兔表(biǎo)皮角(jiǎo)化(huà)細胞

兔表(biǎo)皮(pí)角(jiǎo)化細胞分離(lí)自皮膚組織(zhī)；表皮位於動物(wù)皮膚的(dí)外層(céng)，由(yóu)胚胎時期外(wài)胚層形成，具(jù)有抗(kàng)摩(mó)擦和(hé)抗(kàng)損(sǔn)傷的(dí)作用。表皮是皮(pí)膚的(dí)淺層結(jié)構，由(yóu)復層扁平(píng)上(shàng)皮構(gòu)成(chéng)。從基(jī)底層到表麵(miàn)可(kě)分為五(wǔ)層，即(jí)基底層(céng)，棘層，顆(kē)粒層，透明層和角質層。依據細胞的(dí)分(fēn)化狀態，功(gōng)能類型(xíng)可以(yǐ)分為多(duō)種細胞(bāo)類型(xíng)，表(biǎo)皮角化上皮(pí)細(xì)胞(bāo)與角質(zhì)形(xíng)成細胞核(hé)心細胞群體(tǐ)本質(zhì)是同(tóng)一(yī)細胞群(qún)體，前者(zhě)從(cóng)“表(biǎo)皮屬角(jiǎo)化復層扁(biǎn)平(píng)上皮(pí)”的組(zǔ)織(zhī)屬性命名，後者從“合成角蛋(dàn)白，執(zhí)行角化功(gōng)能”的功能特(tè)征(zhēng)命(mìng)名(míng)，二者均涵(hán)蓋表皮從(cóng)基(jī)底(dǐ)層增殖細(xì)胞到角(jiǎo)質層終(zhōng)末細(xì)胞(bāo)的全(quán)分化(huà)譜係，且(qiě)占表皮細胞(bāo)總(zǒng)量(liáng)超(chāo)90%，是(shì)表(biǎo)皮(pí)屏障功能的(dí)核心(xīn)載體。在(zài)這(zhè)一分化(huà)譜係中，存在明確(què)的(dí)階段差異基(jī)底層細胞是角(jiǎo)質(zhì)形(xíng)成細(xì)胞(bāo)的“增殖(zhí)源頭”，呈柱狀，有(yǒu)完(wán)整活(huó)性(xìng)細胞核，以(yǐ)K5，K14，Ki-67，幹(gān)細(xì)胞標誌(zhì)物p63為核心，無(wú)角化相(xiāng)關(guān)蛋白，未(wèi)啟動(dòng)角化，一(yī)般描述(shù)為(wéi)角化形(xíng)成(chéng)細胞/角(jiǎo)質形(xíng)成細胞(bāo)/角(jiǎo)化(huà)上(shàng)皮(pí)細胞等；當(dāng)細胞(bāo)遷(qiān)移(yí)至棘(jí)層中上(shàng)部至(zhì)顆粒(lì)層，成為“角(jiǎo)化(huà)細(xì)胞”——這是仍含固縮細胞核(hé)（但(dàn)細(xì)胞(bāo)器減(jiǎn)少）的中間活細(xì)胞(bāo)，能(néng)主動(dòng)合(hé)成(chéng)角蛋白(bái)與(yǔ)絲聚蛋白前(qián)體(tǐ)，處(chǔ)於(yú)“正在角化”的(dí)執(zhí)行階段(duàn)，表達切換為(wéi)K1，K10為(wéi)主(zhǔ)，同時表(biǎo)達(dá)絲聚蛋白前體（絲(sī)聚(jù)合(hé)蛋(dàn)白原，顆粒層(céng)特(tè)征(zhēng)），轉穀氨酰(xiān)胺酶1（TG1，促進角蛋(dàn)白交聯），Ki-67陰性；最終角(jiǎo)化(huà)細胞進一(yī)步(bù)退化，在(zài)角質(zhì)層(céng)形成“角(jiǎo)質細(xì)胞”（角(jiǎo)質(zhì)層終末(mò)細胞），這(zhè)是無細胞核(hé)，無細胞器(qì)的終末細(xì)胞，胞(bāo)質充滿(mǎn)交(jiāo)聯角蛋(dàn)白(bái)纖維(wéi)，通過(guò)細(xì)胞(bāo)間連接構成表皮(pí)物理屏障，無(wú)核(hé)相關標誌物，以終末成(chéng)熟(shú)標誌物兜甲蛋(dàn)白(bái)，小(xiǎo)富脯蛋白（SPRRs）為(wéi)特征，K1，K10持續存在但(dàn)無(wú)活(huó)性合成功(gōng)能；PCNA是增殖(zhí)細(xì)胞的(dí)標(biāo)誌(zhì)物(wù)，表(biǎo)皮角質(zhì)形(xíng)成細(xì)胞在基底(dǐ)層(céng)（增殖(zhí)活躍區(qū)）可能表達(dá)PCNA，而(ér)終末(mò)分(fēn)化(huà)層(céng)（角質(zhì)層）可(kě)能不表達(dá)，細(xì)胞(bāo)在(zài)不(bù)同(tóng)增殖(zhí)狀態(tài)表達(dá)量(liáng)不一樣(yàng)；這(zhè)四種(zhǒng)細(xì)胞的核(hé)心差(chà)異在(zài)於分化階段(duàn)（全(quán)階(jiē)段/中間態(tài)/終(zhōng)末態），形(xíng)態（核與細胞(bāo)器有(yǒu)無(wú)/活性）及(jí)功能(néng)（增殖/合成(chéng)/屏障），且存(cún)在“角質形成(chéng)細(xì)胞(bāo)（表皮角化(huà)上皮(pí)細(xì)胞(bāo)）包(bāo)含角(jiǎo)化細胞與角(jiǎo)質(zhì)細(xì)胞”的邏輯關(guān)係(xì)。表皮也(yě)包含其(qí)他非(fēi)角化(huà)上(shàng)皮(pí)細胞(bāo)黑色素細(xì)胞(bāo)（Melanocytes），朗(lǎng)格(gé)漢斯(sī)細胞(bāo)（Langerhanscells），Merkel細胞等。

