試驗原理：
TRH試劑(jì)盒是(shì)固相夾心(xīn)法酶(méi)聯免疫吸附實驗（ELISA）.已(yǐ)知(zhī)TRH濃度的標(biāo)準品，未知濃度的樣品(pǐn)加(jiā)入(rù)微孔酶(méi)標板內進(jìn)行檢(jiǎn)測。先將TRH和生物(wù)素標(biāo)記的(dí)抗(kàng)體同(tóng)時溫(wēn)育(yù)。洗滌後(hòu)，加(jiā)入(rù)親和(hé)素(sù)標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和(hé)洗(xǐ)滌，去除未(wèi)結合(hé)的酶結(jié)合物，然後加入底物A，B，和(hé)酶(méi)結合物(wù)同時作(zuò)用(yòng)。產生(shēng)顏色。顏色的深淺和樣(yàng)品中TRH的(dí)濃度(dù)呈比例(lì)關(guān)係。
試劑(jì)盒內(nèi)容及(jí)其配製
試劑(jì)盒成(chéng)份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配(pèi)置(zhì) 配製(zhì)
96/48人(rén)份(fèn)酶標板 1塊板（96T） 半塊板(bǎn)（48T） 即用型(xíng)
塑料膜(mó)板(bǎn)蓋 1塊 半(bàn)塊 即(jí)用型
標準品：24ng/ml 1瓶(píng)（0.6ml） 1瓶(píng)（0.3ml） 按說明(míng)書進(jìn)行(háng)稀稀
空(kōng)白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶(píng)（0.5ml） 即(jí)用(yòng)型(xíng)
標(biāo)準品稀(xī)釋緩(huǎn)衝(chōng)液 1瓶（5ml） 1瓶(píng)（2.5ml） 即用型(xíng)
生(shēng)物(wù)素標記的抗(kàng)TRH抗(kàng)體(tǐ) 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型(xíng)
親和鏈(liàn)酶素(sù)-HRP 1瓶（10ml） 1瓶(píng)（5.0ml） 即(jí)用型(xíng)
洗滌緩衝液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按(àn)說明(míng)書進行(háng)稀(xī)釋
底(dǐ)物(wù)A 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即用型(xíng)
終止(zhǐ)液 1瓶(píng)（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型(xíng)
自(zì)備材料
1． 蒸餾水。
2． 加(jiā)樣器(qì)：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振(zhèn)蕩器及磁力(lì)攪拌器(qì)等。
安(ān)全性
1． 避免直(zhí)接接觸(chù)終(zhōng)止液和底物A，B。一(yī)旦接觸到這(zhè)些液(yè)體，請盡(jìn)快用水(shuǐ)衝(chōng)洗。
2． 實驗中不要吃喝，抽煙或(huò)使(shǐ)用化(huà)妝品(pǐn)。
3． 不要用嘴(zuǐ)吸(xī)取試(shì)劑盒裏的任(rèn)何成(chéng)份(fèn)。
操作(zuò)注意(yì)事項
1． 試(shì)劑(jì)應按標簽說明(míng)書儲(chǔ)存，使(shǐ)用前恢復到室(shì)溫(wēn)。稀稀過(guò)後的(dí)標(biāo)準品(pǐn)應丟棄，不(bù)可(kě)保存。
2． 實驗中不(bù)用的板(bǎn)條應立即(jí)放回包裝(zhuāng)袋(dài)中，密(mì)封(fēng)保(bǎo)存(cún)，以免(miǎn)變質。
3． 不用的其(qí)它試(shì)劑(jì)應(yīng)包(bāo)裝(zhuāng)好或(huò)蓋(gài)好。不同(tóng)批號的試(shì)劑不要混(hùn)用。保質前(qián)使(shǐ)用(yòng)。
4． 使用(yòng)一次性(xìng)的吸頭以(yǐ)免(miǎn)交叉(chā)汙染，吸(xī)取(qǔ)終止(zhǐ)液(yè)和(hé)底物(wù)A，B液(yè)時，避(bì)免使用(yòng)帶金屬部分(fēn)的(dí)加樣器(qì)。
5． 使(shǐ)用幹淨的(dí)塑料容(róng)器配置洗滌液。使用(yòng)前充分混匀(yún)試劑(jì)盒(hé)裏(lǐ)的各種成(chéng)份(fèn)及樣品。
