口(kǒu)蹄疫（foot-and-mouth disease，FMD）由口蹄(tí)疫(yì)病(bìng)毒(dú)（FMDV）引(yǐn)起
的多種偶蹄動物(wù)高度接觸性傳(chuán)染病。口蹄疫(yì)病毒屬於小核糖核(hé)酸病毒(dú)科(kē)口蹄(tí)疫病(bìng)
毒屬，病毒(dú)基(jī)因組為(wéi)單股正鏈 RNA，約(yuē)含 8500 個核(hé)苷(gān)酸。目(mù)前已(yǐ)知該(gāi)病(bìng)毒有 7
個血(xiě)清(qīng)型(xíng)，分別(bié)為 O
，A
，C
，Asial
，SATl
，SAT2 和 SAT3，每(měi)種血(xiě)清型包括
多(duō)個亞(yà)型，各型之(zhī)間(jiān)無交(jiāo)叉保(bǎo)護。我(wǒ)國及(jí)周邊國家流(liú)行 O 型
，A 型和(hé) Asial 型 3
種血(xiě)清的(dí) FMDV。口(kǒu)蹄(tí)疫病對(duì)畜(xù)牧(mù)業生(shēng)產危害性(xìng)極(jí)大，是(shì)世(shì)界各(gè)國檢測和防(fáng)疫(yì)
的(dí)重(zhòng)點(diǎn)對象。由於(yú) FMDV 傳(chuán)代(dài)速(sù)度(dù)快且有(yǒu)多種(zhǒng)傳(chuán)播(bō)途(tú)徑(jìng)，特別(bié)是康復和亞臨床(chuáng)
感染動(dòng)物及其畜(xù)產(chǎn)品（主要為肉(ròu)
，奶類(lèi)）帶(dài)毒(dú)，給(gěi) FMD 的防(fáng)疫工作帶(dài)來諸多(duō)困
難(nán)。目前檢(jiǎn)測(cè) FMD 常(cháng)用技術(shù)主要(yào)有(yǒu)動物(wù)接種，病毒(dú)分(fēn)離(lí)和(hé)血清(qīng)學試驗等(děng)，這(zhè)些
方法(fǎ)有(yǒu)的費時費力，有的(dí)存在非特(tè)異性(xìng)反應和敏感度低(dī)等(děng)缺點(diǎn)。
本(běn)公(gōng)司針(zhēn)對(duì) O 型 FMDV 設(shè)計了特(tè)異性(xìng)檢(jiǎn)測(cè)引物(wù)，建(jiàn)立(lì)了檢測 FMDV 的
RT-PCR 方(fāng)法，敏感度更高。它具有(yǒu)下列(liè)特點：
1. 用於(yú) O 型(xíng) FMDV 的(dí)定性鑒(jiàn)定檢(jiǎn)測(cè)和分子(zǐ)流(liú)行(háng)病學(xué)調(tiáo)查。
2. 能對(duì)樣品(pǐn)中 FMDV 進(jìn)行快速檢測，具有(yǒu)良好的特異(yì)性和敏感性(xìng)。
3. 使用一(yī)管式 RT-PCR 試劑盒(hé)，減少了(liǎo)操作步(bù)驟，降低了(liǎo)操作誤差。

運(yùn)輸及保存:

使(shǐ)用方(fāng)法(fǎ):

一
，樣(yàng)品 RNA 的(dí)製(zhì)備(bèi)
用(yòng)自選方法純(chún)化 O 型 FMDV 樣(yàng)品的 RNA，也(yě)可(kě)以另(lìng)購本(běn)公(gōng)司的(dí)一(yī)管式病(bìng)
毒(dú) RANout 或柱(zhù)式病毒 RNAout，上(shàng)述(shù)兩款產品跟(gēn)本試(shì)劑盒(hé)兼(jiān)容(róng)。
二(èr)
，陽(yáng)性對(duì)照
1. 為(wéi)增加(jiā)產(chǎn)品穩(wěn)定(dìng)性和避免擴散傳染性(xìng)病(bìng)原(yuán)，本產(chǎn)品不(bù)提供(gōng)活(huó)體病毒做陽(yáng)性(xìng)對(duì)
照(zhào)，隻(zhī)提(tí)供沒有傳染性的(dí)
，可以直接使用的 DNA 片(piàn)段(duàn)作為(wéi)陽性(xìng)對照。
2. 使用(yòng)本(běn)陽性(xìng)對(duì)照時，由於(yú)其(qí)濃度較(jiào)高，一(yī)定要注意不要(yào)汙染(rǎn)其(qí)他(tā)試(shì)劑和(hé)成分。
最好在專(zhuān)門的區域操(cāo)作。
三
，設置 RT-PCR 反應（30 uL 體(tǐ)係）
3. 在 PCR 管(guǎn)中加入下列成分：
成(chéng) 份 樣(yàng)品 陽性(xìng)對(duì)照(zhào) 陰(yīn)性對照
雙酶(méi)一(yī)管(guǎn)式(shì) RT-PCR Buffer，2× 15 uL 15 uL 15 uL
O 型 FMDV 專一性引物對(duì) 2 uL 2 uL 2 uL
樣(yàng)品(pǐn) RNA 1-5 uL 無(wú) 無
O 型(xíng) FMDV 陽性對照 無 2 uL 無(wú)
補(bǔ)超純水(shuǐ)到 28 uL 28 uL 28 uL
MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL 2 uL
4. 輕柔混(hùn)匀後上機，按(àn)下(xià)麵參(cān)數進行 RT-PCR。
過(guò)程 溫度(dù) 時間
逆轉(zhuǎn)錄(lù) 60℃ 30 分鐘(zhōng)
預變性 95℃ 5 分鐘
PCR 反(fǎn)應
（30 個(gè)循環(huán)）
94℃ 30 s
61℃ 40 s
72℃ 1 分鐘(zhōng)
延(yán)伸(shēn) 72℃ 10 分(fēn)鐘(zhōng)
5. 電(diàn)泳檢(jiǎn)測(cè) RT-PCR 產物(wù)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為(wéi) 402 bp。