自備試(shì)劑(jì)： 0.25%胰蛋(dàn)白(bái)酶(méi)  ，鼠尾膠(jiāo)原蛋(dàn)白Ⅰ型(xíng)（1×）或鼠尾(wěi)膠原蛋白(bái)Ⅰ型（1 mg/mL）  ，PBS  ，完全(quán)培養(yǎng)基(jī)

包(bāo)被(bèi)條件(jiàn)： 鼠尾膠(jiāo)原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培(péi)養(yǎng)基： 兔表皮角化細胞(bāo)完全培(péi)養基(jī)(基礎培(péi)養(yǎng)基，含FBS，EGF，Hydrocortisone，腎上腺素，Insulin，Transferrin，Penicillin，Streptomycin等)

換(huàn)液(yè)頻率： 每2-3天換(huàn)液一次

生(shēng)長特(tè)性(xìng)： 貼壁

細胞形(xíng)態(tài)： 上(shàng)皮細(xì)胞樣

傳(chuán)代比例(lì)： 不傳代

傳代(dài)特(tè)性： 不增(zēng)殖(zhí)；不(bù)傳代(dài)

消化液： 0.25%胰(yí)蛋(dàn)白(bái)酶

兔表(biǎo)皮(pí)角化(huà)細胞體(tǐ)外(wài)培(péi)養周期(qī)有限；建(jiàn)議使(shǐ)用配套的(dí)專用生長培養基及正(zhèng)確的(dí)操(cāo)作方法來(lái)培養(yǎng)，以(yǐ)此(cǐ)保證該(gāi)細胞的(dí)最(zuì)佳(jiā)培(péi)養狀(zhuàng)態(tài)。

方法簡介(jiè) 實(shí)驗(yàn)室分離的(dí)兔(tù)表皮(pí)角(jiǎo)化(huà)細胞先(xiān)中(zhōng)性(xìng)蛋白(bái)酶(méi)消(xiāo)化(huà)，後(hòu)胰(yí)蛋白酶-膠原酶混合消化(huà)法製(zhì)備(bèi)而(ér)來，細胞(bāo)總(zǒng)量約為5×10⁵ cells/瓶(píng)。

質(zhì)量檢(jiǎn)測(cè) 實驗(yàn)室分(fēn)離(lí)的兔表(biǎo)皮(pí)角化(huà)細胞(bāo)經(jīng)K1免(miǎn)疫熒光(guāng)鑒定，純度(dù)可(kě)達(dá)90%以(yǐ)上(shàng)，且不含有HIV-1，HBV，HCV，支原(yuán)體，細(xì)菌，酵(jiào)母和真菌(jūn)等。