小鼠8-OHG elisa試(shì)劑盒(hé)

貨號：YS-S1356
規格：48T/96T

使(shǐ)用目的：

本試(shì)劑(jì)盒用(yòng)於測定小(xiǎo)鼠血清(qīng)，血漿及相關液體樣(yàng)本中小(xiǎo)鼠(shǔ)8-OHG含(hán)量。

實驗(yàn)原理

本試(shì)劑盒(hé)應用(yòng)雙抗(kàng)體夾(jiā)心法測定(dìng)標本中(zhōng)小鼠8-OHG水平。用(yòng)純化的小鼠(shǔ)8-OHG

抗體(tǐ)包被(bèi)微孔板，製(zhì)成固相(xiāng)抗體(tǐ)，往(wǎng)包被(bèi)單(dān)抗的(dí)微孔中依(yī)次(cì)加(jiā)入小(xiǎo)鼠8-OHG

，再(zài)與(yǔ) HRP 標(biāo)記的小(xiǎo)鼠8-OHG抗體結(jié)合(hé)，形成(chéng)抗(kàng)體(tǐ)-抗原(yuán)-酶標抗體(tǐ)復(fù)合(hé)物(wù)，經

過(guò)徹(chè)底洗滌後加底物(wù) TMB 顯(xiǎn)色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化(huà)成(chéng)藍色(sè)，並在(zài)酸(suān)的作(zuò)用下(xià)轉(zhuǎn)

化成最終(zhōng)的黃色。顏(yán)色(sè)的深(shēn)淺和樣品中(zhōng)的小(xiǎo)鼠8-OHG呈正相關。用(yòng)酶標儀在(zài) 450nm

波長下測定吸光度（OD 值(zhí)），通過(guò)標準(zhǔn)曲綫計算樣品(pǐn)中小鼠(shǔ)細菌脂多(duō)糖 (LPS)濃(nóng)度(dù)。

試(shì)劑盒組(zǔ)成

1 30 倍(bèi)濃縮洗滌液(yè) 20ml×1 瓶 7 終(zhōng)止液 6ml×1 瓶(píng)

2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(pǐn)（640ng/L） 0.5ml×1 瓶

3 酶(méi)標包(bāo)被板 12 孔(kǒng)×8 條 9 標準(zhǔn)品稀釋(shì)液 1.5ml×1 瓶

4 樣(yàng)品(pǐn)稀釋液(yè) 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份

5 顯(xiǎn)色(sè)劑(jì) A 液 6ml×1 瓶 11 封板(bǎn)膜 2 張(zhāng)

6 顯(xiǎn)色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封(fēng)袋(dài) 1 個

標(biāo)本(běn)要求(qiú)

1．標本(běn)采集(jí)後(hòu)盡早進(jìn)行提取，提取(qǔ)按相(xiāng)關(guān)文獻(xiàn)進行(háng)，提取後應盡快(kuài)進(jìn)行(háng)實驗(yàn)。若不能(néng)

馬(mǎ)上進行試驗，可將(jiāng)標(biāo)本放於(yú)-20℃保存，但應避(bì)免(miǎn)反復凍融

2．不能檢測含(hán) NaN3 的(dí)樣(yàng)品(pǐn)，因 NaN3 抑製(zhì)辣(là)根過氧化物(wù)酶(méi)的（HRP）活性(xìng)。

操(cāo)作(zuò)步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本(běn)試(shì)劑盒(hé)提供(gōng)原倍(bèi)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)一(yī)支(zhī)，用戶(hù)可(kě)按(àn)照下列圖(tú)表在(zài)小試(shì)管中(zhōng)進行(háng)稀

釋。

320ng/L 5 號標(biāo)準品 150μl 的原(yuán)倍(bèi)標準(zhǔn)品加(jiā)入(rù) 150μl 標準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋液(yè)

160ng/L 4 號(hào)標準品 150μl 的(dí) 5 號(hào)標準(zhǔn)品加入(rù) 150μl 標準品(pǐn)稀釋液

80ng/L 3 號標(biāo)準品(pǐn) 150μl 的 4 號標準品(pǐn)加(jiā)入(rù) 150μl 標準品稀(xī)釋(shì)液

40ng/L 2 號(hào)標準品 150μl 的 3 號標準品加入(rù) 150μl 標準品稀釋液

20ng/L 1 號標準(zhǔn)品(pǐn) 150μl 的(dí) 2 號標準品(pǐn)加(jiā)入 150μl 標準品稀(xī)釋液(yè)

2. 加(jiā)樣：分別設(shè)空白(bái)孔(kǒng)（空白對(duì)照(zhào)孔不加樣(yàng)品及酶標試劑(jì)，其(qí)餘各(gè)步操(cāo)作(zuò)相同(tóng)），標準孔(kǒng)，

待(dài)測樣品孔。在酶(méi)標(biāo)包(bāo)被板(bǎn)上(shàng)標準品(pǐn)準(zhǔn)確加(jiā)樣 50μl，待(dài)測樣品(pǐn)孔中(zhōng)先(xiān)加樣(yàng)品稀(xī)釋液 40μl，

