(fā)，590nm 發射波(bō)讀數(shù)。
4. 如(rú)果采用比色法(fǎ)檢(jiǎn)測，選(xuǎn)擇OD570-OD600 檢測，如(rú)果檢測熒(yíng)光信號，請在(zài)校正(zhèng)OD 值後，先設(shè)置標(biāo)準曲(qū)綫(xiàn)，選擇(zé)合(hé)適您實驗的(dí)細胞(bāo)最佳(jiā)濃(nóng)度。
Alarma Blue細(xì)胞(bāo)增殖及細胞毒性檢(jiǎn)測試(shì)劑(jì)盒(hé)注(zhù)意(yì)事(shì)項：
1，懸(xuán)浮細(xì)胞用(yòng)此(cǐ)法時必(bì)須(xū)經(jīng)離(lí)心(xīn)後才(cái)能(néng)吸出上(shàng)清再加DMSO。
2，Formazan 的(dí)生(shēng)成不(bù)僅與活(huó)細胞數成比例，也受作(zuò)用(yòng)時(shí)間的影(yǐng)響，因此當樣品(pǐn)較多時測定(dìng)的(dí)OD 值(zhí)可能(néng)隨時(shí)間(jiān)而(ér)變。
3，MTT 溶(róng)液為(wéi)黃(huáng)色，需(xū)避(bì)光(guāng)保存(cún)，長(cháng)時間(jiān)光照(zhào)會(huì)導致失效。當(dāng)顏(yán)色變(biàn)為灰綠色時，請勿使用。MTT 溶(róng)液(yè)在4℃或較低(dī)溫度情況下(xià)會凝固，可(kě)以20-25℃水浴溫育片刻(kè)至(zhì)全(quán)部融(róng)解(jiě)後(hòu)使用。
4，為(wéi)了(liǎo)您(nín)的安全(quán)和健康，請穿實驗(yàn)服(fú)並戴一(yī)次(cì)性手(shǒu)套操作。
操作規(guī)程
1，在(zài)96孔(kǒng)板(bǎn)加入細胞100μL/孔，通常(cháng)細胞(bāo)增殖實驗每孔(kǒng)加(jiā)入100微(wēi)升2000個細胞(bāo)，細(xì)胞毒性(xìng)實(shí)驗(yàn)每孔加(jiā)入(rù)100微(wēi)升(shēng)5000～10000個細胞（具(jù)體(tǐ)每(měi)孔(kǒng)所用(yòng)的(dí)細胞的數目(mù)，需根據細胞(bāo)的(dí)大小(xiǎo)，細胞(bāo)增(zēng)殖(zhí)速度(dù)的快慢(màn)等(děng)決定(dìng)）。置37℃ 5%CO2細胞(bāo)培養(yǎng)箱(xiāng)培(péi)養24小時.
2，.加(jiā)入適當濃度(dù)的0～10μL 受試(shì)化合(hé)物。
3，將96孔板在37℃，含5% CO2空氣(qì)及(jí)100%濕度的細(xì)胞(bāo)培(péi)養(yǎng)箱中孵(fū)育適當時(shí)間。
4，將5×MTT 用稀(xī)釋液(yè)稀釋成(chéng)1× MTT 溶液(yè)。
5，每(měi)孔加50μL 1× MTT 溶(róng)液(yè)，在(zài)37℃孵(fū)育(yù)4小(xiǎo)時，使(shǐ)MTT 還原為(wéi)甲(jiǎ)臢。
6，吸(xī)出上清液(yè)，每孔加(jiā)150μL DMSO 使甲臢(zā)溶(róng)解，用平(píng)板搖(yáo)床搖匀(yún)。
7，酶標儀(yí)在570nm 波長處(chǔ)檢測(cè)每(měi)孔(kǒng)的光(guāng)密度(dù)（如無570nm 濾(lǜ)光片，可以(yǐ)使用(yòng)560-600nm 的(dí)濾光片）。
8，結(jié)果(guǒ)分析(xī)
