山羊脂聯(lián)素(ADP)elisa檢測試(shì)劑(jì)盒說(shuō)明(míng)書

試(shì)驗原理：

TRH試劑(jì)盒是固相(xiāng)夾(jiā)心法(fǎ)酶(méi)聯免(miǎn)疫(yì)吸附實驗（ELISA）.已知TRH濃(nóng)度的標準品，未知濃度(dù)的(dí)樣品加(jiā)入微孔(kǒng)酶(méi)標板內進(jìn)行檢測(cè)。先將(jiāng)TRH和(hé)生物素(sù)標(biāo)記的抗體(tǐ)同時溫育。洗(xǐ)滌後
，加(jiā)入(rù)親和(hé)素(sù)標記(jì)過的(dí)HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌(dí)
，去(qù)除未結(jié)合的酶(méi)結合物
，然後(hòu)加入底物(wù)A，B
，和(hé)酶結(jié)合物同時作用(yòng)。產(chǎn)生顏色(sè)。顏(yán)色的(dí)深淺(qiǎn)和(hé)樣品中TRH的濃(nóng)度(dù)呈比(bǐ)例關係。

試劑(jì)盒內容及其配(pèi)製(zhì)

試劑盒(hé)成份(fèn)（2-8℃保(bǎo)存(cún)） 96孔配置(zhì) 48孔(kǒng)配置(zhì) 配製

96/48人份(fèn)酶(méi)標板 1塊板(bǎn)（96T） 半塊板（48T） 即(jí)用(yòng)型(xíng)

塑料膜(mó)板蓋 1塊 半(bàn)塊 即用型(xíng)

標準(zhǔn)品：24ng/ml 1瓶(píng)（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按(àn)說明書進(jìn)行(háng)稀(xī)稀(xī)

空白(bái)對照(zhào) 1瓶(píng)（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用(yòng)型(xíng)

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩衝(chōng)液 1瓶（5ml） 1瓶(píng)（2.5ml） 即用(yòng)型

生(shēng)物(wù)素(sù)標記的抗(kàng)TRH抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型(xíng)

親和(hé)鏈(liàn)酶(méi)素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即(jí)用型

洗(xǐ)滌(dí)緩衝液(yè) 1瓶(píng)（20ml） 1瓶（10ml） 按(àn)說明書進行稀釋

底(dǐ)物(wù)A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型(xíng)

底物(wù)B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用(yòng)型

終止液(yè) 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型(xíng)

自(zì)備材料(liào)

1． 蒸餾水(shuǐ)。

2． 加(jiā)樣(yàng)器(qì)：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。

3． 振(zhèn)蕩(dàng)器(qì)及磁力(lì)攪(jiǎo)拌(bàn)器(qì)等(děng)。

安全(quán)性

1． 避免直(zhí)接接(jiē)觸終止液(yè)和(hé)底物(wù)A，B。一旦接(jiē)觸到(dào)這些液體
，請(qǐng)盡快用(yòng)水衝(chōng)洗(xǐ)。

2． 實驗(yàn)中不要吃喝，抽(chōu)煙(yān)或使用化(huà)妝品。

3． 不(bù)要用嘴吸取試劑盒裏的任何(hé)成份。

操作(zuò)注(zhù)意事項(xiàng)

1． 試劑(jì)應(yīng)按標簽(qiān)說(shuō)明書(shū)儲存
，使用前恢(huī)復到(dào)室(shì)溫。稀稀過後的標準品(pǐn)應(yīng)丟棄(qì)
，不(bù)可保(bǎo)存(cún)。

2． 實(shí)驗中不用(yòng)的板(bǎn)條(tiáo)應立(lì)即(jí)放回(huí)包裝(zhuāng)袋中
，密封保(bǎo)存(cún)
，以(yǐ)免(miǎn)變質(zhì)。

3． 不用(yòng)的其它試(shì)劑應(yīng)包(bāo)裝(zhuāng)好或(huò)蓋好(hǎo)。不(bù)同批號的(dí)試(shì)劑不要(yào)混(hùn)用(yòng)。保質前使用。

4． 使(shǐ)用(yòng)一次性的吸(xī)頭(tóu)以(yǐ)免交叉(chā)汙(wū)染
，吸(xī)取終止(zhǐ)液和底物A，B液時(shí)
，避(bì)免(miǎn)使(shǐ)用帶(dài)金屬部(bù)分(fēn)的加樣器(qì)。

5． 使(shǐ)用幹淨的(dí)塑料容(róng)器配置洗(xǐ)滌液(yè)。使用前充(chōng)分混匀試(shì)劑盒(hé)裏(lǐ)的各種成份(fèn)及樣品。

