微(wēi)生物(wù)β內酰胺酶(β-lactamase)ELISA試劑盒(hé)操(cāo)作(zuò)步(bù)驟：

①．從室(shì)溫平衡20min後的鋁(lǚ)箔(bó)袋(dài)中(zhōng)取出所需板條(tiáo)
，剩(shèng)餘板條用(yòng)自(zì)封(fēng)袋(dài)密(mì)封放回4℃。

②．設置標(biāo)準品(pǐn)孔(kǒng)和樣本孔
，標(biāo)準品孔各(gè)加(jiā)不同濃度的(dí)標準品(pǐn)50μL
；

③．樣(yàng)本(běn)孔(kǒng)先(xiān)加(jiā)待測(cè)樣本(běn)10μL
，再(zài)加樣本稀釋液40μL
；空白孔(kǒng)不加。

④．除(chú)空白(bái)孔外(wài)
，標準品(pǐn)孔(kǒng)和樣(yàng)本孔中每(měi)孔(kǒng)加入(rù)辣根過(guò)氧(yǎng)化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL
，用(yòng)封板膜(mó)封住(zhù)反應(yīng)孔
，37℃水浴鍋或(huò)恒溫箱(xiāng)溫育(yù)60min。

⑤．棄去液體
，吸(xī)水紙上拍幹
，每(měi)孔(kǒng)加滿(mǎn)洗滌液
，靜置(zhì)1min
，甩去(qù)洗(xǐ)滌(dí)液(yè)
，吸(xī)水紙上拍幹
，如(rú)此重復洗板5次   （也可用(yòng)洗(xǐ)板機洗(xǐ)板）。

⑥．每孔(kǒng)加(jiā)入(rù)底物(wù)A，B各50μL
，37℃避光(guāng)孵育(yù)15min。

⑦．每(měi)孔(kǒng)加(jiā)入終(zhōng)止液50μL
，15min內(nèi)
，在(zài)450nm波長(cháng)處測定(dìng)各(gè)孔的(dí)OD值。