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雞腺病(bìng)毒抗(kàng)體(tǐ)(ADV-Ab)Elisa試劑盒(hé)操作(zuò)事項
雞腺(xiàn)病毒(dú)抗體(ADV-Ab)Elisa試劑(jì)盒操作事(shì)項(xiàng):
1. 試(shì)劑(jì)準(zhǔn)備(bèi):所有試(shì)劑(jì)都必(bì)須(xū)在使用(yòng)前達到室溫(wēn),使用後(hòu)請立即(jí)按(àn)照(zhào)說明書要求保(bǎo)存(cún)試(shì)劑(jì)。 實驗操作(zuò)中請使用一(yī)次性的吸頭(tóu),避(bì)免(miǎn)交(jiāo)叉(chā)汙染(rǎn)。
2. 加(jiā)樣:加(jiā)樣(yàng)或加試(shì)劑(jì)時(shí),請(qǐng)注(zhù)意(yì)在吸(xī)取標本 / 標準品(pǐn),酶結合(hé)物或(huò)底物(wù)時,*個孔與(yǔ)zui後一(yī)個孔(kǒng)加(jiā)樣(yàng)之間(jiān)的(dí)時間(jiān)間(jiān)隔(gé)如果太(tài)大(dà),將會導致不(bù)同的(dí) “預(yù)孵育(yù)"時間,從而(ér)明顯(xiǎn)地影響(xiǎng)到測量值的準(zhǔn)確性(xìng)及(jí)重(zhòng)復(fù)性(xìng)。一(yī)次加樣(yàng)時間(jiān)(包(bāo)括(kuò)標(biāo)準品(pǐn)及(jí)所(suǒ)有樣品)控製(zhì)在10分鐘(zhōng)內(nèi),如標(biāo)本(běn)數(shù)量多(duō),推(tuī)薦(jiàn)使(shǐ)用(yòng)多道移(yí)液(yè)器(qì)加樣。
3. 孵(fū)育:為防(fáng)止(zhǐ)樣品蒸(zhēng)發(fā),試(shì)驗時將反應(yīng)板放於鋪有(yǒu)濕布的(dí)密閉盒內(nèi),酶(méi)標板加上(shàng)蓋(gài)或覆膜,以避免(miǎn)液(yè)體蒸發;洗(xǐ)板(bǎn)後應盡(jìn)快進(jìn)行下步(bù)操(cāo)作(zuò),任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處於(yú)幹(gān)燥狀(zhuàng)態(tài);同時應嚴格遵守給定(dìng)的孵(fū)育時(shí)間(jiān)和(hé)溫(wēn)度(dù)。
4. 洗滌(dí):洗滌(dí)過(guò)程(chéng)中反應(yīng)孔中殘(cán)留的(dí)洗滌(dí)液應在(zài)濾(lǜ)紙上(shàng)充分拍幹,勿將濾(lǜ)紙直接放入反應孔(kǒng)中吸(xī)水,同時(shí)要(yào)消除板底(dǐ)殘留的液(yè)體和(hé)手(shǒu)指(zhǐ)印(yìn),避(bì)免(miǎn)影(yǐng)響(xiǎng)zui後的酶標(biāo)儀讀(dú)數。
5. 試(shì)劑(jì)配製:Detection A及Detection B在(zài)使用前(qián)請(qǐng)手甩(shuǎi)幾下(xià)或少(shǎo)時(shí)離(lí)心處理(lǐ),以(yǐ)使(shǐ)管(guǎn)壁或(huò)瓶(píng)蓋的(dí)液體(tǐ)沉(chén)積到(dào)管底。標準(zhǔn)品,檢(jiǎn)測溶(róng)液A工(gōng)作(zuò)液(yè),檢(jiǎn)測溶液(yè)B工作(zuò)液請(qǐng)依據所需的量配(pèi)置(zhì)使用,並(bìng)使(shǐ)用(yòng)相應(yīng)的(dí)稀(xī)釋(shì)液(yè)配製(zhì),不能(néng)混淆。請(qǐng)配置標準(zhǔn)品(pǐn)及工(gōng)作液(yè),盡量(liáng)不要微量(liáng)配置(如吸(xī)取(qǔ)檢(jiǎn)測溶液A時(shí),一次不(bù)要(yào)小(xiǎo)於(yú)10μl),以避免由於不(bù)準(zhǔn)確稀釋而(ér)造成(chéng)的濃度(dù)誤差;請勿重復使用已稀釋過(guò)的(dí)標(biāo)準品(pǐn),檢測溶(róng)液A工(gōng)作液(yè)或(huò)檢測溶液B工作(zuò)液。
