本試劑盒僅供研究(jiū)使(shǐ)用。

貨號：YS-SH3682
檢(jiǎn)測範圍(wéi)：                                                          96T

1IU/L-50IU/L

使用(yòng)目(mù)的：

本(běn)試劑盒用於(yú)測(cè)定(dìng)人(rén)血清，血漿及相關液(yè)體樣(yàng)本中(zhōng)精氨基(jī)琥珀(pò)酸合成酶1(ASS1)活性(xìng)。

實(shí)驗原理

本試(shì)劑(jì)盒應(yīng)用雙(shuāng)抗(kàng)體夾(jiā)心(xīn)法測定標本中人精氨(ān)基琥珀酸(suān)合成(chéng)酶(méi)1(ASS1)水平(píng)。用純化的(dí)人(rén)精(jīng)氨(ān)基琥(hǔ)珀酸合成酶1(ASS1)抗(kàng)體包(bāo)被(bèi)微孔板(bǎn)，製(zhì)成(chéng)固相抗(kàng)體，往包被(bèi)單(dān)抗的微孔(kǒng)中依次(cì)加(jiā)入精氨基琥(hǔ)珀(pò)酸合成酶(méi)1(ASS1)，再(zài)與(yǔ)HRP標記的精氨基(jī)琥珀(pò)酸(suān)合成酶1(ASS1)抗體(tǐ)結合，形(xíng)成(chéng)抗體-抗原-酶標抗(kàng)體(tǐ)復合(hé)物，經過(guò)徹底洗滌(dí)後加(jiā)底物(wù)TMB顯(xiǎn)色。TMB在HRP酶的催(cuī)化下轉(zhuǎn)化成(chéng)藍色，並(bìng)在酸(suān)的(dí)作用(yòng)下轉(zhuǎn)化(huà)成最(zuì)終的(dí)黃色(sè)。顏色(sè)的(dí)深(shēn)淺(qiǎn)和樣品中的精氨基琥(hǔ)珀(pò)酸合成酶(méi)1(ASS1)呈正(zhèng)相關。用酶標儀在450nm波(bō)長下(xià)測(cè)定吸(xī)光度(dù)（OD值(zhí)），通(tōng)過(guò)標準曲綫(xiàn)計算(suàn)樣品(pǐn)中(zhōng)人精(jīng)氨基琥(hǔ)珀酸(suān)合(hé)成酶(méi)1(ASS1)活性濃度。

試(shì)劑(jì)盒組成(chéng)

標(biāo)本要求 

1．標(biāo)本(běn)采集(jí)後(hòu)盡(jìn)早進行(háng)提(tí)取(qǔ)，提(tí)取(qǔ)按(àn)相關文(wén)獻進行，提取(qǔ)後(hòu)應(yīng)盡快進行實(shí)驗。若不能(néng)馬上(shàng)進行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放於(yú)-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不(bù)能(néng)檢測含NaN3的樣(yàng)品，因NaN3抑(yì)製辣根(gēn)過氧化物(wù)酶的(dí)（HRP）活(huó)性(xìng)。

操(cāo)作(zuò)步驟

1. 標(biāo)準品(pǐn)的(dí)稀釋(shì)：本試劑盒提(tí)供原(yuán)倍(bèi)標準(zhǔn)品(pǐn)一(yī)支，用(yòng)戶(hù)可(kě)按(àn)照(zhào)下列圖表(biǎo)在小試管中(zhōng)進行(háng)稀(xī)釋。

2. 加(jiā)樣(yàng)：分別設空白(bái)孔（空白對照(zhào)孔不加樣品及(jí)酶標(biāo)試(shì)劑(jì)，其餘(yú)各(gè)步(bù)操(cāo)作(zuò)相同(tóng)），標(biāo)準孔，待(dài)測樣(yàng)品(pǐn)孔。在(zài)酶標包被板(bǎn)上(shàng)標準品準確(què)加(jiā)樣50μl，待測樣品(pǐn)孔(kǒng)中先加(jiā)樣品稀(xī)釋液40μl，然後(hòu)再加(jiā)待測(cè)樣(yàng)品(pǐn)10μl（樣(yàng)品最終稀釋度(dù)為5倍）。加樣將樣品加於(yú)酶標板孔(kǒng)底部，盡(jìn)量不觸(chù)及孔壁(bì)，輕輕(qīng)晃動(dòng)混(hùn)匀。

3. 溫(wēn)育：用(yòng)封板膜(mó)封(fēng)板(bǎn)後置37℃溫(wēn)育(yù)30分(fēn)鐘(zhōng)。   

4. 配(pèi)液：將30倍(bèi)（48T的(dí)20倍）濃縮洗滌(dí)液用蒸(zhēng)餾水30倍稀釋(shì)後備(bèi)用(yòng)

5. 洗(xǐ)滌(dí)：小(xiǎo)心(xīn)揭(jiē)掉(diào)封(fēng)板(bǎn)膜(mó)，棄去液體(tǐ)，甩幹(gān)，每孔加(jiā)滿(mǎn)洗(xǐ)滌液，靜置30秒後(hòu)棄去(qù)，如此重復5次，拍(pāi)幹(gān)。

6. 加(jiā)酶(méi)：每孔加入酶標試(shì)劑50μl，空(kōng)白(bái)孔除(chú)外。

7. 溫(wēn)育：操作同(tóng)3。

8. 洗滌(dí)：操(cāo)作同5。

9. 顯色：每孔(kǒng)先(xiān)加(jiā)入顯色(sè)劑(jì)A50μl，再(zài)加入顯(xiǎn)色劑B50μl，輕(qīng)輕震(zhèn)蕩混(hùn)匀(yún)，37℃避光顯(xiǎn)色(sè)10分(fēn)鐘.