6． 洗滌(dí)酶標板時(shí)應充分拍(pāi)幹，不要將吸水紙直(zhí)接(jiē)放入酶(méi)標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7． 底(dǐ)物A應揮(huī)發，避(bì)免長(cháng)時(shí)間打(dǎ)開蓋(gài)子。底物(wù)B對(duì)光敏(mǐn)感(gǎn)，避(bì)免長(cháng)時間(jiān)暴露於光(guāng)下(xià)。避免用(yòng)手(shǒu)接(jiē)觸，有毒。實驗(yàn)完成後應(yīng)立(lì)即讀(dú)取OD值。
8． 加(jiā)入(rù)試(shì)劑的順序應一致，以保(bǎo)證所有(yǒu)反應板(bǎn)孔(kǒng)溫(wēn)育(yù)的時間(jiān)一(yī)樣。
9． 按照(zhào)說(shuō)明(míng)書(shū)中(zhōng)標明(míng)的(dí)時間，加液的(dí)量及(jí)順序進行溫育操(cāo)作(zuò)。
樣品收集，處理及(jí)保(bǎo)存方法(fǎ)
1， 血(xiě)清-----操作過(guò)程中避免(miǎn)任(rèn)何細胞刺激。使用不含熱(rè)原和內(nèi)毒素的(dí)試管(guǎn)。收集血(xiě)液(yè)後，1000×g離(lí)心10分(fēn)鐘將(jiāng)血清(qīng)和(hé)紅細胞迅速小(xiǎo)心(xīn)地分(fēn)離。
2， 血漿-----EDTA，檸(níng)檬酸鹽(yán)，肝素血漿可用於檢測。1000×g離心30分鐘去除顆(kē)粒。
3， 細(xì)胞(bāo)上(shàng)清液(yè)---1000×g離心(xīn)10分鐘去除(chú)顆粒和(hé)聚合物。
4， 保存------如果樣品不立即(jí)使(shǐ)用(yòng)，應(yīng)將其(qí)分(fēn)成(chéng)小部(bù)分-70 ℃保存，避免(miǎn)反復冷凍(dòng)。盡(jìn)可能的不要使用(yòng)溶(róng)血(xiě)或(huò)高血脂血。如果血清(qīng)中(zhōng)大(dà)量(liáng)顆粒，檢測前(qián)先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更(gēng)高的溫度(dù)加(jiā)熱(rè)解凍(dòng)。應在(zài)室(shì)溫下解凍並(bìng)確保樣品(pǐn)均匀(yún)地(dì)充(chōng)分解凍。
試劑的準備
1． 標(biāo)準品(pǐn)：標(biāo)準品的係列(liè)稀釋(shì)應在實(shí)驗(yàn)時(shí)準備，不能(néng)儲存。稀釋前(qián)將標(biāo)準品振(zhèn)蕩混匀。稀釋(shì)比例(lì)按(àn)下表中進行：
24 ng/ml （6號(hào)標準品(pǐn)） 原(yuán)倍濃(nóng)度不用稀釋直接(jiē)加(jiā)入50ul。
12 ng/ml （5號標準品） 100ul的原倍標準品(pǐn)加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋(shì)液(yè)
6.0 ng/ml （4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)） 100ul的5號(hào)標(biāo)準品(pǐn)加(jiā)入100ul的(dí)標準(zhǔn)品稀釋(shì)液(yè)
3.0 ng/ml （3號(hào)標(biāo)準品） 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)加入(rù)100ul的標準品稀(xī)釋(shì)液(yè)
1.5 ng/ml （2號(hào)標準品(pǐn)） 100ul的3號標準(zhǔn)品(pǐn)加(jiā)入100ul的標(biāo)準品(pǐn)稀釋液
0.75 ng/ml （1號標準品） 100ul的2號標準品(pǐn)加入100ul的(dí)標準品稀釋(shì)液
0 ng/ml （空白對照） 原始濃度不用稀(xī)釋(shì)直接加入50ul。
2． 洗滌緩(huǎn)衝液（50×）的(dí)稀(xī)釋：蒸餾(liù)水(shuǐ)50倍稀釋(shì)。
操(cāo)作(zuò)步驟(zhòu)
1． 使(shǐ)用(yòng)前，將(jiāng)所(suǒ)有(yǒu)試劑充分混匀。不(bù)要(yào)使液(yè)體產(chǎn)生大(dà)量的泡沫，以免(miǎn)加樣時(shí)加入大(dà)量的(dí)氣泡(pào)，產(chǎn)生(shēng)加(jiā)樣(yàng)上的誤(wù)差。
2． 根(gēn)據待(dài)測樣品數(shù)量加(jiā)上標準品的數量(liáng)決定(dìng)所(suǒ)需(xū)的板(bǎn)條數(shù)。每(měi)個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品(pǐn)根據(jù)自(zì)己的數(shù)量(liáng)來定，能使用復(fù)孔(kǒng)的(dí)盡量(liáng)做復(fù)孔(kǒng)。