 a，細胞的存活率(shuài)：將(jiāng)各(gè)測試(shì)孔的OD 值減(jiǎn)去本(běn)底OD 值（完全培養基(jī)加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空(kōng)白藥(yào)物孔(kǒng)OD 值（完(wán)全(quán)培養基加受(shòu)試藥(yào)物(wù)的不(bù)同稀釋度加(jiā)MTT，無細胞），各重復孔的(dí)OD 值(zhí)取平(píng)均數(shù)±SD。細胞的存活(huó)率以(yǐ)T/C%表示(shì)，T 為加(jiā)藥細(xì)胞的OD 值，C 為(wéi)對(duì)照細胞的(dí)OD 值(zhí)。細胞存活(huó)率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細胞OD）×100
試劑(jì)盒(hé)使(shǐ)用(yòng)注意說明：
1.由(yóu)於(yú)現有(yǒu)條件及(jí)科(kē)學(xué)技術水平尚不(bù)能對所有(yǒu)供貨(huò)商提供的(dí)所(suǒ)有原料進行全麵的鑒(jiàn)定與分(fēn)析，本(běn)產(chǎn)品可(kě)能存在(zài)一(yī)定的質量技(jì)術風(fēng)險(xiǎn)。
2.最終(zhōng)的實(shí)驗(yàn)結果與(yǔ)試劑的(dí)有效(xiào)性，實驗(yàn)者(zhě)的相關操作以及當(dāng)時的(dí)實(shí)驗(yàn)環境密切相關，請務必(bì)準備充足(zú)的標(biāo)本(běn)備(bèi)份。
3.不(bù)同(tóng)批次(cì)的(dí)同一產品可(kě)能(néng)會有少(shǎo)許(xǔ)差別，如：檢(jiǎn)測(cè)限(xiàn)，靈(líng)敏(mǐn)度(dù)以及顯色(sè)時間等，請依據試劑(jì)盒內(nèi)說(shuō)明(míng)書進行實(shí)驗操作，網站電子版說(shuō)明(míng)書僅作(zuò)參(cān)考。
4.隻有全部(bù)使用本試劑盒配(pèi)套試劑才(cái)能(néng)保證(zhèng)檢測(cè)效(xiào)果，不能混(hùn)用其(qí)他(tā)製造商(shāng)的產品。隻有(yǒu)嚴(yán)格(gé)遵守本試(shì)劑(jì)盒(hé)的(dí)實(shí)驗說(shuō)明才(cái)會(huì)得到最(zuì)佳(jiā)的(dí)檢(jiǎn)測結果(guǒ)。
5.本公司(sī)隻對(duì)試劑盒(hé)本(běn)身負(fù)責，不(bù)對因(yīn)使用該試劑(jì)盒(hé)所(suǒ)造(zào)成(chéng)的(dí)樣本消耗(hào)負(fù)責，請使用者使用前充(chōng)分考慮到樣本的可(kě)能使用(yòng)量，預留充足的樣(yàng)本。
6.使用化(huà)學(xué)裂解液(yè)製(zhì)備的組織匀(yún)漿或細(xì)胞(bāo)提取液(yè)可(kě)能(néng)會由於某些化學物(wù)質(zhì)的引(yǐn)入導致(zhì)ELISA實驗(yàn)結(jié)果偏(piān)差。
7.若樣本為細(xì)胞(bāo)培養上(shàng)清(qīng)，因該(gāi)類樣本幹(gān)擾因素(sù)較(jiào)多，如：細胞(bāo)狀態，細胞(bāo)數(shù)量，采樣時間等，所(suǒ)以(yǐ)可能(néng)存(cún)在檢測不(bù)出的情(qíng)況。
8.某些(xiē)天然(rán)蛋白或(huò)重組蛋白，包(bāo)括原核及真核重組蛋(dàn)白(bái)，可(kě)能(néng)因(yīn)為(wéi)與本產品(pǐn)所使用的(dí)檢(jiǎn)測(cè)抗(kàng)體及(jí)捕獲抗體不匹配，而不被(bèi)檢(jiǎn)測出。