10. 終止(zhǐ)：每(měi)孔加終(zhōng)止液50μl，終止(zhǐ)反應（此時藍(lán)色立(lì)轉黃(huáng)色(sè)）。

11. 測(cè)定(dìng)：以(yǐ)空(kōng)白空調零(líng)，450nm波長依序測量各孔(kǒng)的吸光(guāng)度（OD值）。 測(cè)定(dìng)應在(zài)加(jiā)終止液後15分鐘以(yǐ)內(nèi)進行。

操作程序總結：

計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的(dí)濃度為橫坐(zuò)標，OD值為縱坐(zuò)標，在(zài)坐標紙上(shàng)繪出標準曲綫(xiàn)，根(gēn)據樣(yàng)品的(dí)OD值由標準(zhǔn)曲(qū)綫(xiàn)查(chá)出(chū)相應的濃(nóng)度；再乘以稀釋倍(bèi)數(shù)；或(huò)用(yòng)標準(zhǔn)物的(dí)濃度與OD值計算出(chū)標準曲(qū)綫的直(zhí)綫(xiàn)回(huí)歸方程式，將樣(yàng)品(pǐn)的OD值代入方程(chéng)式(shì)，計算(suàn)出樣(yàng)品濃(nóng)度，再(zài)乘以稀釋(shì)倍數(shù)，即為樣(yàng)品(pǐn)的實(shí)際濃(nóng)度(dù)。

注(zhù)意(yì)事項(xiàng)

1．試(shì)劑盒從(cóng)冷(lěng)藏環境(jìng)中取(qǔ)出(chū)應(yīng)在(zài)室(shì)溫(wēn)平(píng)衡15-30分(fēn)鐘(zhōng)後方(fāng)可使(shǐ)用(yòng)，酶(méi)標(biāo)包(bāo)被板(bǎn)開(kāi)封(fēng)後如(rú)未(wèi)用完，板條(tiáo)應裝入密封袋(dài)中保(bǎo)存。

2．濃(nóng)洗(xǐ)滌(dí)液可能會(huì)有結晶析(xī)出，稀釋時(shí)可(kě)在水(shuǐ)浴中(zhōng)加溫(wēn)助溶(róng)，洗滌時(shí)不影響(xiǎng)結果。

3．各(gè)步加(jiā)樣(yàng)均(jūn)應使用(yòng)加樣器，並經(jīng)常校對其準確性，以(yǐ)避免試(shì)驗誤(wù)差。一次(cì)加樣(yàng)時(shí)間(jiān)最(zuì)好控(kòng)製(zhì)在(zài)5分鐘內(nèi)，如(rú)標(biāo)本(běn)數量多，推薦使(shǐ)用排槍加樣。

4． 請(qǐng)每次測(cè)定的(dí)同時做標準(zhǔn)曲(qū)綫，最好做(zuò)復(fù)孔。如標本中(zhōng)待(dài)測物質含量(liáng)過高（樣本OD值(zhí)大(dà)於標準品孔第(dì)一孔(kǒng)的(dí)OD值(zhí)），請先(xiān)用(yòng)樣(yàng)品(pǐn)稀釋液(yè)稀釋一定(dìng)倍(bèi)數(shù)（n倍）後再測定，計算時請最(zuì)後(hòu)乘以總稀釋(shì)倍數(shù)（×n×5）。

5． 封(fēng)板(bǎn)膜(mó)隻(zhī)限(xiàn)一(yī)次性使(shǐ)用(yòng)，以避(bì)免(miǎn)交(jiāo)叉汙染。

6．底物請(qǐng)避光保存。

7．嚴格按照說明書的操(cāo)作進行(háng)，試驗結(jié)果判(pàn)定(dìng)必須(xū)以(yǐ)酶標儀讀數(shù)為(wéi)準.

8．所(suǒ)有樣品(pǐn)，洗(xǐ)滌(dí)液和(hé)各種(zhǒng)廢棄物(wù)都(dū)應(yīng)按傳(chuán)染(rǎn)物處理(lǐ)。

9．本試劑不同批號組(zǔ)分(fēn)不(bù)得(dé)混(hùn)用(yòng)。

保存(cún)條(tiáo)件(jiàn)及有效期

1．試(shì)劑盒(hé)保(bǎo)存(cún)：；2-8℃。

2．有效期：6個月(yuè)