ELISA試(shì)劑(jì)盒(hé)試(shì)驗3個陰(yīn)性對(duì)照A值均應≥0.5×NCX，並≤1.5×NCX，如其中之(zhī)一超出(chū)此(cǐ)計劃(huá)，則棄去(qù)，算(suàn)了另兩個陰性對照(zhào)從頭核(hé)算(suàn)NCX；如有兩個陰(yīn)性(xìng)對(duì)照A值(zhí)超(chāo)出(chū)以(yǐ)上計(jì)劃，則該(gāi)次試驗(yàn)無效
。在(zài)條(tiáo)件(jiàn)許可下，應該(gāi)用(yòng)比(bǐ)色計測定吸(xī)光值(zhí)，這(zhè)麼能夠得(dé)到(dào)客觀的(dí)數據(jù)
。 現(xiàn)舉某(mǒu)種檢查(chá) HBsAg的試劑盒(hé)為(wéi)例,先讀(dú)出標本（sample，S），陽(yáng)性對照(zhào)（P），和陰性對(duì)照（N）的吸(xī)光值(zhí)，然(rán)後進(jìn)行核算
。核算(suàn)方法有(yǒu)多種，大致(zhì)可分為陽性斷定值法和(hé)標本與陰性對(duì)照(zhào)比(bǐ)值法兩(liǎng)類(lèi)
。陽性(xìng)對照(zhào)品HBsAg的含量標明為P=9±2ng /ml
。每次試驗設(shè)2個(gè)陽性(xìng)對照和3個陰(yīn)性對(duì)照(zhào)
。

      ELISA試(shì)劑盒中的(dí)陰性對(duì)照品(pǐn)為(wéi)不含HBsAg的(dí)復(fù)鈣人(rén)血漿，目(mù)視(shì)法(fǎ)簡捷明(míng)晰，但(dàn)頗具主(zhǔ)觀(guān)性(xìng)
。測得(dé)A值後，先核算(suàn)陰性對(duì)照A值(zhí)的平(píng)均(jūn)數（NC X ）和(hé)陽(yáng)性對(duì)照(zhào)A值的平均(jūn)數(shù)（PCX），兩個平(píng)均(jūn)數(shù)的(dí)差（P-N）有(yǒu)必(bì)要大於(yú)一(yī)個特(tè)定(dìng)的(dí)數值（例0.400），試驗才(cái)有用
。

        ELISA試劑盒陽性斷(duàn)定(dìng)值公式中的常數(shù)是在(zài)這特定的係統中通過(guò)對(duì)許(xǔ)多標(biāo)本(běn)的試(shì)驗檢查(chá)而得到(dào)的
。ELISA試(shì)劑盒陽性(xìng)斷(duàn)定值（cut-off value）一般為陰性(xìng)對照(zhào)A值加上(shàng)一個特定的常數，以此(cǐ)作(zuò)為(wéi)區(qū)別(bié)作(zuò)用陽性(xìng)或(huò)陰(yīn)性的(dí)規範
。用(yòng)此(cǐ)法(fǎ)區別作用央求試(shì)驗條(tiáo)件非常穩(wěn)定(dìng)，試(shì)劑的(dí)製(zhì)備(bèi)有必要規範化，陽性和陰性的對(duì)照品(pǐn)應符合(hé)一(yī)定的規(guī)範(fàn)，須配(pèi)用精密(mì)的(dí)儀器(qì)，並嚴重按(àn)規則操(cāo)作
。