人角膜成纖(xiān)維細胞

人角膜(mó)成纖維細(xì)胞(bāo)分離(lí)自(zì)眼(yǎn)角(jiǎo)膜組(zǔ)織(zhī)；角膜位於眼(yǎn)球(qiú)前(qián)壁的一(yī)層(céng)透(tòu)明(míng)膜，約占纖維膜的前1/6，從(cóng)後麵看角(jiǎo)膜呈正圓形(xíng)，從(cóng)前麵(miàn)看(kàn)為橫橢(tuǒ)圓形(xíng)。角膜厚度各(gè)部(bù)分不(bù)盡相同，中央(yāng)部(bù)最(zuì)薄。角(jiǎo)膜(mó)有十(shí)分(fēn)敏(mǐn)感(gǎn)的(dí)神經(jīng)末梢(shāo)，如有外物接(jiē)觸角(jiǎo)膜，眼(yǎn)瞼便會(huì)不(bù)由自(zì)主地(dì)合(hé)上(shàng)以保護眼睛(jīng)。為(wéi)了保(bǎo)持透明，角(jiǎo)膜並(bìng)沒(méi)有血(xiě)管(guǎn)，透過(guò)外(wài)界空氣
，淚(lèi)液及房水獲取養份及氧氣(qì)。角(jiǎo)膜分為五(wǔ)層，由前向後依次為上皮(pí)細胞層(céng)
，前彈(dàn)力層
，基(jī)質層
，後彈力層
，內皮細(xì)胞層。成纖(xiān)維細(xì)胞（Fibroblast）是疏鬆結(jié)締組(zǔ)織(zhī)的(dí)主要細胞成(chéng)分(fēn)，由(yóu)胚胎(tāi)時(shí)期的間充(chōng)質(zhì)細(xì)胞分(fēn)化(huà)而來。成纖(xiān)維(wéi)細(xì)胞(bāo)較(jiào)大(dà)，輪(lún)廓(kuò)清楚，多為(wéi)突起的紡(fǎng)錘(chuí)形或星形(xíng)的扁平(píng)狀結構，其(qí)細(xì)胞核呈規則的(dí)卵(luǎn)圓形(xíng)，核仁大(dà)而明顯。成纖(xiān)維(wéi)細胞(bāo)功能(néng)活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜(shì)弱(ruò)鹼性，具明顯的蛋(dàn)白(bái)質合(hé)成和分(fēn)泌活(huó)動(dòng)，在(zài)一(yī)定條件(jiàn)下，它可以(yǐ)實現跟纖維(wéi)細胞(bāo)的(dí)互相轉化(huà)；成纖維細(xì)胞對不(bù)同程(chéng)度(dù)的細(xì)胞變(biàn)性
，壞(huài)死(sǐ)和組織(zhī)缺損的(dí)修復有(yǒu)著(zhuó)十(shí)分重要的作用。剛(gāng)分(fēn)離的角(jiǎo)膜成(chéng)纖維(wéi)細(xì)胞呈圓形(xíng)
，折光性良(liáng)好(hǎo)，懸(xuán)浮於(yú)培養(yǎng)基(jī)中(zhōng)。30 min細胞(bāo)貼(tiē)壁(bì)，其中部分開(kāi)始(shǐ)伸出(chū)偽足，表(biǎo)現(xiàn)為(wéi)小(xiǎo)的突起(qǐ)；6 h後細胞基(jī)本(běn)貼壁完全(quán)，伸展(zhǎn)成梭(suō)形，胞核清晰(xī)，分布(bù)較(jiào)均匀，散在生長，不聚集(jí)成團；細胞(bāo)生長(cháng)迅速(sù)，5-7天(tiān)即呈(chéng)融合(hé)狀態，細(xì)胞排列緊密，有(yǒu)的交叉重疊(dié)生長(cháng)，平坦
，胞(bāo)體較(jiào)大(dà)，細(xì)胞質透明，細胞核較大(dà)，呈(chéng)橢圓(yuán)形(xíng)，顏(yán)色淡(dàn)。細胞融合，並彼此連(lián)接(jiē)成(chéng)網(wǎng)狀(zhuàng)；細(xì)胞呈突(tū)起的(dí)紡(fǎng)錘(chuí)形或星(xīng)形的(dí)扁平分布。角膜(mó)成纖(xiān)維細胞在(zài)生(shēng)理條件下的(dí)主(zhǔ)要功(gōng)能(néng)包括(kuò)構造(zào)和維(wéi)持(chí)角(jiǎo)膜(mó)的(dí)正(zhèng)常(cháng)形態(tài)，合成(chéng)和釋放(fàng)細胞外基質(zhì)以及組織(zhī)損傷(shāng)後及(jí)時(shí)大量(liáng)聚(jù)集(jí)修(xiū)復損傷組織。

自(zì)備(bèi)試(shì)劑
： 0.25%胰蛋白酶  
，PBS  
，完(wán)全培(péi)養(yǎng)基

培(péi)養基
： 人角(jiǎo)膜成纖維(wéi)細胞完全培(péi)養(yǎng)基(含FBS
，生長(cháng)添加劑
，Penicillin
，Streptomycin等(děng))

換液頻(pín)率
： 每2-3天換(huàn)液(yè)一(yī)次(cì)

生長特性(xìng)
： 貼壁

細胞形(xíng)態
： 成纖維(wéi)細胞樣

傳(chuán)代比例
： 1:2

傳代特性
： 可傳(chuán)5代左右(yòu)；3代(dài)以內狀態最佳

消化液(yè)
： 0.25%胰(yí)蛋(dàn)白(bái)酶

人(rén)角(jiǎo)膜成纖維(wéi)細胞(bāo)體外培養周期有限(xiàn)；建議使用配套(tào)的專用生長培(péi)養基及正(zhèng)確的操(cāo)作方(fāng)法來培養，以(yǐ)此(cǐ)保(bǎo)證該細(xì)胞的(dí)最佳培養狀(zhuàng)態(tài)。

方法簡(jiǎn)介 實驗室(shì)分離的(dí)人角膜(mó)成纖(xiān)維細胞(bāo)采用(yòng)胰(yí)蛋白酶-膠(jiāo)原(yuán)酶混合消化(huà)法結合差(chà)速(sù)貼(tiē)壁(bì)法(fǎ)製(zhì)備(bèi)而(ér)來，細胞總量約為5×10⁵ cells/瓶。

質量檢測 實(shí)驗(yàn)室分離的(dí)人(rén)角膜(mó)成(chéng)纖維(wéi)細胞經(jīng)Vimentin免疫熒(yíng)光鑒定，純(chún)度(dù)可(kě)達90%以上，且不(bù)含有(yǒu)HIV-1
，HBV
，HCV
，支原體
，細菌
，酵母和(hé)真菌(jūn)等。