英文簡稱(chēng)：5-NT ELISA Kit
規格(gé)：96T/48T
代測服(fú)務，全(quán)程Elisa實驗技術(shù)指導，免費(fèi)代(dài)做實(shí)驗(yàn)。
特(tè)點：靈敏(mǐn)性(xìng)高，特異性強，重復(fù)性好(hǎo)
運輸：現貨(huò)供應，一般為快遞運(yùn)輸(shū)，江(jiāng)浙(zhè)滬隔天(tiān)到(dào)，外(wài)地及偏(piān)遠地(dì)方三至(zhì)五(wǔ)天時(shí)間到(dào)貨。
保(bǎo)存:2~8℃
有效(xiào)期(qī):6個(gè)月
標本(běn):血(xiě)清，血(xiě)漿，細胞上清液(yè)，尿液(yè)，體液(yè)，灌(guàn)洗(xǐ)液(yè)，腦(nǎo)脊(jǐ)髓，心(xīn)房(fáng)水(shuǐ)，胸房(fáng)水，組織等(děng)。
檢(jiǎn)測(cè)目的:用於(yú)測定(dìng)血清,血漿(jiāng)及相(xiāng)關(guān)液(yè)體等(děng)樣本。例如適(shì)合檢(jiǎn)測包括血清，血(xiě)漿，尿液，胸腹(fù)水，灌(guàn)洗(xǐ)液，腦脊液，細胞(bāo)培養上(shàng)清(qīng)，組織匀漿等標本。
用(yòng)途:科(kē)研實(shí)驗等(děng)領(lǐng)域科學(xué)研究,不(bù)得用於臨床診(zhěn)斷。
樣本處(chǔ)理(lǐ)及要求(qiú)：
1. 血清(qīng)：室溫(wēn)血液(yè)自然(rán)凝(níng)固10-20分(fēn)鐘(zhōng)，離心(xīn)20分(fēn)鐘(zhōng)左(zuǒ)右(yòu)（2000-3000轉/分(fēn)）。仔細收集(jí)上(shàng)清，保(bǎo)存過程(chéng)中如出現沉澱(diàn)，應(yīng)再(zài)次離心。
2. 血漿：應根(gēn)據(jù)標本的(dí)要求選(xuǎn)擇(zé)EDTA或(huò)檸檬酸(suān)鈉(nà)作為抗(kàng)凝(níng)劑，混合10-20分鐘(zhōng)後(hòu)，離心20分鐘(zhōng)左(zuǒ)右(yòu)（2000-3000轉/分(fēn)）。仔細收(shōu)集上(shàng)清(qīng)，保(bǎo)存(cún)過程中如有沉(chén)澱(diàn)形(xíng)成(chéng)，應該(gāi)再次離心(xīn)。
3. 尿液：用(yòng)無(wú)菌管(guǎn)收(shōu)集，離心20分(fēn)鐘左(zuǒ)右(yòu)（2000-3000轉/分）。仔(zī)細(xì)收(shōu)集上清，保存(cún)過程(chéng)中如有沉(chén)澱形(xíng)成，應再次離心。胸(xiōng)腹水，腦(nǎo)脊液(yè)參(cān)照(zhào)實(shí)行(háng)。
4. 細胞培(péi)養(yǎng)上清(qīng)：檢(jiǎn)測分(fēn)泌(mì)性的(dí)成份時，用(yòng)無菌管收(shōu)集。離心(xīn)20分(fēn)鐘(zhōng)左右（2000-3000轉/分）。仔(zī)細(xì)收集上清。檢測細胞內的成(chéng)份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋(shì)細胞懸(xuán)液(yè)，細胞(bāo)濃度(dù)達(dá)到
100萬/ml左右(yòu)。通過反(fǎn)復凍融(róng)，以使細胞破(pò)壞並(bìng)放出細(xì)胞內成(chéng)份(fèn)。離心(xīn)20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔(zī)細(xì)收集上清(qīng)。保存過(guò)程中如有沉澱形(xíng)成，應再次(cì)離(lí)心。
5. 組織(zhī)標本(běn)：切割標本(běn)後，稱取重量(liáng)。加(jiā)入(rù)一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷(lěng)凍保(bǎo)存備用。標本(běn)融(róng)化後仍(réng)然保(bǎo)持2-8℃的(dí)溫(wēn)度。加入(rù)一定量的(dí)PBS（PH7.4），用(yòng)手(shǒu)工(gōng)或匀(yún)漿(jiāng)器將(jiāng)標(biāo)本(běn)匀漿(jiāng)充(chōng)分。離(lí)心20分(fēn)鐘(zhōng)左(zuǒ)右（2000-3000轉/分）。仔(zī)細(xì)收集上清(qīng)。分(fēn)裝後一份待(dài)檢測，其(qí)餘冷(lěng)凍(dòng)備用(yòng)。
6. 標(biāo)本采(cǎi)集(jí)後盡(jìn)早進行提取(qǔ)，提取(qǔ)按相關文獻進(jìn)行(háng)，提(tí)取(qǔ)後應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗。若(ruò)不能(néng)馬上進(jìn)行試(shì)驗(yàn)，可(kě)將(jiāng)標本(běn)放於-20℃保存，但應避免(miǎn)反復(fù)凍(dòng)融(róng).
