產品名(míng)稱：大鼠(shǔ)鞘(qiào)磷脂(zhī)(SM)酶(méi)聯(lián)免(miǎn)疫分析(xī)試劑(jì)盒(hé)

貨(huò)號：YS-R988

規格(gé)：48T／96T

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檢(jiǎn)測原理(lǐ)
試(shì)劑(jì)盒采用雙抗(kàng)體一步夾心法酶聯免疫吸(xī)附(fù)試驗（ELISA）
。往
預先(xiān)包被(bèi)活性(xìng)氧簇(cù)（ROS）抗(kàng)體的(dí)包(bāo)被(bèi)微(wēi)孔(kǒng)中(zhōng)，依次加(jiā)入(rù)標本
，標準
品(pǐn)
，HRP標(biāo)記的(dí)檢(jiǎn)測(cè)抗體，經過溫(wēn)育(yù)並徹底洗滌
。用(yòng)底(dǐ)物(wù)TMB顯(xiǎn)色，
TMB在過氧化(huà)物(wù)酶的催化下(xià)轉化成(chéng)藍色，並在(zài)酸的(dí)作(zuò)用(yòng)下轉化成最(zuì)終(zhōng)
的黃色(sè)
。顏色(sè)的(dí)深淺和樣品(pǐn)中的活(huó)性氧簇（ROS）呈(chéng)正(zhèng)相(xiāng)關
。用(yòng)酶(méi)標
儀在(zài)450nm 波長(cháng)下測(cè)定吸光度（OD 值(zhí)），計(jì)算樣品含量(liáng)
。
樣(yàng)品(pǐn)收集
，處理及保(bǎo)存方法
1. 血清(qīng)：使(shǐ)用(yòng)不含熱原和內(nèi)毒素的試(shì)管(guǎn)，操作過(guò)程(chéng)中(zhōng)避免任何(hé)細
胞(bāo)刺(cì)激(jī)，收集血(xiě)液後(hòu)，3000 轉(zhuǎn)離(lí)心(xīn) 10 分鐘將(jiāng)血(xiě)清和(hé)紅細(xì)胞迅速小(xiǎo)心(xīn)
地(dì)分離(lí)
。
2. 血漿：EDTA
，檸檬酸鹽(yán)或肝素抗凝(níng)
。3000 轉離(lí)心 30 分(fēn)鐘取(qǔ)上清(qīng)
。
3. 細胞上清液(yè)：3000 轉離(lí)心 10 分(fēn)鐘(zhōng)去除顆粒和聚合物(wù)
。
4. 組織匀漿：將組(zǔ)織(zhī)加入適(shì)量(liáng)生理鹽(yán)水(shuǐ)搗(dǎo)碎(suì)
。3000 轉(zhuǎn)離(lí)心(xīn) 10 分(fēn)鐘(zhōng)
取(qǔ)上清
。
5. 保(bǎo)存(cún)：如果(guǒ)樣本(běn)收集後不(bù)及時(shí)檢測，請按一次用(yòng)量分裝，凍存
於(yú)-20℃，避免(miǎn)反(fǎn)復凍融(róng)，在室(shì)溫下解凍並(bìng)確(què)保(bǎo)樣品均(jūn)匀地充分解(jiě)凍(dòng)
。
自備物(wù)品(pǐn)
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度(dù)加(jiā)樣(yàng)器及(jí)槍(qiāng)頭：0.5-10uL
，2-20uL
，20-200uL
，200-1000uL
3. 37℃恒(héng)溫箱
操作注(zhù)意事項(xiàng)
1. 試劑盒(hé)保存在 2-8℃，使用前(qián)室溫(wēn)平(píng)衡(héng) 20 分鐘
。從(cóng)冰箱取出(chū)的
濃縮洗(xǐ)滌液會有(yǒu)結晶，這屬於正(zhèng)常現(xiàn)象，水浴(yù)加熱(rè)使結(jié)晶完全溶解
後再使用
。
2. 實(shí)驗中不用的(dí)板(bǎn)條(tiáo)應立即(jí)放(fàng)回(huí)自封袋中，密封（低(dī)溫(wēn)幹燥(zào)）保(bǎo)
存(cún)
。
3. 濃度為(wéi) 0 的 S0 號(hào)標(biāo)準品(pǐn)即可視為陰(yīn)性對照(zhào)或者(zhě)空(kōng)白；按(àn)照(zhào)說(shuō)明
書操(cāo)作時樣(yàng)本已(yǐ)經稀(xī)釋(shì) 5 倍，最終(zhōng)結果(guǒ)乘以 5 才是樣本(běn)實際濃(nóng)度
。
4. 嚴格(gé)按(àn)照說明書中(zhōng)標(biāo)明的時(shí)間(jiān)
，加(jiā)液(yè)量(liáng)及(jí)順(shùn)序進行溫育操作(zuò)
。

