技術(shù)文獻(xiàn)
技(jì)術(shù)文(wén)獻
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋(shì)與加樣(yàng):在酶標包被板(bǎn)上設(shè)標準(zhǔn)品孔(kǒng)10孔,在第一,第(dì)二(èr)孔中分(fēn)別加(jiā)標準品100μl,然後在第一(yī),第(dì)二孔中(zhōng)加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混匀(yún);然(rán)後從第(dì)一孔,第(dì)二孔(kǒng)中(zhōng)各(gè)取100μl分別加到第三(sān)孔和第(dì)四(sì)孔,再在第三(sān),第四(sì)孔分別加標準(zhǔn)品稀釋液(yè)50μl,混(hùn)匀;然後(hòu)在(zài)第三(sān)孔(kǒng)和(hé)第四(sì)孔中先各取50μl棄掉,再(zài)各取50μl分(fēn)別加到第五,第六(liù)孔中,再(zài)在第五,第(dì)六孔中(zhōng)分(fēn)別(bié)加標準(zhǔn)品稀釋(shì)液50ul,混匀;混(hùn)匀後(hòu)從(cóng)第五,第(dì)六孔(kǒng)中各取50μl分(fēn)別加到第七,第(dì)八孔(kǒng)中(zhōng),再(zài)在(zài)第(dì)七(qī),第(dì)八(bā)孔中分別加標(biāo)準品稀(xī)釋液50μl,混匀(yún)後(hòu)從(cóng)第(dì)七(qī),第八孔中(zhōng)分別取(qǔ)50μl加到第九(jiǔ),第(dì)十孔(kǒng)中(zhōng),再在第九(jiǔ)第十孔(kǒng)分別加(jiā)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(yè)50μl,混(hùn)匀(yún)後從第(dì)九第(dì)十孔(kǒng)中各(gè)取50μl棄(qì)掉。
2.加樣(yàng):分別(bié)設空(kōng)白孔(空白(bái)對照孔(kǒng)不(bù)加(jiā)樣品(pǐn)及(jí)酶(méi)標(biāo)試劑(jì),其(qí)餘各步操作相同),待(dài)測(cè)樣(yàng)品孔。在(zài)酶標(biāo)包被板(bǎn)上待測(cè)樣(yàng)品孔中(zhōng)先加樣品稀(xī)釋(shì)液40μl,然後再(zài)加(jiā)待(dài)測樣品(pǐn)10μl(樣(yàng)品最(zuì)終(zhōng)稀(xī)釋度(dù)為5倍)。加(jiā)樣將(jiāng)樣(yàng)品加(jiā)於酶(méi)標(biāo)板孔(kǒng)底(dǐ)部(bù),盡量不觸(chù)及孔(kǒng)壁(bì),輕輕(qīng)晃動混匀(yún)。
3.溫育:用封板膜(mó)封板(bǎn)後置37℃溫(wēn)育30分鐘(zhōng)。
4.配(pèi)液:將(jiāng)30(48T的(dí)20倍(bèi))倍濃(nóng)縮(suō)洗滌液用蒸(zhēng)餾(liù)水30(48T的20倍(bèi))倍稀釋後(hòu)備(bèi)用。
5.洗滌:小(xiǎo)心揭掉(diào)封板膜,棄去液體(tǐ),甩幹(gān),每孔加(jiā)滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒後(hòu)棄(qì)去(qù),如此(cǐ)重復5次(cì),拍(pāi)幹。6.加酶:每孔加(jiā)入酶(méi)標(biāo)試(shì)劑50μl,空(kōng)白(bái)孔(kǒng)除外(wài)。
7.溫(wēn)育:操作同(tóng)3。
8.洗(xǐ)滌:操作同5。
9.顯色(sè):每(měi)孔先(xiān)加入(rù)顯色劑A50μl,再加入顯(xiǎn)色劑B50μl,輕(qīng)輕(qīng)震蕩混(hùn)匀,37℃避(bì)光顯色(sè)15分鐘(zhōng).
10.終(zhōng)止:每孔加(jiā)終(zhōng)止(zhǐ)液(yè)50μl,終止(zhǐ)反(fǎn)應(此(cǐ)時藍色立(lì)轉(zhuǎn)黃色)。
11.測(cè)定(dìng):以空白(bái)空調零,450nm波長依(yī)序測量(liáng)各孔(kǒng)的(dí)吸(xī)光度(dù)(OD值(zhí))。 測定(dìng)應(yīng)在加終(zhōng)止液後15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
中性酯(zhǐ)酶(méi)染液 H-E dye
鹼(jiǎn)性酯酶(méi)染液 Wright'dye
雙重酯(zhǐ)酶染液 Wright - Giemsa dye composite
快速(sù)血細(xì)胞(bāo)染液 Giemsa
糖(táng)元(yuán)染液 Pap stain (exfoliated cell staining)
蘇(sū)木素染(rǎn)液(yè) Fast HE tissues and exfoliated cells of dye
伊紅(hóng)染液 Gram stain
H-E染(rǎn)液(yè) Acid fast stain
瑞(ruì)氏染液(yè) Cell activity identification of dye
瑞(ruì)氏(shì)-姬(jī)姆薩(sà)復(fù)合(hé)染液 Vascular permeability test solution
姬姆薩染(rǎn)液(yè) Peroxidase staining
巴氏染(rǎn)液(yè)(脫落(là)細(xì)胞染(rǎn)色(sè)) Name
快(kuài)速H-E組(zǔ)織細胞及脫(tuō)落(là)細胞染(rǎn)液 Phosphate buffer
革(gé)蘭氏(shì)染液(yè) Carbonate buffer