7. 不能檢(jiǎn)測含NaN3的樣(yàng)品(pǐn)，因(yīn)NaN3抑製辣(là)根過氧(yǎng)化物(wù)酶的(dí)（HRP）活(huó)性。
操作步(bù)驟
1. 標(biāo)準品(pǐn)的稀(xī)釋(shì)與(yǔ)加(jiā)樣(yàng)：在酶(méi)標(biāo)包被板(bǎn)上設(shè)標準(zhǔn)品(pǐn)孔10孔，在di一，第二孔中分(fēn)別(bié)加標準(zhǔn)品100μl，然(rán)後(hòu)在di一，第二孔中加(jiā)標(biāo)準品稀(xī)釋液50μl，混(hùn)匀；然後從di一孔，第(dì)二孔中各取100μl分(fēn)別加(jiā)到第三(sān)孔和第(dì)四(sì)孔(kǒng)，再(zài)在(zài)第(dì)三，第四(sì)孔分(fēn)別(bié)加(jiā)標(biāo)準品(pǐn)稀(xī)釋液50μl，混(hùn)匀；然後(hòu)在(zài)第(dì)三孔(kǒng)和第四孔中(zhōng)先各取50μl棄(qì)掉，再各取50μl分別(bié)取50μl分別加到(dào)第(dì)七，第八(bā)孔中(zhōng)，再(zài)在(zài)第(dì)七(qī)，第八孔(kǒng)中分(fēn)別加(jiā)標準品稀釋液50μl，混(hùn)匀(yún)後從(cóng)第七，第八(bā)孔(kǒng)中加(jiā)到(dào)第五，第六(liù)孔中，再(zài)在第五，第(dì)六孔中(zhōng)分(fēn)別加標準品稀釋(shì)液50ul，混匀；混(hùn)匀(yún)後(hòu)從第(dì)五，第六(liù)孔中各分別取(qǔ)50μl加到第九，第十孔中，再在(zài)第(dì)九(jiǔ)第(dì)十孔分別(bié)加標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋液(yè)50μl，混匀後(hòu)從(cóng)第(dì)九(jiǔ)第(dì)十孔(kǒng)中(zhōng)各取50μl棄掉。（稀釋後各(gè)孔(kǒng)加樣量都為50μl，濃(nóng)度(dù)分(fēn)別為(wéi)180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加樣：分別(bié)設(shè)空白(bái)孔(kǒng)（空白對照(zhào)孔(kǒng)不加樣品及酶標試劑(jì)，其(qí)餘各(gè)步(bù)操作(zuò)相同），待(dài)測(cè)樣品孔。在酶標包被(bèi)板上(shàng)待測(cè)樣(yàng)品孔中(zhōng)先加(jiā)樣品(pǐn)稀(xī)釋液40μl，然後(hòu)再(zài)加待測樣(yàng)品10μl（樣品(pǐn)最(zuì)終稀釋度為5倍(bèi)）。加樣(yàng)將樣(yàng)品加(jiā)於(yú)酶標板孔底(dǐ)部(bù)，盡量不(bù)觸及(jí)孔(kǒng)壁，輕(qīng)輕晃動混匀(yún)。
3. 溫(wēn)育：用封板膜封板(bǎn)後(hòu)置(zhì)37℃溫(wēn)育30分鐘。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮(suō)洗滌液用(yòng)蒸(zhēng)餾水30（48T的(dí)20倍(bèi)）倍稀(xī)釋(shì)後備用。
5. 洗(xǐ)滌(dí)：小(xiǎo)心揭掉封(fēng)板(bǎn)膜，棄(qì)去液(yè)體(tǐ)，甩幹，每孔加滿洗滌(dí)液，靜(jìng)置30秒(miǎo)後棄(qì)去，如此(cǐ)重(zhòng)復(fù)5次(cì)，拍幹。
6. 加酶：每孔(kǒng)加入酶(méi)標試(shì)劑(jì)50μl，空(kōng)白(bái)孔除(chú)外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗(xǐ)滌：操作同(tóng)5。