然後再加待(dài)測樣品 10μl（樣品最終稀(xī)釋度為 5 倍）。加樣(yàng)將樣品(pǐn)加(jiā)於(yú)酶標板孔底部，盡

量不觸及孔壁，輕(qīng)輕晃(huǎng)動混(hùn)匀。

3. 溫育：用(yòng)封(fēng)板膜封板(bǎn)後置 37℃溫(wēn)育(yù) 30 分(fēn)鐘。

4. 配(pèi)液(yè)：將 30 倍濃縮(suō)洗滌液用(yòng)蒸餾(liù)水 30 倍稀(xī)釋(shì)後備用

5. 洗(xǐ)滌(dí)：小心(xīn)揭(jiē)掉(diào)封板膜(mó)，棄(qì)去液體，甩幹(gān)，每(měi)孔加滿洗滌液(yè)，靜置(zhì) 30 秒(miǎo)後(hòu)棄(qì)去，如(rú)此

重復(fù) 5 次(cì)，拍(pāi)幹(gān)。

6. 加(jiā)酶：每孔(kǒng)加入(rù)酶(méi)標試劑 50μl，空白(bái)孔除(chú)外(wài)。

7. 溫育(yù)：操作同(tóng) 3。

8. 洗(xǐ)滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔(kǒng)先加入顯色劑 A50μl，再加入顯(xiǎn)色(sè)劑 B50μl，輕輕(qīng)震(zhèn)蕩(dàng)混匀(yún)，37℃避(bì)光(guāng)顯色

10 分(fēn)鐘(zhōng).

10. 終止：每(měi)孔(kǒng)加終(zhōng)止液 50μl，終止(zhǐ)反(fǎn)應（此(cǐ)時藍(lán)色立(lì)轉黃色(sè)）。

11. 測(cè)定：以(yǐ)空白(bái)孔調(tiáo)零(líng)，450nm 波(bō)長依序測量(liáng)各孔的吸(xī)光度（OD 值）。 測定應在加終止(zhǐ)

液(yè)後 15 分(fēn)鐘以內進(jìn)行(háng)。

操(cāo)作程序(xù)總(zǒng)結：

 小鼠(shǔ)8-OHG elisa試劑盒計算

以(yǐ)標準物(wù)的濃度(dù)為橫(héng)坐(zuò)標(biāo)，OD 值(zhí)為(wéi)縱坐標(biāo)，在(zài)坐標紙(zhǐ)上(shàng)繪出(chū)標準(zhǔn)曲(qū)綫(xiàn)，根據(jù)樣品的

OD 值(zhí)由標(biāo)準曲(qū)綫(xiàn)查出相應(yīng)的濃(nóng)度；再乘(chéng)以稀釋(shì)倍數；或用(yòng)標準物(wù)的濃度與(yǔ) OD 值計(jì)算(suàn)出(chū)標

準曲綫(xiàn)的直綫(xiàn)回(huí)歸方程式，將(jiāng)樣品(pǐn)的 OD 值代入方(fāng)程(chéng)式(shì)，計算(suàn)出樣品濃度，再乘以(yǐ)稀(xī)釋(shì)倍數(shù)，

即(jí)為(wéi)樣品的實際(jì)濃度(dù)。

注(zhù)意(yì)事(shì)項(xiàng)

1．試劑(jì)盒從冷(lěng)藏(cáng)環(huán)境中取(qǔ)出(chū)應在室溫(wēn)平衡(héng) 15-30 分鐘後方可(kě)使用，酶標(biāo)包被(bèi)板開封(fēng)後如(rú)未

用(yòng)完(wán)，板條應裝(zhuāng)入密(mì)封袋(dài)中(zhōng)保存(cún)。

2．濃(nóng)洗(xǐ)滌液可能會有結晶(jīng)析出，稀釋(shì)時可(kě)在水浴中加溫(wēn)助溶，洗(xǐ)滌時不(bù)影響結(jié)果。

3．各步加樣均應使(shǐ)用加(jiā)樣器(qì)，並經(jīng)常校對(duì)其準確性(xìng)，以避免(miǎn)試驗誤(wù)差。一次加(jiā)樣(yàng)時間最好(hǎo)

控製(zhì)在(zài) 5 分(fēn)鐘內(nèi)，如標本(běn)數量多，推(tuī)薦使用排(pái)槍(qiāng)加樣。

4． 請每(měi)次(cì)測(cè)定(dìng)的同時做標準(zhǔn)曲綫(xiàn)，最好(hǎo)做復(fù)孔。如(rú)標本中待測物質(zhì)含(hán)量過(guò)高（樣本 OD 值

大(dà)於(yú)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)孔第(dì)一孔(kǒng)的(dí) OD 值），請(qǐng)先(xiān)用樣品(pǐn)稀(xī)釋液(yè)稀(xī)釋(shì)一(yī)定倍(bèi)數(shù)（n 倍(bèi)）後再測(cè)定(dìng)，計

算時請(qǐng)最後(hòu)乘以(yǐ)總稀釋(shì)倍數(shù)（×n×5）。

5． 封(fēng)板膜隻限(xiàn)一次(cì)性使(shǐ)用，以(yǐ)避免(miǎn)交叉汙(wū)染。

6．底(dǐ)物(wù)請(qǐng)避光(guāng)保(bǎo)存。

7．嚴格(gé)按(àn)照(zhào)說(shuō)明(míng)書(shū)的(dí)操(cāo)作(zuò)進(jìn)行(háng)，試驗結(jié)果判定(dìng)必(bì)須以(yǐ)酶標(biāo)儀讀(dú)數為準. 8．所(suǒ)有樣(yàng)品(pǐn)，洗(xǐ)滌液(yè)和各種(zhǒng)廢(fèi)棄(qì)物(wù)都(dū)應按傳染物處理。

9．本試劑(jì)不同批(pī)號組(zǔ)分不得混用(yòng)。

保存條件及有效期

1．試劑(jì)盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月(yuè)