6． 洗滌酶標板時應(yīng)充分拍幹
，不要(yào)將(jiāng)吸(xī)水紙直接放入(rù)酶標反應(yīng)孔中吸水。

7． 底物A應揮(huī)發
，避(bì)免長(cháng)時(shí)間打開蓋(gài)子。底物(wù)B對(duì)光敏感
，避免長(cháng)時間暴(bào)露於光(guāng)下(xià)。避免(miǎn)用手接(jiē)觸
，有毒。實驗完成後(hòu)應立即(jí)讀取OD值。

8． 加(jiā)入試(shì)劑的順(shùn)序應(yīng)一(yī)致(zhì)
，以保證所(suǒ)有反應(yīng)板孔溫育的(dí)時(shí)間(jiān)一樣(yàng)。

9． 按照說(shuō)明書中(zhōng)標明的時(shí)間，加(jiā)液的(dí)量及順(shùn)序進行(háng)溫育(yù)操(cāo)作。

樣(yàng)品收(shōu)集，處(chǔ)理(lǐ)及保存(cún)方(fāng)法(fǎ)

1， 血(xiě)清-----操作過程(chéng)中避(bì)免任何(hé)細胞刺(cì)激。使(shǐ)用不(bù)含(hán)熱原和(hé)內(nèi)毒素的試(shì)管(guǎn)。收(shōu)集(jí)血(xiě)液(yè)後
，1000×g離(lí)心10分(fēn)鐘(zhōng)將(jiāng)血(xiě)清(qīng)和紅細胞迅速(sù)小(xiǎo)心(xīn)地分離(lí)。

2， 血漿-----EDTA，檸(níng)檬酸鹽，肝素(sù)血(xiě)漿可用於檢測。1000×g離(lí)心30分(fēn)鐘(zhōng)去(qù)除(chú)顆(kē)粒(lì)。

3， 細胞上清液(yè)---1000×g離心(xīn)10分(fēn)鐘去除顆粒和(hé)聚(jù)合物。

4， 保存(cún)------如果樣品(pǐn)不立即(jí)使(shǐ)用
，應將其分成小部(bù)分-70 ℃保存
，避免反(fǎn)復冷凍。盡(jìn)可(kě)能的不要(yào)使用溶(róng)血或(huò)高血(xiě)脂血。如果血清中大量(liáng)顆粒
，檢測(cè)前(qián)先(xiān)離(lí)心或(huò)過濾。不(bù)要在37℃或(huò)更高的溫度加(jiā)熱(rè)解凍(dòng)。應在(zài)室(shì)溫(wēn)下解凍並(bìng)確保(bǎo)樣(yàng)品(pǐn)均匀地充(chōng)分解凍。

試(shì)劑(jì)的(dí)準備

1． 標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)：標(biāo)準品的(dí)係列稀釋(shì)應在實驗時準備
，不能(néng)儲存。稀(xī)釋前將標準品振蕩混匀(yún)。稀釋(shì)比例按下表中(zhōng)進(jìn)行：

24 ng/ml （6號標準(zhǔn)品(pǐn)） 原(yuán)倍濃度(dù)不(bù)用稀釋直(zhí)接加(jiā)入50ul。

12 ng/ml （5號標準(zhǔn)品） 100ul的(dí)原倍標準品(pǐn)加入100ul的標(biāo)準品(pǐn)稀(xī)釋液(yè)

6.0 ng/ml （4號(hào)標準品(pǐn)） 100ul的5號標(biāo)準品(pǐn)加(jiā)入100ul的標準品(pǐn)稀釋(shì)液(yè)

3.0 ng/ml （3號標準品） 100ul的4號(hào)標(biāo)準品加(jiā)入100ul的標(biāo)準品稀(xī)釋液

1.5 ng/ml （2號標(biāo)準品） 100ul的3號標準(zhǔn)品(pǐn)加(jiā)入(rù)100ul的標準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋(shì)液

0.75 ng/ml （1號標準(zhǔn)品） 100ul的2號標準品加(jiā)入(rù)100ul的(dí)標準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋液(yè)

0 ng/ml （空(kōng)白對(duì)照(zhào)） 原(yuán)始(shǐ)濃(nóng)度(dù)不(bù)用(yòng)稀釋直接(jiē)加(jiā)入50ul。

2． 洗(xǐ)滌(dí)緩(huǎn)衝液（50×）的稀釋：蒸餾水(shuǐ)50倍稀釋。

操(cāo)作(zuò)步(bù)驟

1． 使用(yòng)前(qián)
，將所(suǒ)有(yǒu)試劑充分(fēn)混匀(yún)。不要使(shǐ)液體(tǐ)產生大量(liáng)的泡(pào)沫
，以免(miǎn)加(jiā)樣時加入大(dà)量的(dí)氣泡
，產生加樣上(shàng)的誤差。