9. 顯(xiǎn)色(sè)：每孔先(xiān)加入(rù)顯色劑(jì)A50μl，再(zài)加入(rù)顯(xiǎn)色(sè)劑B50μl，輕輕(qīng)震(zhèn)蕩混(hùn)匀，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終(zhōng)止液50μl，終止反(fǎn)應（此(cǐ)時(shí)藍色立轉(zhuǎn)黃(huáng)色(sè)）。
11. 測定：以空白空(kōng)調零，450nm波長(cháng)依序測量(liáng)各孔(kǒng)的(dí)吸光度（OD值）。 測定應在加(jiā)終(zhōng)止液(yè)後(hòu)15分鐘。
注意事(shì)項
1. 試(shì)劑盒從冷藏環(huán)境中取出(chū)應在室溫平(píng)衡(héng)15-30 分鐘(zhōng)後方可(kě)使用，酶(méi)標(biāo)包被(bèi)板開封後如未用完，板(bǎn)條應裝入密(mì)封袋中(zhōng)保存(cún)。
2. 濃(nóng)洗滌液(yè)可(kě)能會有結晶析(xī)出，稀釋(shì)時可在水浴(yù)中加溫(wēn)助溶，洗滌時(shí)不(bù)影(yǐng)響(xiǎng)結果。
3. 各(gè)步加樣均應使用加樣器(qì)，並(bìng)經常校(xiào)對(duì)其(qí)準(zhǔn)確性，以(yǐ)避免(miǎn)試(shì)驗(yàn)誤(wù)差。一次加樣時間(jiān)好控製在(zài)5 分鐘內，如(rú)標(biāo)本數(shù)量多(duō)，推(tuī)薦(jiàn)使用排槍加(jiā)樣。
4. 封板膜隻(zhī)限(xiàn)一(yī)次性(xìng)使用(yòng)，以避免(miǎn)交(jiāo)叉(chā)汙(wū)染。
5. 底物(wù)請避(bì)光(guāng)保存(cún)。
6. 嚴格(gé)按照說明書的(dí)操(cāo)作(zuò)進行，試驗(yàn)結果(guǒ)判定(dìng)必(bì)須(xū)以(yǐ)酶(méi)標(biāo)儀讀數為準.
7. 所(suǒ)有(yǒu)樣(yàng)品，洗(xǐ)滌(dí)液和各種廢棄(qì)物(wù)都(dū)應按傳染(rǎn)物(wù)處理(lǐ)。
8. 本(běn)試(shì)劑不同批(pī)號(hào)組分不(bù)得混用。
9.如需代(dài)測或(huò)者樣本暫(zàn)時(shí)不測定，可(kě)立即低溫凍(dòng)存(cún)，溫(wēn)度越低越好，中間(jiān)避(bì)免(miǎn)反(fǎn)復凍融，-20℃以(yǐ)下(xià)可保存(cún)三個月(yuè),-70℃以(yǐ)下可(kě)保(bǎo)存六個月。
10.試劑(jì)使用須(xū)知：
11.（1）請參(cān)照(zhào)相關(guān)法規，文(wén)獻，MSDS等信(xìn)息，理解並(bìng)掌握好試(shì)劑(jì)的特性，再(zài)進(jìn)行安全操(cāo)作。
12.（2）通(tōng)常購(gòu)買(mǎi)試(shì)劑時(shí)一定要想(xiǎng)到一次(cì)性(xìng)用(yòng)完(wán)。若(ruò)估算不足有剩餘的話，更加注意(yì)其(qí)他(tā)保管和(hé)管理。
13.（3）萬一試劑(jì)操作者並非(fēi)專(zhuān)業技術人(rén)員(yuán)。必須在專業人士的(dí)指導監(jiān)督下(xià)進行操(cāo)作。對於使用後的(dí)廢(fèi)棄物(wù)，不要或者舊的(dí)試劑，應按(àn)照相(xiāng)關法律法(fǎ)規正當(dāng)處理。
14.（4）購(gòu)買(mǎi)後(hòu)，請務必(bì)確認標簽上的注意事(shì)項；做(zuò)好預防(fáng)顛倒(dǎo)，摔壞(huài)的(dí)措施和管(guǎn)理(lǐ)體製；在使(shǐ)用前(qián)再(zài)次確(què)認標簽上的(dí)注(zhù)意事(shì)項(xiàng)，做(zuò)好必要(yào)的安全(quán)對策；對(duì)沒(méi)有標(biāo)明其危害特(tè)性，有害特(tè)性的(dí)，也(yě)要慎重(zhòng)地進行操(cāo)作(zuò)；必須帶好(hǎo)防(fáng)護用(yòng)具，小心(xīn)翼(yì)翼進行操作。