5. 所有液體(tǐ)組(zǔ)分使(shǐ)用(yòng)前(qián)充分搖(yáo)匀(yún)
。

試(shì)劑的(dí)準(zhǔn)備
20×洗滌緩衝(chōng)液(yè)的稀(xī)釋：蒸(zhēng)餾水(shuǐ)按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌(dí)
緩衝液(yè)加 19 份的蒸(zhēng)餾(liù)水(shuǐ)
。
洗板(bǎn)方法(fǎ)
1. 手工洗板(bǎn)：甩(shuǎi)盡(jìn)孔內液體，每(měi)孔加(jiā)滿洗(xǐ)滌(dí)液(yè)，靜置 1min 後甩盡(jìn)
孔內液(yè)體(tǐ)，在吸水(shuǐ)紙上拍(pāi)幹，如此(cǐ)洗板 5 次
。
2. 自(zì)動(dòng)洗(xǐ)板機：每孔注入洗液(yè) 350μL，浸泡(pào) 1min，洗板(bǎn) 5 次
。
操(cāo)作(zuò)步驟(zhòu)
1. 從(cóng)室溫(wēn)平衡 20min 後的(dí)鋁(lǚ)箔(bó)袋中(zhōng)取(qǔ)出所(suǒ)需(xū)板條(tiáo)，剩(shèng)餘(yú)板條(tiáo)用自(zì)
封袋(dài)密封放(fàng)回(huí) 4℃
。
2. 設置(zhì)標準品孔和(hé)樣本(běn)孔，標準品(pǐn)孔(kǒng)各加不(bù)同(tóng)濃度的標準(zhǔn)品 50μ
L；
3. 樣(yàng)本孔(kǒng)先加(jiā)待(dài)測(cè)樣本(běn) 10μL，再加樣本稀(xī)釋(shì)液 40μL；空(kōng)白孔(kǒng)不
加
。
4. 除空白(bái)孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本(běn)孔(kǒng)中每(měi)孔加入(rù)辣(là)根過(guò)氧化(huà)物酶(méi)
（HRP）標(biāo)記的檢(jiǎn)測(cè)抗體 100μL，用封板(bǎn)膜(mó)封住(zhù)反(fǎn)應孔，37℃水(shuǐ)浴(yù)鍋(guō)
或(huò)恒溫箱(xiāng)溫育 60min
。
5. 棄去液體(tǐ)，吸水紙(zhǐ)上拍幹(gān)，每(měi)孔加(jiā)滿洗(xǐ)滌(dí)液(yè)，靜置(zhì) 1min，甩去(qù)
洗滌液(yè)，吸水(shuǐ)紙上(shàng)拍(pāi)幹，如此重(zhòng)復洗板 5 次(cì)（也可用(yòng)洗(xǐ)板機(jī)洗板）
。
6. 每孔加入底物 A
，B 各(gè) 50μL，37℃避光(guāng)孵(fū)育 15min
。
7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波(bō)長處(chǔ)測定各孔的(dí)
OD 值
。
大鼠鞘(qiào)磷(lín)脂(SM)酶聯免(miǎn)疫分(fēn)析試劑(jì)盒(hé)結果(guǒ)判斷
繪製標準曲綫(xiàn)：在 Excel 工作表(biǎo)中，以標(biāo)準品濃(nóng)度(dù)作(zuò)橫坐標(biāo)，對應(yīng)
OD 值作縱坐(zuò)標，繪製出標(biāo)準(zhǔn)品綫(xiàn)性回(huí)歸(guī)曲(qū)綫(xiàn)，按(àn)曲(qū)綫方程計(jì)算各(gè)樣
本濃度值
。