2． 根據待測(cè)樣品數量加上(shàng)標(biāo)準(zhǔn)品的(dí)數(shù)量決(jué)定所需的板(bǎn)條(tiáo)數。每個標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)和(hé)空(kōng)白孔建(jiàn)議做(zuò)復孔(kǒng)。每個(gè)樣品根(gēn)據自己的數量(liáng)來定
，能使用復(fù)孔的盡量做復孔(kǒng)。

3． 加入(rù)稀釋(shì)好後的標準(zhǔn)品(pǐn)50ul於反(fǎn)應孔，加(jiā)入待(dài)測樣品50ul於(yú)反應(yīng)孔(kǒng)內。立即(jí)加入(rù)50ul的生物素標(biāo)記(jì)的抗體。蓋(gài)上(shàng)膜(mó)板
，輕(qīng)輕振蕩混匀
，37℃溫(wēn)育1小時。

4． 甩(shuǎi)去(qù)孔(kǒng)內液(yè)體
，每(měi)孔加滿洗滌(dí)液
，振(zhèn)蕩(dàng)30秒
，甩去(qù)洗(xǐ)滌液
，用吸水紙(zhǐ)拍(pāi)幹。重復(fù)此操作3次。如(rú)果用洗(xǐ)板機洗滌(dí)
，洗(xǐ)滌次數(shù)增加一次。

5． 每(měi)孔加(jiā)入80ul的親和(hé)鏈酶(méi)素-HRP
，輕輕(qīng)振(zhèn)蕩混(hùn)匀
，37℃溫育(yù)30分(fēn)鐘(zhōng)。

6． 甩(shuǎi)去孔內液體(tǐ)
，每(měi)孔加滿(mǎn)洗滌(dí)液
，振蕩(dàng)30秒
，甩去(qù)洗滌(dí)液
，用吸水紙(zhǐ)拍(pāi)幹。重(zhòng)復此操作(zuò)3次。如果用(yòng)洗板機(jī)洗(xǐ)滌
，洗(xǐ)滌(dí)次數增加一(yī)次。

7． 每孔(kǒng)加入底物A，B各50ul
，輕(qīng)輕振蕩混(hùn)匀
，37℃溫育10分(fēn)鐘。避免光(guāng)照(zhào)。

8． 取(qǔ)出酶標板(bǎn)
，迅(xùn)速加入50ul終止(zhǐ)液
，加(jiā)入(rù)終(zhōng)止液(yè)後應(yīng)立即(jí)測定(dìng)結果。

9． 在450nm波長處測定(dìng)各孔的(dí)OD值。

建議使(shǐ)用(yòng)的實驗(yàn)方案(àn)

標準(zhǔn)品濃(nóng)度（ng/ml）

A 24 24 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品

B 12 12 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品

C 6.0 6.0 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn)

D 3.0 3.0 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn)

E 1.5 1.5 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn)

F 0.75 0.75 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn)

G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品

H 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品

局(jú)限(xiàn)

6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的(dí)結果(guǒ)為非綫性的(dí)
，根(gēn)據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲(qū)綫無法得到(dào)的結果(guǒ)。

試(shì)劑(jì)盒性能

1. 靈敏(mǐn)度：zui小的檢測濃度(dù)小(xiǎo)於1號標(biāo)準品。稀釋(shì)度的綫(xiàn)性。樣品綫性回歸(guī)與預(yù)期(qī)濃(nóng)度(dù)相關係(xì)數(shù)R值(zhí)為0.990。

2. 特異性(xìng)：不(bù)與其(qí)它細胞(bāo)因子反應。

3. 重復性(xìng)：板內，板間變異(yì)係數均小(xiǎo)於(yú)10%。

結 果 判(pàn) 斷(duàn) 與 分 析

1，儀(yí)器值(zhí)：於波長450nm的(dí)酶標(biāo)儀上(shàng)讀取(qǔ)各孔的(dí)OD值

2，以(yǐ)吸光度OD值(zhí)為(wéi)縱(zòng)坐標(biāo)（Y）
，相應的(dí)TRH標(biāo)準(zhǔn)品濃(nóng)度為(wéi)橫坐標（X）
，做得相應(yīng)的曲綫(xiàn)
，樣(yàng)品的TRH含量可根(gēn)據其(qí)OD值由標準(zhǔn)曲(qū)綫(xiàn)換算(suàn)出相應(yīng)的濃(nóng)度。

3，檢(jiǎn)測值範圍：0-24ng/ml

4，敏感度： 0.1 ng/ml