大(dà)鼠(shǔ)L-鼠乳(rǔ)酸(suān)脫氫酶(L-LDH) elisa試劑盒(hé)操作步驟：

1. 標準品的稀釋與(yǔ)加(jiā)樣：在酶標(biāo)包被板上(shàng)設(shè)標(biāo)準品孔10孔，在di一，第(dì)二孔(kǒng)中分(fēn)別(bié)加標(biāo)準品100μl，然(rán)後(hòu)在(zài)di一(yī)，第(dì)二(èr)孔(kǒng)中加標準品(pǐn)稀(xī)釋液50μl，混(hùn)匀(yún)；然(rán)後從di一(yī)孔(kǒng)，第(dì)二孔中各取100μl分別(bié)加(jiā)到(dào)第三孔(kǒng)和第(dì)四(sì)孔，再(zài)在第三(sān)，第(dì)四孔(kǒng)分(fēn)別(bié)加(jiā)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混(hùn)匀(yún)；然後(hòu)在第三孔和第四孔中先各(gè)取50μl棄掉(diào)，再各(gè)取(qǔ)50μl分別(bié)加到(dào)第五，第六孔中，再在第(dì)五(wǔ)，第六孔中(zhōng)分別(bié)加(jiā)標(biāo)準品稀(xī)釋(shì)液50ul，混匀(yún)；混(hùn)匀後從(cóng)第五(wǔ)，第六(liù)孔(kǒng)中(zhōng)各(gè)取50μl分(fēn)別(bié)加(jiā)到第七，第八孔中(zhōng)，再在第七，第八(bā)孔中分(fēn)別加(jiā)標準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋(shì)液50μl，混匀後從第七(qī)，第八孔(kǒng)中分(fēn)別取50μl加到(dào)第九，第十孔(kǒng)中(zhōng)，再在(zài)第九(jiǔ)第十(shí)孔分(fēn)別(bié)加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋(shì)液50μl，混(hùn)匀後(hòu)從(cóng)第(dì)九第(dì)十(shí)孔中(zhōng)各取(qǔ)50μl棄掉(diào)。（稀(xī)釋後(hòu)各孔加樣量(liáng)都為(wéi)50μl，濃度分別為(wéi)180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加樣(yàng)：分別設(shè)空白孔（空白(bái)對照孔不加(jiā)樣(yàng)品(pǐn)及酶(méi)標試劑，其餘各步操(cāo)作(zuò)相同），待測樣品孔。在酶標包(bāo)被(bèi)板(bǎn)上(shàng)待測樣品(pǐn)孔中先加樣(yàng)品稀(xī)釋液(yè)40μl，然(rán)後再(zài)加待測(cè)樣(yàng)品10μl（樣(yàng)品(pǐn)最終稀(xī)釋度(dù)為5倍）。加樣將樣(yàng)品加於(yú)酶(méi)標(biāo)板孔(kǒng)底部，盡量(liáng)不觸及(jí)孔壁，輕(qīng)輕(qīng)晃(huǎng)動(dòng)混(hùn)匀。
3. 溫(wēn)育：用封(fēng)板膜封板(bǎn)後置(zhì)37℃溫(wēn)育30分鐘。
4. 配液：將(jiāng)30（48T的(dí)20倍）倍(bèi)濃(nóng)縮洗(xǐ)滌(dí)液用(yòng)蒸(zhēng)餾水30（48T的20倍）倍(bèi)稀釋後(hòu)備用。
5. 洗滌(dí)：小心(xīn)揭(jiē)掉封板(bǎn)膜，棄(qì)去液(yè)體，甩(shuǎi)幹，每孔(kǒng)加(jiā)滿洗滌(dí)液，靜置(zhì)30秒後棄(qì)去，如此重(zhòng)復(fù)5次(cì)，拍幹。
6. 加酶：每(měi)孔(kǒng)加(jiā)入(rù)酶標試(shì)劑(jì)50μl，空白(bái)孔(kǒng)除(chú)外。
7. 溫育：操(cāo)作同(tóng)3。
8. 洗滌：操作同(tóng)5。
9. 顯色(sè)：每孔先(xiān)加(jiā)入(rù)顯色劑A50μl，再(zài)加(jiā)入顯(xiǎn)色(sè)劑B50μl，輕輕(qīng)震蕩混匀，37℃避光(guāng)顯色(sè)15分鐘(zhōng).
10. 終止：每孔加(jiā)終(zhōng)止液50μl，終(zhōng)止反應(yīng)（此時(shí)藍色(sè)立(lì)轉黃色(sè)）。

11. 測定：以空白空調(tiáo)零(líng)，450nm波長依序測(cè)量各(gè)孔的(dí)吸(xī)光(guāng)度(dù)（OD值）。 測定應在加(jiā)終(zhōng)止(zhǐ)液(yè)後15分鐘。

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