大鼠表皮角質形成(chéng)細(xì)胞

大(dà)鼠表皮(pí)角質(zhì)形成(chéng)細(xì)胞分離(lí)自皮膚(fū)組(zǔ)織
；表(biǎo)皮(pí)位於動物皮膚(fū)的外層，由(yóu)胚胎(tāi)時期外(wài)胚層(céng)形成，具有(yǒu)抗摩擦(cā)和抗(kàng)損傷的作用(yòng)。表皮是(shì)皮膚(fū)的淺層結構，由(yóu)復層扁平(píng)上皮(pí)構成(chéng)。從(cóng)基(jī)底層到(dào)表麵可分為(wéi)五(wǔ)層(céng)，即基底(dǐ)層(céng)，棘層，顆(kē)粒層，透明(míng)層和(hé)角質層(céng)。依(yī)據細胞的分化狀(zhuàng)態(tài)，功(gōng)能類型可以(yǐ)分(fēn)為多種(zhǒng)細胞(bāo)類型(xíng)，表皮角(jiǎo)化上皮細胞(bāo)與(yǔ)角質形成細胞核(hé)心細胞(bāo)群(qún)體(tǐ)本(běn)質是(shì)同一(yī)細(xì)胞群體(tǐ)，前(qián)者從(cóng)“表皮屬角化復(fù)層扁平上(shàng)皮(pí)”的組織屬(shǔ)性(xìng)命名，後者(zhě)從“合成角蛋白，執行(háng)角化功能”的(dí)功(gōng)能(néng)特征(zhēng)命(mìng)名，二者(zhě)均涵(hán)蓋表皮從基底(dǐ)層(céng)增殖細(xì)胞(bāo)到角質(zhì)層(céng)終末細胞的全(quán)分化譜(pǔ)係(xì)，且占表(biǎo)皮(pí)細胞總(zǒng)量超(chāo)90%，是表皮屏障(zhàng)功(gōng)能(néng)的(dí)核心載體(tǐ)。在(zài)這(zhè)一分(fēn)化譜係中，存(cún)在明(míng)確的階段(duàn)差異基底層細(xì)胞是(shì)角質(zhì)形成(chéng)細(xì)胞的(dí)“增(zēng)殖源頭(tóu)”，呈柱狀(zhuàng)，有(yǒu)完整(zhěng)活性(xìng)細胞(bāo)核，以K5，K14，Ki-67，幹(gān)細胞(bāo)標誌(zhì)物(wù)p63為(wéi)核心，無(wú)角(jiǎo)化(huà)相(xiāng)關蛋白，未啟(qǐ)動(dòng)角化(huà)，一(yī)般(bān)描述為角化(huà)形成細胞/角質形成細胞(bāo)/角化(huà)上皮細胞等
；當(dāng)細胞遷移至棘(jí)層(céng)中上(shàng)部至顆粒(lì)層，成(chéng)為“角化細胞(bāo)”——這是仍(réng)含(hán)固縮(suō)細(xì)胞核（但(dàn)細胞(bāo)器減(jiǎn)少）的中間活(huó)細胞，能主動(dòng)合(hé)成(chéng)角蛋白(bái)與(yǔ)絲聚蛋白前體(tǐ)，處(chǔ)於(yú)“正在角化(huà)”的執(zhí)行(háng)階(jiē)段，表(biǎo)達切(qiē)換(huàn)為(wéi)K1，K10為主，同(tóng)時(shí)表(biǎo)達絲聚蛋白(bái)前(qián)體（絲聚(jù)合蛋白原(yuán)，顆(kē)粒(lì)層特(tè)征(zhēng)），轉(zhuǎn)穀氨酰胺(àn)酶1（TG1，促(cù)進(jìn)角蛋白(bái)交(jiāo)聯），Ki-67陰性
；最(zuì)終(zhōng)角化細胞進一步(bù)退(tuì)化(huà)，在角質層形(xíng)成“角(jiǎo)質細(xì)胞”（角(jiǎo)質(zhì)層終(zhōng)末細胞(bāo)），這(zhè)是無細(xì)胞(bāo)核(hé)，無細(xì)胞器的終(zhōng)末(mò)細(xì)胞(bāo)，胞質充滿(mǎn)交聯(lián)角蛋白纖(xiān)維，通(tōng)過細(xì)胞間連接構(gòu)成表皮(pí)物理(lǐ)屏障，無核(hé)相關標誌(zhì)物(wù)，以終末成(chéng)熟(shú)標誌物兜甲(jiǎ)蛋(dàn)白(bái)，小富脯(fǔ)蛋(dàn)白（SPRRs）為特(tè)征，K1，K10持續存在(zài)但(dàn)無活性合成功能(néng)
；PCNA是增(zēng)殖細胞(bāo)的(dí)標誌(zhì)物(wù)，表皮角(jiǎo)質(zhì)形(xíng)成細胞在基底層（增殖活躍(yuè)區(qū)）可能表(biǎo)達PCNA，而終末(mò)分化層（角質(zhì)層）可(kě)能(néng)不表(biǎo)達(dá)，細(xì)胞在不同(tóng)增殖狀態(tài)表達量(liáng)不(bù)一樣
；這四(sì)種細胞的核(hé)心(xīn)差(chà)異在(zài)於(yú)分(fēn)化階段（全(quán)階段(duàn)/中(zhōng)間態/終末(mò)態(tài)），形態（核(hé)與細胞器(qì)有(yǒu)無/活性(xìng)）及(jí)功(gōng)能（增殖/合成/屏障），且存(cún)在(zài)“角(jiǎo)質形成(chéng)細(xì)胞（表皮角(jiǎo)化上皮細胞(bāo)）包含角化細胞與角(jiǎo)質細(xì)胞”的邏輯關(guān)係。表(biǎo)皮也包含其(qí)他(tā)非角(jiǎo)化(huà)上皮(pí)細胞(bāo)黑(hēi)色(sè)素細(xì)胞(bāo)（Melanocytes），朗格(gé)漢斯細胞(bāo)（Langerhanscells），Merkel細(xì)胞等(děng)。