6. 反(fǎn)應時(shí)間(jiān)的(dí)控(kòng)製:加入底物後請定時(shí)觀(guān)察反(fǎn)應(yīng)孔的顏(yán)色變化(huà)(比(bǐ)如,每隔(gé)10分鐘),如(rú)顏色(sè)較(jiào)深,請(qǐng)提(tí)前加(jiā)入終止液(yè)終(zhōng)止反(fǎn)應(yīng),避免反應(yīng)過強從而影響(xiǎng)酶(méi)標(biāo)儀(yí)光密度讀(dú)數(shù)。
7. 底物(wù):底物請避光保存,在(zài)儲(chǔ)存和溫(wēn)育時(shí)避(bì)免強光直接(jiē)照射。
建(jiàn)議(yì)檢(jiǎn)測樣品(pǐn)時均(jūn)設雙孔(kǒng)測(cè)定,以保(bǎo)證(zhèng)檢測(cè)結(jié)果(guǒ)的(dí)準(zhǔn)確(què)性(xìng)。
如標(biāo)本中(zhōng)待(dài)測(cè)物(wù)質含(hán)量過高,請(qǐng)先稀(xī)釋後再(zài)測定(dìng),計(jì)算(suàn)時(shí)請(qǐng)zui後(hòu)乘以稀釋倍數(shù)。
【洗板(bǎn)方(fāng)法(fǎ)】:
1. 手工(gōng)洗板方法(fǎ):吸(xī)去(不(bù)可觸(chù)及板壁)或(huò)甩(shuǎi)掉酶(méi)標板內(nèi)的(dí)液(yè)體;在(zài)實(shí)驗(yàn)台上(shàng)鋪墊幾(jī)層(céng)吸水(shuǐ)紙(zhǐ),酶(méi)標(biāo)板朝(zhāo)下(xià)用力拍幾次;將(jiāng)推薦的洗滌緩(huǎn)衝液(yè)至(zhì)少0.3ml注(zhù)入孔(kǒng)內,浸泡1-2分鐘(zhōng),根據需(xū)要,重復此過程(chéng)數(shù)次(cì)。
2. 自動洗板:如果有(yǒu)自動(dòng)洗板機(jī),應在熟練使(shǐ)用(yòng)後再用到正式(shì)實驗過程(chéng)中。
1. 試(shì)劑(jì)準(zhǔn)備(bèi):所有試(shì)劑(jì)都必(bì)須(xū)在使用(yòng)前達到室溫(wēn),使用後(hòu)請立即(jí)按(àn)照(zhào)說明書要求保(bǎo)存(cún)試(shì)劑(jì)。 實驗操作(zuò)中請使用一(yī)次性的吸頭(tóu),避(bì)免(miǎn)交(jiāo)叉(chā)汙染(rǎn)。
2. 加(jiā)樣:加(jiā)樣(yàng)或加試(shì)劑(jì)時(shí),請(qǐng)注(zhù)意(yì)在吸(xī)取標本 / 標準品(pǐn),酶結合(hé)物或(huò)底物(wù)時,*個孔與(yǔ)zui後一(yī)個孔(kǒng)加(jiā)樣(yàng)之間(jiān)的(dí)時間(jiān)間(jiān)隔(gé)如果太(tài)大(dà),將會導致不(bù)同的(dí) “預(yù)孵育(yù)"時間,從而(ér)明顯(xiǎn)地影響(xiǎng)到測量值的準(zhǔn)確性(xìng)及(jí)重(zhòng)復(fù)性(xìng)。一(yī)次加樣(yàng)時間(jiān)(包(bāo)括(kuò)標(biāo)準品(pǐn)及(jí)所(suǒ)有樣品)控製(zhì)在10分鐘(zhōng)內(nèi),如標(biāo)本(běn)數(shù)量多(duō),推(tuī)薦(jiàn)使(shǐ)用(yòng)多道移(yí)液(yè)器(qì)加樣。
3. 孵(fū)育:為防(fáng)止(zhǐ)樣品蒸(zhēng)發(fā),試(shì)驗時將反應(yīng)板放於鋪有(yǒu)濕布的(dí)密閉盒內(nèi),酶(méi)標板加上(shàng)蓋(gài)或覆膜,以避免(miǎn)液(yè)體蒸發;洗(xǐ)板(bǎn)後應盡(jìn)快進(jìn)行下步(bù)操(cāo)作(zuò),任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處於(yú)幹(gān)燥狀(zhuàng)態(tài);同時應嚴格遵守給定(dìng)的孵(fū)育時(shí)間(jiān)和(hé)溫(wēn)度(dù)。
