試(shì)驗原理(lǐ)：
TRH試劑(jì)盒(hé)是(shì)固(gù)相(xiāng)夾心(xīn)法(fǎ)酶聯免疫吸附實(shí)驗（ELISA）.已(yǐ)知TRH濃度的標準(zhǔn)品(pǐn)，未知濃(nóng)度的樣品(pǐn)加入微(wēi)孔(kǒng)酶標(biāo)板(bǎn)內(nèi)進行檢測(cè)。先將TRH和生物(wù)素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌後(hòu)，加入親和素(sù)標記過的(dí)HRP。再經(jīng)過(guò)溫育(yù)和洗(xǐ)滌，去(qù)除(chú)未結(jié)合的酶結合(hé)物，然(rán)後加入(rù)底物(wù)A，B，和(hé)酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生(shēng)顏(yán)色(sè)。顏(yán)色的(dí)深(shēn)淺和(hé)樣品中TRH的濃(nóng)度呈比例關係(xì)。
試劑(jì)盒內(nèi)容及(jí)其配製
試(shì)劑(jì)盒(hé)成(chéng)份(fèn)（2-8℃保(bǎo)存(cún)） 96孔配置 48孔(kǒng)配置 配(pèi)製(zhì)
96/48人份(fèn)酶標(biāo)板(bǎn) 1塊(kuài)板（96T） 半塊(kuài)板(bǎn)（48T） 即用型
塑(sù)料膜(mó)板蓋(gài) 1塊 半塊 即用型
標準品(pǐn)：24ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說(shuō)明(míng)書(shū)進(jìn)行(háng)稀稀
空(kōng)白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標(biāo)準品(pǐn)稀釋緩衝液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即(jí)用型(xíng)
生物(wù)素標記的抗TRH抗體(tǐ) 1瓶(píng)（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶(méi)素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶(píng)（5.0ml） 即(jí)用型
洗滌緩(huǎn)衝液(yè) 1瓶(píng)（20ml） 1瓶（10ml） 按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋(shì)
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型(xíng)
底(dǐ)物(wù)B 1瓶（6.0ml） 1瓶(píng)（3.0ml） 即(jí)用型
終(zhōng)止液(yè) 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即(jí)用(yòng)型
自備(bèi)材料
1． 蒸(zhēng)餾水(shuǐ)。
2． 加樣器：5ul，10ul，50ul，100ul，200，500ul，1000ul。
3． 振(zhèn)蕩(dàng)器及(jí)磁力攪(jiǎo)拌器等(děng)。
安全性
1． 避(bì)免(miǎn)直(zhí)接(jiē)接(jiē)觸(chù)終止液(yè)和(hé)底(dǐ)物(wù)A，B。一(yī)旦接觸到這(zhè)些(xiē)液(yè)體(tǐ)，請盡快用水(shuǐ)衝(chōng)洗。
2． 實驗(yàn)中不要吃(chī)喝(hē)，抽(chōu)煙或使用化妝(zhuāng)品(pǐn)。
3． 不要用(yòng)嘴吸取(qǔ)試劑(jì)盒(hé)裏的(dí)任何成份。
操(cāo)作(zuò)注意(yì)事(shì)項(xiàng)
1． 試劑應按標簽說(shuō)明(míng)書(shū)儲存，使(shǐ)用前恢(huī)復到(dào)室溫(wēn)。稀稀過後(hòu)的標準(zhǔn)品應丟棄，不可保存。
2． 實(shí)驗(yàn)中不(bù)用的板(bǎn)條應立即(jí)放(fàng)回(huí)包(bāo)裝袋(dài)中，密(mì)封保(bǎo)存(cún)，以(yǐ)免(miǎn)變(biàn)質(zhì)。
3． 不用的其(qí)它試劑(jì)應(yīng)包裝(zhuāng)好或(huò)蓋好(hǎo)。不同批(pī)號(hào)的試劑不(bù)要(yào)混(hùn)用(yòng)。保(bǎo)質(zhì)前使用。
4． 使(shǐ)用一次性的(dí)吸(xī)頭(tóu)以免(miǎn)交(jiāo)叉汙染，吸取(qǔ)終(zhōng)止液和(hé)底(dǐ)物A，B液(yè)時，避(bì)免(miǎn)使(shǐ)用帶(dài)金屬(shǔ)部分的加(jiā)樣器。
5． 使用(yòng)幹淨(jìng)的塑(sù)料容器配置(zhì)洗滌(dí)液(yè)。使(shǐ)用(yòng)前(qián)充分混(hùn)匀試(shì)劑盒裏(lǐ)的(dí)各種成份(fèn)及(jí)樣(yàng)品(pǐn)。
