肝素elisa試(shì)劑盒操作(zuò)步驟(zhòu)

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的(dí)稀(xī)釋(shì)與加樣(yàng)：在酶(méi)標包被板上(shàng)設(shè)標準(zhǔn)品孔10孔，在di一
，第(dì)二(èr)孔中分別加(jiā)標準(zhǔn)品100μl，然(rán)後(hòu)在(zài)di一
，第二(èr)孔中(zhōng)加標準品稀釋液50μl，混匀；然後(hòu)從di一孔
，第(dì)二(èr)孔中各取(qǔ)100μl分別加到(dào)第(dì)三孔(kǒng)和第四孔(kǒng)，再在第三
，第四孔分(fēn)別加標準品(pǐn)稀釋(shì)液(yè)50μl，混匀；然後(hòu)在第三(sān)孔和第四孔中(zhōng)先各取50μl棄(qì)掉(diào)，再各(gè)取(qǔ)50μl分別(bié)取50μl分別加(jiā)到(dào)第七(qī)
，第八(bā)孔(kǒng)中，再在(zài)第七
，第(dì)八(bā)孔(kǒng)中分別加(jiā)標準品稀釋液50μl，混匀後從第(dì)七
，第八孔中加到第(dì)五
，第六孔中(zhōng)，再在第五
，第六孔中分別(bié)加(jiā)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋(shì)液50ul，混匀(yún)；混匀後從第五
，第六(liù)孔(kǒng)中各(gè)分別取50μl加(jiā)到第(dì)九(jiǔ)
，第(dì)十孔中(zhōng)，再(zài)在第(dì)九(jiǔ)第(dì)十(shí)孔(kǒng)分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(yè)50μl，混(hùn)匀後從第(dì)九第十孔(kǒng)中(zhōng)各(gè)取(qǔ)50μl棄掉。（稀(xī)釋後(hòu)各孔加樣(yàng)量(liáng)都為50μl，濃度分別(bié)為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加樣(yàng)：分別(bié)設(shè)空(kōng)白孔（空白(bái)對照(zhào)孔不加樣(yàng)品(pǐn)及酶標試(shì)劑，其餘(yú)各步(bù)操作(zuò)相同）
，待(dài)測(cè)樣品孔。在酶標包被(bèi)板上(shàng)待(dài)測(cè)樣品孔(kǒng)中先加樣品稀釋(shì)液(yè)40μl，然後再(zài)加待測樣品10μl（樣品最終稀(xī)釋度為(wéi)5倍(bèi)）。加(jiā)樣將樣品加於(yú)酶(méi)標(biāo)板孔底(dǐ)部(bù)，盡(jìn)量(liáng)不觸(chù)及孔壁，輕輕(qīng)晃動混(hùn)匀。
3. 溫(wēn)育：用封(fēng)板(bǎn)膜封(fēng)板後置37℃溫育(yù)30分(fēn)鐘(zhōng)。
4. 配(pèi)液：將(jiāng)30（48T的(dí)20倍(bèi)）倍(bèi)濃(nóng)縮洗滌(dí)液用蒸餾水30（48T的(dí)20倍(bèi)）倍稀釋後備(bèi)用(yòng)。
5. 洗滌：小(xiǎo)心(xīn)揭(jiē)掉(diào)封板膜(mó)，棄(qì)去液體，甩幹(gān)，每(měi)孔加滿(mǎn)洗(xǐ)滌(dí)液，靜(jìng)置(zhì)30秒(miǎo)後棄(qì)去(qù)，如此(cǐ)重(zhòng)復(fù)5次，拍幹(gān)。
6. 加(jiā)酶(méi)：每孔加(jiā)入酶標試(shì)劑50μl，空白孔除外(wài)。
7. 溫育：操(cāo)作同3。
8. 洗(xǐ)滌：操作同(tóng)5。
9. 顯(xiǎn)色：每孔先加(jiā)入顯(xiǎn)色劑(jì)A50μl，再加(jiā)入顯色劑(jì)B50μl，輕輕震(zhèn)蕩(dàng)混匀(yún)，37℃避(bì)光顯(xiǎn)色15分鐘.
10. 終止：每(měi)孔加終(zhōng)止液50μl，終止反(fǎn)應(yīng)（此時(shí)藍色立轉黃色）。
11. 測(cè)定：以空(kōng)白(bái)空調零，450nm波長依(yī)序(xù)測(cè)量各孔的吸(xī)光度(dù)（OD值）。 測(cè)定應在(zài)加(jiā)終止液(yè)後15分鐘。