自備(bèi)試(shì)劑： 0.25%胰蛋(dàn)白酶(méi)  ，鼠(shǔ)尾膠原(yuán)蛋(dàn)白(bái)Ⅰ型（1×）或鼠尾膠原蛋(dàn)白(bái)Ⅰ型（1 mg/mL）  ，PBS  ，完全培(péi)養(yǎng)基(jī)

包(bāo)被條件： 鼠(shǔ)尾膠原(yuán)Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培養基(jī)： 大鼠(shǔ)表皮角(jiǎo)質形(xíng)成細(xì)胞完全(quán)培養基(jī)(含FBS，生長(cháng)添加(jiā)劑，Penicillin，Streptomycin等)

換(huàn)液(yè)頻(pín)率(shuài)： 每2-3天(tiān)換液(yè)一次

生(shēng)長(cháng)特(tè)性： 貼壁(bì)

細胞形態： 上皮(pí)細胞(bāo)樣(yàng)

傳(chuán)代比例(lì)： 1:2

傳代特性： 可傳(chuán)1-2代

消化液： 0.25%胰蛋(dàn)白酶

大鼠表皮(pí)角(jiǎo)質形(xíng)成(chéng)細胞體外培(péi)養周期(qī)有(yǒu)限
；建議(yì)使用(yòng)配套的專用(yòng)生(shēng)長培養基及正確的(dí)操(cāo)作(zuò)方法(fǎ)來培(péi)養(yǎng)，以(yǐ)此保(bǎo)證(zhèng)該(gāi)細胞的最(zuì)佳(jiā)培養狀(zhuàng)態。

方(fāng)法簡(jiǎn)介 實(shí)驗室分離的大鼠(shǔ)表皮角(jiǎo)質形(xíng)成層(céng)細胞先中(zhōng)性蛋白酶(méi)消化(huà)，後胰蛋白酶(méi)-膠原酶(méi)混(hùn)合消(xiāo)化(huà)法製備而來，細(xì)胞總(zǒng)量(liáng)約(yuē)為5×10⁵ cells/瓶。

質量檢(jiǎn)測 實驗(yàn)室(shì)分離的大鼠(shǔ)表(biǎo)皮角質形(xíng)成細胞經K5免(miǎn)疫熒光鑒定，純度可(kě)達(dá)90%以上(shàng)，且(qiě)不含有HIV-1，HBV，HCV，支(zhī)原體，細(xì)菌，酵母(mǔ)和(hé)真菌(jūn)等(děng)。