6． 洗滌酶(méi)標板(bǎn)時(shí)應充(chōng)分(fēn)拍幹，不(bù)要將吸水(shuǐ)紙直接(jiē)放入酶標反應孔中吸水(shuǐ)。
7． 底(dǐ)物(wù)A應(yīng)揮發(fā)，避免(miǎn)長(cháng)時(shí)間打(dǎ)開(kāi)蓋子(zǐ)。底物B對(duì)光(guāng)敏感(gǎn)，避免長時間暴(bào)露於光(guāng)下(xià)。避(bì)免(miǎn)用手接(jiē)觸(chù)，有毒。實驗完(wán)成(chéng)後(hòu)應立即讀取OD值。
8． 加(jiā)入(rù)試劑的(dí)順(shùn)序(xù)應一致(zhì)，以(yǐ)保(bǎo)證所有(yǒu)反應板孔溫育的(dí)時間(jiān)一樣。
9． 按(àn)照(zhào)說明(míng)書中標(biāo)明(míng)的時間，加液的量及順(shùn)序(xù)進行(háng)溫(wēn)育操(cāo)作。
樣品(pǐn)收(shōu)集，處(chǔ)理及(jí)保存(cún)方法
1， 血(xiě)清-----操作過程中(zhōng)避免任何細(xì)胞(bāo)刺激。使用不(bù)含熱原(yuán)和內毒(dú)素的試管(guǎn)。收(shōu)集血液後(hòu)，1000×g離心10分鐘將血清(qīng)和(hé)紅細胞迅速(sù)小心地(dì)分(fēn)離(lí)。
2， 血漿-----EDTA，檸檬酸(suān)鹽(yán)，肝(gān)素(sù)血漿可用(yòng)於檢測。1000×g離心30分鐘(zhōng)去除(chú)顆(kē)粒。
3， 細胞上清液(yè)---1000×g離(lí)心10分鐘去(qù)除顆(kē)粒和聚合(hé)物。
4， 保存------如(rú)果(guǒ)樣(yàng)品不立即使用，應(yīng)將其分(fēn)成(chéng)小部分(fēn)-70 ℃保(bǎo)存，避(bì)免反復冷凍。盡可(kě)能的(dí)不(bù)要使用(yòng)溶血或高(gāo)血脂血。如果血(xiě)清中(zhōng)大量(liáng)顆粒，檢測前(qián)先離(lí)心(xīn)或過濾(lǜ)。不(bù)要在(zài)37℃或更(gēng)高的溫(wēn)度加熱解(jiě)凍。應(yīng)在(zài)室(shì)溫下(xià)解(jiě)凍並(bìng)確保樣(yàng)品(pǐn)均匀(yún)地充分解(jiě)凍。
試劑的(dí)準備
1． 標準品：標(biāo)準品(pǐn)的係(xì)列稀(xī)釋(shì)應在(zài)實驗時準(zhǔn)備，不(bù)能(néng)儲存。稀(xī)釋(shì)前(qián)將(jiāng)標(biāo)準(zhǔn)品振蕩(dàng)混匀(yún)。稀釋(shì)比例按(àn)下表(biǎo)中進行：
24 ng/ml （6號(hào)標準品） 原倍濃度不(bù)用稀釋直(zhí)接(jiē)加入(rù)50ul。
12 ng/ml （5號標準(zhǔn)品） 100ul的原倍標準(zhǔn)品(pǐn)加入100ul的(dí)標準(zhǔn)品稀(xī)釋液
6.0 ng/ml （4號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號標(biāo)準品加(jiā)入100ul的標準品(pǐn)稀(xī)釋(shì)液(yè)
3.0 ng/ml （3號(hào)標準品(pǐn)） 100ul的(dí)4號標準(zhǔn)品加(jiā)入100ul的(dí)標準品(pǐn)稀釋液
1.5 ng/ml （2號標準品） 100ul的3號(hào)標準品加(jiā)入(rù)100ul的(dí)標準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋(shì)液(yè)
0.75 ng/ml （1號標準品） 100ul的2號標準品(pǐn)加入100ul的(dí)標準品稀釋(shì)液(yè)
0 ng/ml （空(kōng)白對照(zhào)） 原始(shǐ)濃(nóng)度不(bù)用(yòng)稀釋直接加(jiā)入(rù)50ul。
2． 洗滌緩(huǎn)衝液(yè)（50×）的稀釋(shì)：蒸餾水50倍稀釋(shì)。
操作(zuò)步(bù)驟
1． 使(shǐ)用前(qián)，將(jiāng)所有試劑充分混匀。不(bù)要(yào)使液體產生大(dà)量(liáng)的(dí)泡(pào)沫(mò)，以免加樣時加入(rù)大量(liáng)的(dí)氣(qì)泡，產生加樣上的誤(wù)差(chà)。
2． 根據待測(cè)樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定(dìng)所需(xū)的板(bǎn)條數。每個標準品和空白孔(kǒng)建(jiàn)議(yì)做復(fù)孔。每個(gè)樣(yàng)品(pǐn)根(gēn)據自己的(dí)數量(liáng)來(lái)定，能使(shǐ)用復孔(kǒng)的盡量(liáng)做(zuò)復(fù)孔。