3． 加(jiā)入(rù)稀釋好(hǎo)後的標準品50ul於(yú)反(fǎn)應孔(kǒng)，加(jiā)入(rù)待(dài)測樣(yàng)品(pǐn)50ul於(yú)反(fǎn)應孔內(nèi)。立(lì)即加入50ul的生物素標記(jì)的抗(kàng)體(tǐ)。蓋上(shàng)膜(mó)板(bǎn)，輕(qīng)輕(qīng)振蕩(dàng)混(hùn)匀(yún)，37℃溫育1小(xiǎo)時。
4． 甩去(qù)孔(kǒng)內液體(tǐ)，每孔(kǒng)加(jiā)滿洗滌液(yè)，振蕩30秒，甩去洗滌液(yè)，用(yòng)吸水(shuǐ)紙拍(pāi)幹(gān)。重(zhòng)復此操作(zuò)3次(cì)。如(rú)果用洗板機洗滌，洗(xǐ)滌次(cì)數增(zēng)加一次。
5． 每(měi)孔加入80ul的親和(hé)鏈酶(méi)素-HRP，輕輕振(zhèn)蕩混匀(yún)，37℃溫育30分(fēn)鐘。
6． 甩(shuǎi)去孔內(nèi)液體，每孔(kǒng)加滿洗(xǐ)滌液，振蕩(dàng)30秒(miǎo)，甩去(qù)洗(xǐ)滌(dí)液(yè)，用吸水紙拍幹。重復此操作(zuò)3次。如果用洗(xǐ)板(bǎn)機(jī)洗(xǐ)滌，洗(xǐ)滌(dí)次數增加一(yī)次。
7． 每(měi)孔(kǒng)加入(rù)底(dǐ)物(wù)A，B各50ul，輕輕振蕩(dàng)混匀(yún)，37℃溫育(yù)10分鐘。避(bì)免光(guāng)照(zhào)。
8． 取(qǔ)出酶(méi)標(biāo)板，迅速(sù)加入(rù)50ul終(zhōng)止液，加入(rù)終止(zhǐ)液(yè)後(hòu)應立(lì)即測定(dìng)結果(guǒ)。
9． 在450nm波長(cháng)處測定各(gè)孔的OD值。
建(jiàn)議使用的(dí)實(shí)驗(yàn)方(fāng)案(àn)
 標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)濃(nóng)度（ng/ml） 
A 24 24 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品
B 12 12 樣品 樣品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品
C 6.0 6.0 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn)
D 3.0 3.0 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品(pǐn)
E 1.5 1.5 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣品 樣品 樣(yàng)品
F 0.75 0.75 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn)
G 0 0 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品(pǐn)
H 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品

局限(xiàn)
6號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)以上(shàng)的(dí)結果為非綫性的，根據此標(biāo)準(zhǔn)曲綫無(wú)法(fǎ)得到(dào)的結果(guǒ)。
試劑盒性(xìng)能
1. 靈(líng)敏(mǐn)度(dù)：zui小(xiǎo)的(dí)檢(jiǎn)測濃度(dù)小於(yú)1號(hào)標準品。稀(xī)釋度的綫性。樣(yàng)品綫性回(huí)歸與預期(qī)濃(nóng)度(dù)相關(guān)係(xì)數R值為(wéi)0.990。
2. 特(tè)異(yì)性：不(bù)與其(qí)它(tā)細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重(zhòng)復(fù)性：板內(nèi)，板間變異(yì)係數均(jūn)小於10%。
結(jié) 果 判(pàn) 斷 與 分 析
1，儀(yí)器(qì)值：於(yú)波長450nm的(dí)酶標儀(yí)上讀取各孔(kǒng)的(dí)OD值
2，以吸(xī)光度OD值為(wéi)縱坐(zuò)標(biāo)（Y），相應的TRH標(biāo)準品(pǐn)濃(nóng)度(dù)為(wéi)橫(héng)坐標（X），做得相應的(dí)曲綫，樣品(pǐn)的TRH含量可(kě)根據其(qí)OD值由標準曲綫換算出(chū)相應的濃度。
3，檢測(cè)值範圍：0-24ng/ml
4，敏感度： 0.1 ng/ml