4. 洗滌(dí):洗滌(dí)過(guò)程(chéng)中反應(yīng)孔中殘(cán)留的(dí)洗滌(dí)液應在(zài)濾(lǜ)紙上(shàng)充分拍幹,勿將濾(lǜ)紙直接放入反應孔(kǒng)中吸(xī)水,同時(shí)要(yào)消除板底(dǐ)殘留的液(yè)體和(hé)手(shǒu)指(zhǐ)印(yìn),避(bì)免(miǎn)影(yǐng)響(xiǎng)zui後的酶標(biāo)儀讀(dú)數。
5. 試(shì)劑(jì)配製:Detection A及Detection B在(zài)使用前(qián)請(qǐng)手甩(shuǎi)幾下(xià)或少(shǎo)時(shí)離(lí)心處理(lǐ),以(yǐ)使(shǐ)管(guǎn)壁或(huò)瓶(píng)蓋的(dí)液體(tǐ)沉(chén)積到(dào)管底。標準(zhǔn)品,檢(jiǎn)測溶(róng)液A工(gōng)作(zuò)液(yè),檢(jiǎn)測溶液(yè)B工作(zuò)液請(qǐng)依據所需的量配(pèi)置(zhì)使用,並(bìng)使(shǐ)用(yòng)相應(yīng)的(dí)稀(xī)釋(shì)液(yè)配製(zhì),不能(néng)混淆。請(qǐng)配置標準(zhǔn)品(pǐn)及工(gōng)作液(yè),盡量(liáng)不要微量(liáng)配置(如吸(xī)取(qǔ)檢(jiǎn)測溶液A時(shí),一次不(bù)要(yào)小(xiǎo)於(yú)10μl),以避免由於不(bù)準(zhǔn)確稀釋而(ér)造成(chéng)的濃度(dù)誤差;請勿重復使用已稀釋過(guò)的(dí)標(biāo)準品(pǐn),檢測溶(róng)液A工(gōng)作液(yè)或(huò)檢測溶液B工作(zuò)液。
6. 反(fǎn)應時(shí)間(jiān)的(dí)控(kòng)製:加入底物後請定時(shí)觀(guān)察反(fǎn)應(yīng)孔的顏(yán)色變化(huà)(比(bǐ)如,每隔(gé)10分鐘),如(rú)顏色(sè)較(jiào)深,請(qǐng)提(tí)前加(jiā)入終止液(yè)終(zhōng)止反(fǎn)應(yīng),避免反應(yīng)過強從而影響(xiǎng)酶(méi)標(biāo)儀(yí)光密度讀(dú)數(shù)。
7. 底物(wù):底物請避光保存,在(zài)儲(chǔ)存和溫(wēn)育時(shí)避(bì)免強光直接(jiē)照射。
建(jiàn)議(yì)檢(jiǎn)測樣品(pǐn)時均(jūn)設雙孔(kǒng)測(cè)定,以保(bǎo)證(zhèng)檢測(cè)結(jié)果(guǒ)的(dí)準(zhǔn)確(què)性(xìng)。
如標(biāo)本中(zhōng)待(dài)測(cè)物(wù)質含(hán)量過高,請(qǐng)先稀(xī)釋後再(zài)測定(dìng),計(jì)算(suàn)時(shí)請(qǐng)zui後(hòu)乘以稀釋倍數(shù)。
【洗板(bǎn)方(fāng)法(fǎ)】:
1. 手工(gōng)洗板方法(fǎ):吸(xī)去(不(bù)可觸(chù)及板壁)或(huò)甩(shuǎi)掉酶(méi)標板內(nèi)的(dí)液(yè)體;在(zài)實(shí)驗(yàn)台上(shàng)鋪墊幾(jī)層(céng)吸水(shuǐ)紙(zhǐ),酶(méi)標(biāo)板朝(zhāo)下(xià)用力拍幾次;將(jiāng)推薦的洗滌緩(huǎn)衝液(yè)至(zhì)少0.3ml注(zhù)入孔(kǒng)內,浸泡1-2分鐘(zhōng),根據需(xū)要,重復此過程(chéng)數(shù)次(cì)。
2. 自動洗板:如果有(yǒu)自動(dòng)洗板機(jī),應在熟練使(shǐ)用(yòng)後再用到正式(shì)實驗過程(chéng)中。
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