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技術文(wén)獻
如何有(yǒu)效去除小(xiǎo)膠(jiāo)質細胞培養(yǎng)中(zhōng)的(dí)汙(wū)染(rǎn)
結(jié)合此前(qián)你(nǐ)關注的小膠質細(xì)胞培(péi)養(yǎng)汙(wū)染預防相關(guān)背(bèi)景,針(zhēn)對已(yǐ)發生的(dí)汙(wū)染(rǎn),需(xū)先判斷汙染類型(xíng),再(zài)采(cǎi)取(qǔ)對應(yīng)處理(lǐ)方(fāng)案,同(tóng)時(shí)做好環境消殺(shā)避免擴散(sàn)。
1. 細菌(jūn)汙染(rǎn)處理
早期(qī)輕(qīng)微汙(wū)染:換用含高濃(nóng)度雙抗(kàng)(青黴(méi)素(sù)-鏈黴素(sù)終(zhōng)濃(nóng)度100 U/mL)的培養(yǎng)基(jī),也(yě)可(kě)搭配專用細胞除菌劑,處理(lǐ)24-48小(xiǎo)時後換液,連(lián)續觀(guān)察2代(dài)細胞(bāo)狀態(tài)。
嚴重(zhòng)汙染:直接丟(diū)棄汙染細胞,用75%酒精(jīng)徹底擦拭(shì)超淨(jìng)台,培養箱,對水(shuǐ)盤進行換水消(xiāo)殺,防止(zhǐ)耐藥菌(jūn)擴散。
2. 真(zhēn)菌(jūn)汙(wū)染處理(lǐ)
輕(qīng)微汙染:用(yòng)PBS輕柔(róu)潤(rùn)洗(xǐ)細胞(bāo)2-3次(cì),換(huàn)用含300μg/mL氟康唑(zuò)的(dí)培養基培(péi)養至傳(chuán)代(dài),再降(jiàng)至150μg/mL維持培(péi)養2-3代,後續(xù)正常(cháng)傳(chuán)代(dài)觀察3-5代確(què)認無復發(fā)。
汙(wū)染擴散:真(zhēn)菌汙染通常難(nán)以徹底(dǐ)根除,非珍貴(guì)細胞建議直(zhí)接(jiē)丟棄,用(yòng)殺孢子劑對細胞間,培(péi)養(yǎng)箱(xiāng)進行(háng)全麵消(xiāo)殺,清除殘留(liú)真菌孢子。
3. 支原體(tǐ)汙(wū)染處理
珍貴細胞處理:選(xuǎn)用(yòng)商(shāng)品(pǐn)化(huà)支(zhī)原體清除(chú)試劑(如(rú)MRA),按說(shuō)明書(shū)比例加入(rù)培(péi)養基(jī),連續處理3代細(xì)胞(bāo)以上,也可配合細胞反復(fù)離心(xīn)洗滌法輔助(zhù)清除(chú)。
常規細胞:直接丟棄汙染(rǎn)細胞,復(fù)蘇(sū)原始凍(dòng)存(cún)的無(wú)支原體種(zhǒng)子細(xì)胞(bāo),後(hòu)續定(dìng)期用(yòng)qPCR法抽檢(jiǎn)細(xì)胞,避免(miǎn)隱(yǐn)性(xìng)汙染(rǎn)影(yǐng)響實驗結果。
4. 通用收(shōu)尾操作
所有(yǒu)汙染(rǎn)處理(lǐ)操(cāo)作需在隔離的(dí)超淨(jìng)台(tái)內(nèi)完成,避(bì)免(miǎn)汙染(rǎn)其他正(zhèng)常細胞;處理完成後對(duì)整個(gè)細胞(bāo)培養(yǎng)環境(jìng)進行(háng)全麵消(xiāo)殺(shā),確認無殘留汙染(rǎn)源後(hòu)再恢(huī)復(fù)常規培養操作(zuò)。
1. 細菌(jūn)汙染(rǎn)處理
早期(qī)輕(qīng)微汙(wū)染:換用含高濃(nóng)度雙抗(kàng)(青黴(méi)素(sù)-鏈黴素(sù)終(zhōng)濃(nóng)度100 U/mL)的培養(yǎng)基(jī),也(yě)可(kě)搭配專用細胞除菌劑,處理(lǐ)24-48小(xiǎo)時後換液,連(lián)續觀(guān)察2代(dài)細胞(bāo)狀態(tài)。
嚴重(zhòng)汙染:直接丟(diū)棄汙染細胞,用75%酒精(jīng)徹底擦拭(shì)超淨(jìng)台,培養箱,對水(shuǐ)盤進行換水消(xiāo)殺,防止(zhǐ)耐藥菌(jūn)擴散。
2. 真(zhēn)菌(jūn)汙(wū)染處理(lǐ)
輕(qīng)微汙染:用(yòng)PBS輕柔(róu)潤(rùn)洗(xǐ)細胞(bāo)2-3次(cì),換(huàn)用含300μg/mL氟康唑(zuò)的(dí)培養基培(péi)養至傳(chuán)代(dài),再降(jiàng)至150μg/mL維持培(péi)養2-3代,後續(xù)正常(cháng)傳(chuán)代(dài)觀察3-5代確(què)認無復發(fā)。
汙(wū)染擴散:真(zhēn)菌汙染通常難(nán)以徹底(dǐ)根除,非珍貴(guì)細胞建議直(zhí)接(jiē)丟棄,用(yòng)殺孢子劑對細胞間,培(péi)養(yǎng)箱(xiāng)進行(háng)全麵消(xiāo)殺,清除殘留(liú)真菌孢子。
3. 支原體(tǐ)汙(wū)染處理
珍貴細胞處理:選(xuǎn)用(yòng)商(shāng)品(pǐn)化(huà)支(zhī)原體清除(chú)試劑(如(rú)MRA),按說(shuō)明書(shū)比例加入(rù)培(péi)養基(jī),連續處理3代細(xì)胞(bāo)以上,也可配合細胞反復(fù)離心(xīn)洗滌法輔助(zhù)清除(chú)。
常規細胞:直接丟棄汙染(rǎn)細胞,復(fù)蘇(sū)原始凍(dòng)存(cún)的無(wú)支原體種(zhǒng)子細(xì)胞(bāo),後(hòu)續定(dìng)期用(yòng)qPCR法抽檢(jiǎn)細(xì)胞,避免(miǎn)隱(yǐn)性(xìng)汙染(rǎn)影(yǐng)響實驗結果。
4. 通用收(shōu)尾操作
所有(yǒu)汙染(rǎn)處理(lǐ)操(cāo)作需在隔離的(dí)超淨(jìng)台(tái)內(nèi)完成,避(bì)免(miǎn)汙染(rǎn)其他正(zhèng)常細胞;處理完成後對(duì)整個(gè)細胞(bāo)培養(yǎng)環境(jìng)進行(háng)全麵消(xiāo)殺(shā),確認無殘留汙染(rǎn)源後(hòu)再恢(huī)復(fù)常規培養操作(zuò)。
