大(dà)鼠(shǔ)骨髓來(lái)源(yuán)內(nèi)皮(pí)祖(zǔ)細(xì)胞(bāo)

大鼠(shǔ)骨髓(suǐ)來源(yuán)內皮祖細胞分離自骨(gǔ)髓；骨髓是機(jī)體的造(zào)血(xiě)組織(zhī)，位於身(shēn)體的許(xǔ)多(duō)骨骼內。成年動物的(dí)骨髓分(fēn)兩種紅(hóng)骨髓和黃骨(gǔ)髓(suǐ)。紅(hóng)骨髓能製(zhì)造紅(hóng)細胞，血(xiě)小板和各種白(bái)細(xì)胞。血小板(bǎn)有(yǒu)止血(xiě)作(zuò)用(yòng)，白細胞能殺滅與抑製各(gè)種病原(yuán)體，包括細菌，病毒(dú)等(děng)；某(mǒu)些淋(lín)巴(bā)細(xì)胞能製造(zào)抗(kàng)體。因此(cǐ)，骨髓(suǐ)不但是(shì)造血器(qì)官，它還是重(zhòng)要的免疫器(qì)官(guān)。骨髓是(shì)存在於長(cháng)骨（如(rú)肱骨，股骨(gǔ)）的骨髓(suǐ)腔和(hé)扁(biǎn)平骨(gǔ)（如髂(qià)骨）的稀鬆(sōng)骨(gǔ)質間(jiān)的網(wǎng)眼(yǎn)中，是(shì)一種海綿(mián)狀(zhuàng)的組(zǔ)織，能產生(shēng)血細胞的骨髓略(lüè)呈紅色，稱(chēng)為(wéi)紅骨(gǔ)髓(suǐ)。出(chū)生時(shí)，紅骨髓充滿(mǎn)全(quán)身骨(gǔ)髓(suǐ)腔(qiāng)，隨著年齡增大，脂肪(fáng)細胞增多，相當部分(fēn)紅骨髓被黃骨髓取代(dài)，最後幾乎隻有扁(biǎn)平(píng)骨骨髓腔中有紅(hóng)骨(gǔ)髓(suǐ)。內(nèi)皮祖細(xì)胞(bāo)是血(xiě)管(guǎn)內皮細(xì)胞的前體(tǐ)細(xì)胞(bāo)，亦(yì)稱為成(chéng)血管(guǎn)細胞(bāo)（Angioblast），是(shì)一群具有(yǒu)遊(yóu)走特性，能進(jìn)一(yī)步增(zēng)殖分(fēn)化(huà)的幼(yòu)稚(zhì)內皮(pí)細(xì)胞，缺(quē)乏成熟(shú)內皮(pí)細(xì)胞的特(tè)征(zhēng)性表(biǎo)型(xíng)，不(bù)能形(xíng)成(chéng)管(guǎn)腔樣(yàng)結構，其(qí)功能(néng)主(zhǔ)要為(wéi)參(cān)與(yǔ)了出生(shēng)後缺(quē)血組織的(dí)血(xiě)管發(fā)生(shēng)和血(xiě)管損傷(shāng)後的修復(fù)。研(yán)究顯示，內皮祖(zǔ)細胞在(zài)心(xīn)腦(nǎo)血(xiě)管疾(jí)病(bìng)，外(wài)周血(xiě)管(guǎn)疾(jí)病(bìng)，腫(zhǒng)瘤(liú)血管(guǎn)形(xíng)成及(jí)創(chuàng)傷愈合等方麵均(jūn)發揮重(zhòng)要(yào)作用，並為(wéi)缺(quē)血性(xìng)疾(jí)病的研(yán)究治療提供了新(xīn)思路(lù)，EPCs生物學特性(xìng)和治療作用(yòng)的研究(jiū)成(chéng)為這(zhè)一(yī)領域新(xīn)的熱點。

自(zì)備試(shì)劑： 0.25%胰蛋白酶  ，多(duō)聚(jù)-L-賴(lài)氨酸(suān)溶液(yè)（1×）或(huò)多聚-L-賴(lài)氨酸(suān)溶(róng)液（10×）或明(míng)膠包(bāo)被液(yè)（1 mg/mL）  ，PBS  ，完全(quán)培(péi)養基(jī)

包(bāo)被條件： PLL（0.1 mg/mL）或(huò)明膠(jiāo)（0.1%）

培(péi)養基： 大鼠(shǔ)骨髓(suǐ)來(lái)源內皮(pí)祖細胞完全(quán)培養基(jī)(含(hán)FBS，生長(cháng)添(tiān)加劑(jì)，Penicillin，Streptomycin等)

換液(yè)頻(pín)率(shuài)： 每2-3天換(huàn)液一(yī)次

生長(cháng)特性： 貼(tiē)壁(bì)生長(cháng)

細(xì)胞(bāo)形(xíng)態： 內皮細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2

傳(chuán)代(dài)特(tè)性： 可(kě)傳1-2代；不(bù)建(jiàn)議(yì)多(duō)次傳(chuán)代

消化液： 0.25%胰(yí)蛋白(bái)酶

大(dà)鼠骨髓來源(yuán)內(nèi)皮(pí)祖細胞體(tǐ)外(wài)培養周(zhōu)期有(yǒu)限；建(jiàn)議(yì)使(shǐ)用(yòng)配(pèi)套的專(zhuān)用生長(cháng)培養(yǎng)基及正(zhèng)確的(dí)操作方(fāng)法(fǎ)來培養(yǎng)，以(yǐ)此保證(zhèng)該(gāi)細(xì)胞的最佳(jiā)培(péi)養狀態(tài)。

方法(fǎ)簡(jiǎn)介(jiè) 實驗(yàn)室分(fēn)離(lí)的大鼠骨(gǔ)髓來源(yuán)內皮(pí)祖細(xì)胞采用衝洗骨(gǔ)髓(suǐ)，密度梯度離心，差速(sù)貼壁法結合(hé)內(nèi)皮(pí)細(xì)胞專(zhuān)用(yòng)培養(yǎng)基培(péi)養篩選(xuǎn)製備(bèi)而來(lái)，細胞(bāo)總量約為5×10⁵ cells/瓶。

質量檢測(cè) 實驗(yàn)室(shì)分離的大鼠骨髓來(lái)源(yuán)內皮祖(zǔ)細胞(bāo)經(jīng)CD34免(miǎn)疫熒光鑒定(dìng)，純度可(kě)達(dá)90%以上，且不含有(yǒu)HIV-1，HBV，HCV，支原(yuán)體，細菌，酵(jiào)母(mǔ)和真(zhēn)菌等。