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PCR檢(jiǎn)測試劑盒(hé)
商品屬(shǔ)性(xìng)
| 產品名稱 | 英文名稱 | 貨(huò)號(hào) |
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伯克(kè)氏菌(jūn)通(tōng)用PCR檢(jiǎn)測(cè)試(shì)劑盒 |
Burkholderia spp.PCR |
YS-P013969 |
分類：PCR檢(jiǎn)測試劑盒
儲存條件：-20℃避光保(bǎo)存(cún)，避免(miǎn)反復(fù)凍(dòng)融(róng)。
運輸：低(dī)溫，避光(guāng)。
有效(xiào)期：一(yī)年
貨(huò)期：現貨(huò)PCR試劑盒(hé)的有(yǒu)效(xiào)期一(yī)般(bān)為1年(nián)，這是(shì)指(zhǐ)在(zài)適當(dāng)的(dí)儲(chǔ)存溫度(dù)下(xià)。核酸(suān)擴增(zēng)部分的(dí)試(shì)劑(jì)一般(bān)要(yào)貯存於-20℃下，產物檢測(cè)部分試(shì)劑(jì)則(zé)貯(zhù)存於2-8℃。盡量避免反復(fù)凍融。
【結果(guǒ)分析條(tiáo)件(jiàn)設(shè)定】
u 閾(yù)值(Threshold)設(shè)定：將(jiāng)閾(yù)值(zhí)綫設(shè)定在剛好超過正常陰性(xìng)質(zhì)控(kòng)品擴增(zēng)曲綫的(dí)最(zuì)高(gāo)點。
【質控(kòng)標(biāo)準】
2. 陽(yáng)性質控品(pǐn)的檢(jiǎn)測(cè)結(jié)果應為陽性(xìng)，有(yǒu)明顯的指數擴(kuò)增期，Ct值應(yīng)小(xiǎo)於等(děng)於35；
3. 以上(shàng)要(yào)求需在(zài)一次(cì)實驗中(zhōng)同(tóng)時滿(mǎn)足，否則該(gāi)次(cì)實(shí)驗視(shì)為(wéi)無效(xiào)。
【結(jié)果判斷】
2.可(kě)疑(yí)：有明顯的指數擴增期(qī)，且38≤Ct<40，此(cǐ)時(shí)樣本為(wéi)可疑(yí)樣本(běn)；對(duì)於(yú)可(kě)疑樣本建(jiàn)議復(fù)核一次，若(ruò)復核(hé)結(jié)果(guǒ)Ct<40且(qiě)有指數擴增(zēng)期(qī)，則判定為陽性，否(fǒu)則(zé)判(pàn)定為陰(yīn)性(xìng)；
3. 陰(yīn)性(xìng)：無指(zhǐ)數擴(kuò)增期，Ct=40或(huò)無Ct值均(jūn)判定為(wéi)陰性樣本。
【對檢(jiǎn)驗結果的(dí)解釋】
1. 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境汙染(rǎn)，試劑汙染(rǎn)，樣(yàng)品(pǐn)交叉(chā)汙染會(huì)出(chū)現(xiàn)假(jiǎ)陽性結(jié)果；
2. 試劑運輸，保存(cún)不當(dāng)或(huò)試(shì)劑(jì)配製不準(zhǔn)確引(yǐn)起(qǐ)的(dí)試(shì)劑檢(jiǎn)測效能下(xià)降，可能(néng)會導(dǎo)致(zhì)出現假陰性結(jié)果。
PCR反(fǎn)應的特(tè)異(yì)性(xìng)：
②鹼基配(pèi)對原則(zé)；
③Taq DNA聚合酶(méi)合(hé)成(chéng)反應的忠實(shí)性(xìng)；
④靶基(jī)因的(dí)特異(yì)性與保守性。
伯克氏菌通(tōng)用PCR檢測(cè)試(shì)劑盒(hé)其(qí)中引物與模(mó)板的(dí)正確(què)結合(hé)是關鍵(jiàn)。引(yǐn)物與(yǔ)模板的結(jié)合及引物鏈(liàn)的延(yán)伸是遵(zūn)循鹼基配(pèi)對(duì)原(yuán)則(zé)的。聚合(hé)酶合成反應的忠(zhōng)實性及(jí)Taq DNA聚(jù)合酶(méi)耐高溫性，使反(fǎn)應中模板與引物的結合(復性)可以在(zài)較高的溫(wēn)度(dù)下(xià)進(jìn)行，結合的(dí)特(tè)異(yì)性(xìng)大(dà)大增(zēng)加，被擴增的(dí)靶基因(yīn)片(piàn)段(duàn)也就能保(bǎo)持(chí)很高的正確度。再通過選擇特異性和(hé)保守(shǒu)性(xìng)高(gāo)的(dí)靶(bǎ)基(jī)因區(qū)，其特(tè)異(yì)性程(chéng)度就更高(gāo)。
(2) 靈敏度高
PCR產物的(dí)生成量是以(yǐ)指數方(fāng)式(shì)增(zēng)加的，能將皮(pí)克(pg=10-12g)量(liáng)級(jí)的起始待(dài)測模(mó)板擴增到微(wēi)克(ug=10-6g)水(shuǐ)平。能從100萬個(gè)細胞中(zhōng)檢(jiǎn)出一個靶(bǎ)細胞(bāo)；在(zài)病(bìng)毒(dú)的(dí)檢(jiǎn)測(cè)中，PCR的(dí)靈(líng)敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑(bān)形成(chéng)單(dān)位)；在細菌學中(zhōng)zui小檢(jiǎn)出率為(wéi)3個細(xì)菌。
(3) 簡便(biàn)，快(kuài)速
PCR反(fǎn)應(yīng)用(yòng)耐高(gāo)溫(wēn)的(dí)Taq DNA聚合酶(méi)，一(yī)次性地將反(fǎn)應液(yè)加好後，即(jí)在DNA擴增液(yè)和水浴(yù)鍋上(shàng)進行變性-退(tuì)火-延(yán)伸反(fǎn)應，一(yī)般(bān)在2～4 小(xiǎo)時(shí)完成擴(kuò)增(zēng)反應。擴(kuò)增產物一(yī)般用電泳分析(xī)，不一定要(yào)用同位素，無放(fàng)射(shè)性(xìng)汙染，易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純(chún)度(dù)要求低(dī)
不(bù)需(xū)要分離病(bìng)毒或細菌(jūn)及培(péi)養細(xì)胞(bāo)，DNA 粗(cū)製(zhì)品(pǐn)及總RNA均(jūn)可作為擴增(zēng)模板。可直接用臨(lín)床標(biāo)本(běn)如(rú)血液，體(tǐ)腔液，洗嗽液，毛發，細胞(bāo)，活(huó)PCR技術概(gài)論(lùn)。
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