3． 加入稀(xī)釋(shì)好後的標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)50ul於(yú)反應孔，加入待(dài)測樣品50ul於(yú)反應孔內。立即(jí)加入50ul的生物(wù)素(sù)標記的抗體(tǐ)。蓋(gài)上膜板，輕輕振(zhèn)蕩混(hùn)匀，37℃溫育(yù)1小時(shí)。
4． 甩(shuǎi)去(qù)孔內(nèi)液(yè)體，每(měi)孔加滿(mǎn)洗滌液(yè)，振蕩30秒，甩去洗滌液(yè)，用吸水紙拍(pāi)幹(gān)。重(zhòng)復此(cǐ)操作3次。如(rú)果用(yòng)洗板(bǎn)機洗滌，洗滌(dí)次(cì)數(shù)增(zēng)加一次(cì)。
5． 每(měi)孔加(jiā)入80ul的(dí)親(qīn)和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混(hùn)匀(yún)，37℃溫(wēn)育30分(fēn)鐘(zhōng)。
6． 甩去孔(kǒng)內液體，每(měi)孔(kǒng)加滿(mǎn)洗滌液(yè)，振(zhèn)蕩(dàng)30秒(miǎo)，甩去(qù)洗滌(dí)液，用吸(xī)水(shuǐ)紙(zhǐ)拍幹(gān)。重(zhòng)復(fù)此操作3次。如果用(yòng)洗(xǐ)板機洗滌，洗(xǐ)滌(dí)次(cì)數(shù)增(zēng)加一(yī)次。
7． 每孔(kǒng)加入(rù)底物A，B各50ul，輕輕(qīng)振蕩混匀(yún)，37℃溫育(yù)10分鐘(zhōng)。避免(miǎn)光(guāng)照(zhào)。
8． 取(qǔ)出酶(méi)標板(bǎn)，迅(xùn)速加入(rù)50ul終(zhōng)止液，加(jiā)入終(zhōng)止(zhǐ)液後應立即測定結果。
9． 在450nm波長(cháng)處測(cè)定各孔(kǒng)的OD值。
建(jiàn)議使用(yòng)的實驗(yàn)方(fāng)案(àn)
 標準(zhǔn)品濃度（ng/ml） 
A 24 24 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品
B 12 12 樣品 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品
C 6.0 6.0 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品
D 3.0 3.0 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品
E 1.5 1.5 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn)
F 0.75 0.75 樣品 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品(pǐn) 樣品
G 0 0 樣品 樣品(pǐn) 樣品 樣品(pǐn) 樣(yàng)品 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣品
H 樣品(pǐn) 樣(yàng)品(pǐn) 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣(yàng)品 樣品 樣品 樣(yàng)品 樣品(pǐn) 樣品 樣(yàng)品 樣(yàng)品

局(jú)限
6號標準(zhǔn)品以(yǐ)上的(dí)結(jié)果(guǒ)為(wéi)非(fēi)綫(xiàn)性(xìng)的，根據此(cǐ)標準(zhǔn)曲(qū)綫無法得到(dào)的(dí)結果。
試劑(jì)盒(hé)性(xìng)能
1. 靈敏度：zui小(xiǎo)的檢(jiǎn)測(cè)濃度(dù)小於(yú)1號(hào)標準(zhǔn)品(pǐn)。稀(xī)釋度的綫性。樣品綫(xiàn)性回歸與預期濃(nóng)度(dù)相關係數(shù)R值(zhí)為(wéi)0.990。
2. 特異(yì)性(xìng)：不與其(qí)它(tā)細胞因子(zǐ)反應(yīng)。
3. 重(zhòng)復(fù)性(xìng)：板內，板(bǎn)間變異係數均小(xiǎo)於10%。
結 果(guǒ) 判(pàn) 斷(duàn) 與 分(fēn) 析(xī)
1，儀(yí)器(qì)值(zhí)：於(yú)波長450nm的酶(méi)標儀(yí)上讀(dú)取各(gè)孔(kǒng)的(dí)OD值
2，以吸(xī)光度OD值為縱坐標（Y），相應的TRH標準(zhǔn)品(pǐn)濃(nóng)度(dù)為(wéi)橫(héng)坐(zuò)標（X），做(zuò)得相應的曲(qū)綫，樣品(pǐn)的(dí)TRH含(hán)量(liáng)可(kě)根(gēn)據其OD值由(yóu)標準曲綫(xiàn)換算(suàn)出(chū)相(xiāng)應的(dí)濃度。
3，檢測值範圍：0-24ng/ml
4，敏感度(dù)： 0.1 ng/ml