大(dà)鼠鼓(gǔ)膜表(biǎo)皮幹細(xì)胞(bāo)

大(dà)鼠(shǔ)鼓(gǔ)膜表(biǎo)皮幹細胞(bāo)分(fēn)離自大(dà)鼠鼓膜(mó)表皮組織(zhī)。鼓膜(mó)是外(wài)耳道與(yǔ)中耳腔(qiāng)之(zhī)間(jiān)的半透明(míng)薄膜(mó)，核心功能(néng)為分隔(gé)外(wài)耳(ěr)與中(zhōng)耳，傳(chuán)導聲波，其(qí)表(biǎo)皮(pí)層(céng)為(wéi)復層(céng)扁平上(shàng)皮(pí)，鼓膜(mó)表(biǎo)皮幹(gān)細胞(bāo)是該(gāi)層的(dí)關鍵成(chéng)體幹細胞，具有(yǒu)自我(wǒ)更(gēng)新能力和(hé)多(duō)向分化潛能，可定(dìng)向分化為成熟的鼓膜(mó)表(biǎo)皮角質(zhì)形成(chéng)細胞(bāo)，在鼓(gǔ)膜(mó)損傷(shāng)修(xiū)復(fù)，表皮層(céng)完(wán)整性維(wéi)持及正(zhèng)常(cháng)生理(lǐ)功能(néng)保(bǎo)障(zhàng)中發(fā)揮核心作用(yòng)。大鼠(shǔ)鼓膜表皮幹細胞原代培(péi)養3天後(hòu)開(kāi)始(shǐ)貼壁，形(xíng)態(tài)呈圓(yuán)形或橢(tuǒ)圓形，核(hé)大而(ér)圓(yuán)，居(jū)中，胞漿(jiāng)少(shǎo)
；培養(yǎng)1-2周後(hòu)增(zēng)殖(zhí)形(xíng)成克隆(lóng)樣集(jí)落，集落內細胞排列緊密(mì)，形(xíng)態(tài)均(jūn)一(yī)
；傳代後(hòu)細(xì)胞保持幹細胞特(tè)性，生(shēng)長穩定(dìng)，增(zēng)殖(zhí)旺盛，可穩(wěn)定(dìng)表(biǎo)達表(biǎo)皮幹(gān)細胞(bāo)相關標誌(zhì)物。該(gāi)細胞(bāo)是研究鼓(gǔ)膜表皮再(zài)生機製，鼓膜損傷修(xiū)復(fù)病(bìng)理過程(chéng)及耳(ěr)科(kē)相(xiāng)關(guān)疾(jí)病(bìng)發病(bìng)機製(zhì)的(dí)理想(xiǎng)實(shí)驗模型。

培(péi)養基(jī)：大鼠鼓膜表皮幹(gān)細胞(bāo)完全(quán)培養(yǎng)基(jī)（含FBS，表(biǎo)皮(pí)生長(cháng)因子，胰(yí)島(dǎo)素，Penicillin，Streptomycin等）

換液頻率(shuài)：每(měi)2-3天換液(yè)一次

生長(cháng)特性：貼(tiē)壁(bì)生(shēng)長，呈克隆樣(yàng)增殖(zhí)

細(xì)胞(bāo)形態：圓(yuán)形，橢圓形(xíng)（未(wèi)分化狀(zhuàng)態(tài)），增殖期(qī)可呈短梭(suō)形

傳代比例(lì)：1:2-1:3

傳代特性(xìng)：可穩定(dìng)傳(chuán)代(dài)6-8代
；3-5代(dài)以內(nèi)幹細胞特性最(zuì)穩定，狀態(tài)最(zuì)佳(jiā)

消化液：0.25%胰蛋白酶-EDTA消(xiāo)化液

大(dà)鼠(shǔ)鼓膜表(biǎo)皮幹細(xì)胞體外培養周(zhōu)期(qī)有限(xiàn)
；建議使(shǐ)用(yòng)配(pèi)套(tào)的(dí)專用(yòng)生長(cháng)培養(yǎng)基(jī)及正確(què)的操(cāo)作方(fāng)法來培養，以(yǐ)此保(bǎo)證(zhèng)該細胞的(dí)最佳培養(yǎng)狀(zhuàng)態(tài)。

方法簡(jiǎn)介：實驗(yàn)室采用(yòng)胰蛋白(bái)酶-EDTA聯合消化(huà)法(fǎ)結(jié)合差速(sù)貼壁(bì)法及克隆(lóng)篩選(xuǎn)法(fǎ)製備(bèi)該(gāi)細胞，細(xì)胞(bāo)總(zǒng)量約為5×10⁵ cells/瓶(píng)。

質量檢(jiǎn)測(cè)：經表(biǎo)皮幹細(xì)胞(bāo)特異(yì)性標(biāo)誌物（CK19，p63）免疫(yì)熒(yíng)光鑒定，本細胞純(chún)度可達90%以上(shàng)
；經檢測(cè)不含有HIV-1，HBV，HCV，支原體，細菌，酵(jiào)母(mǔ)和(hé)真(zhēn)菌(jūn)等(děng)外(wài)源汙染物(wù)，細胞活性良(liáng)好(hǎo)。