人退(tuì)行(háng)性(xìng)椎間盤髓核細胞(bāo)

人退(tuì)行(háng)性(xìng)椎間盤髓(suǐ)核細胞分(fēn)離自人退行(háng)性(xìng)椎(zhuī)間(jiān)盤(pán)髓(suǐ)核(hé)組(zǔ)織(zhī)。髓核(hé)細(xì)胞是(shì)椎(zhuī)間(jiān)盤髓核的主(zhǔ)要功(gōng)能細(xì)胞(bāo)，核(hé)心功能為(wéi)合成和(hé)分泌蛋白多(duō)糖，膠原蛋(dàn)白等(děng)細(xì)胞(bāo)外基(jī)質，維持椎(zhuī)間(jiān)盤的(dí)彈性(xìng)，抗壓性和(hé)水(shuǐ)分(fēn)含量(liáng)，保障椎間(jiān)盤(pán)的(dí)正常(cháng)生理功(gōng)能。在椎間盤退行性病變過程中(zhōng)，髓(suǐ)核(hé)細胞數量減少，功能(néng)減退，導(dǎo)致細胞外(wài)基質合成(chéng)不足(zú)，降解增加(jiā)，進(jìn)而引(yǐn)起椎(zhuī)間盤高度(dù)降低，彈性(xìng)變差，引發(fā)腰痛，椎間盤(pán)突出等(děng)疾病(bìng)。人退(tuì)行性椎間盤髓核細胞(bāo)原代培養3-4天(tiān)後開始貼壁，初(chū)始形(xíng)態(tài)呈圓形或橢(tuǒ)圓(yuán)形；培養1周左右細胞(bāo)逐漸增殖，形態(tài)變為(wéi)短梭形或(huò)多(duō)邊形；傳(chuán)代(dài)後(hòu)可穩定維持髓核細(xì)胞的典型形(xíng)態(tài)和(hé)功能特征。該細胞是(shì)研究椎間(jiān)盤(pán)退行性(xìng)病變(biàn)發病機(jī)製，髓核細胞功能(néng)調控及(jí)椎間盤修(xiū)復材(cái)料篩選的重要實驗材(cái)料(liào)。

自備試劑：0.25%胰蛋(dàn)白酶，膠(jiāo)原酶Ⅱ型(xíng)，PBS緩衝液，完(wán)全(quán)培養基，多聚賴(lài)氨(ān)酸(suān)（包被(bèi)培(péi)養瓶）

培(péi)養基(jī)：人(rén)退行性椎間(jiān)盤髓(suǐ)核細胞完全培養基(jī)（含FBS，轉化(huà)生長(cháng)因子(zǐ)β，胰(yí)島素，Penicillin，Streptomycin等(děng)）

換液頻(pín)率(shuài)：每3-4天(tiān)換液一(yī)次（溫(wēn)和換液）

生長(cháng)特(tè)性：貼(tiē)壁生(shēng)長，依賴(lài)包(bāo)被基質

細胞形態(tài)：圓(yuán)形(xíng)，橢(tuǒ)圓(yuán)形(xíng)，短梭形，多邊(biān)形

傳代(dài)比例(lì)：1:2（謹(jǐn)慎(shèn)傳(chuán)代）

傳代特性：可(kě)傳(chuán)3-5代(dài)；2-3代以(yǐ)內細胞功(gōng)能最(zuì)穩定

消化(huà)液：0.25% 胰蛋白(bái)酶 - EDTA 消(xiāo)化(huà)液(yè)（溫和消化）

人(rén)退(tuì)行性椎間盤髓核細胞體外(wài)培(péi)養周期有限；建議(yì)使(shǐ)用配(pèi)套的專(zhuān)用(yòng)生長培養(yǎng)基及正(zhèng)確的操作(zuò)方法來(lái)培養(yǎng)，以此(cǐ)保證該(gāi)細(xì)胞的最佳(jiā)培養狀態(tài)。

方法(fǎ)簡(jiǎn)介：實(shí)驗室采用胰蛋白(bái)酶(méi)-膠原(yuán)酶聯(lián)合(hé)消化(huà)法結合差(chà)速(sù)貼壁法製備(bèi)該細胞，細胞總量約為(wéi)5×10⁵ cells/瓶。

質量(liáng)檢(jiǎn)測：經髓核(hé)細胞特(tè)異性標誌物（聚集(jí)蛋白(bái)聚糖(táng)，Ⅱ型(xíng)膠(jiāo)原蛋白(bái)）免(miǎn)疫熒光鑒(jiàn)定，本細胞(bāo)純度可達90%以上(shàng)；經細胞(bāo)外基質分泌檢(jiǎn)測(cè)驗(yàn)證(zhèng)細(xì)胞功能(néng)；經檢測不含有(yǒu)HIV-1，HBV，HCV，支原體(tǐ)，細(xì)菌(jūn)，酵(jiào)母和真菌(jūn)等外源汙染物(wù)，細胞活(huó)性(xìng)達(dá)標。