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PCR檢測(cè)試(shì)劑盒
商(shāng)品(pǐn)屬(shǔ)性
| 產品(pǐn)名稱 | 英(yīng)文名稱(chēng) | 貨號 |
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隱孢子(zǐ)蟲通(tōng)用(yòng)PCR檢測試(shì)劑盒(hé) |
Cryptosporidium spp.PCR |
YS-P014073 |
分類(lèi)：PCR檢測試(shì)劑盒
儲存(cún)條件：-20℃避(bì)光保(bǎo)存(cún)，避免反復凍融(róng)。
運(yùn)輸：低溫，避(bì)光。
有(yǒu)效(xiào)期(qī)：一年
貨期：現(xiàn)貨PCR試劑盒的(dí)有(yǒu)效期(qī)一般(bān)為1年，這是指在適(shì)當(dāng)的(dí)儲存(cún)溫(wēn)度下。核酸擴增(zēng)部(bù)分(fēn)的(dí)試(shì)劑一(yī)般(bān)要(yào)貯(zhù)存於-20℃下，產(chǎn)物檢(jiǎn)測部分試(shì)劑(jì)則貯存於2-8℃。盡量避免反(fǎn)復凍(dòng)融(róng)。
【結(jié)果分(fēn)析條件(jiàn)設定(dìng)】
u 閾值(zhí)(Threshold)設定(dìng)：將閾值綫(xiàn)設(shè)定在(zài)剛(gāng)好(hǎo)超(chāo)過正(zhèng)常陰性質(zhì)控品擴(kuò)增曲綫(xiàn)的(dí)最高點。
【質(zhì)控標(biāo)準】
2. 陽(yáng)性(xìng)質(zhì)控品(pǐn)的檢(jiǎn)測結果(guǒ)應為陽性，有明(míng)顯的(dí)指數(shù)擴增(zēng)期，Ct值(zhí)應(yīng)小於等於(yú)35；
3. 以(yǐ)上要(yào)求需(xū)在(zài)一(yī)次(cì)實(shí)驗(yàn)中(zhōng)同時(shí)滿(mǎn)足，否則(zé)該(gāi)次(cì)實驗(yàn)視為無效。
【結果判斷(duàn)】
2.可(kě)疑：有(yǒu)明顯(xiǎn)的指數擴增(zēng)期(qī)，且38≤Ct<40，此時樣(yàng)本(běn)為可疑樣本(běn)；對(duì)於(yú)可(kě)疑樣本建議(yì)復核一(yī)次(cì)，若復核(hé)結果Ct<40且有指數(shù)擴增(zēng)期，則(zé)判(pàn)定(dìng)為陽(yáng)性，否(fǒu)則(zé)判(pàn)定為(wéi)陰性；
3. 陰性：無指(zhǐ)數擴增(zēng)期(qī)，Ct=40或無(wú)Ct值(zhí)均判(pàn)定(dìng)為陰性(xìng)樣本。
【對檢(jiǎn)驗(yàn)結果(guǒ)的解(jiě)釋(shì)】
1. 實(shí)驗室環(huán)境汙染(rǎn)，試劑汙(wū)染，樣(yàng)品交叉(chā)汙(wū)染(rǎn)會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；
2. 試劑運(yùn)輸(shū)，保存不(bù)當(dāng)或(huò)試(shì)劑配製(zhì)不(bù)準確引(yǐn)起(qǐ)的試(shì)劑檢測效(xiào)能下(xià)降(jiàng)，可能會導致出現(xiàn)假陰(yīn)性結(jié)果(guǒ)。
PCR反(fǎn)應的特(tè)異性：
②鹼基配對(duì)原(yuán)則(zé)；
③Taq DNA聚(jù)合(hé)酶合(hé)成(chéng)反應(yīng)的忠實性(xìng)；
④靶(bǎ)基(jī)因的特異性(xìng)與保守(shǒu)性。
隱(yǐn)孢子(zǐ)蟲通(tōng)用(yòng)PCR檢測試(shì)劑盒(hé)其中(zhōng)引物與模(mó)板(bǎn)的正確結合是關鍵(jiàn)。引(yǐn)物與模(mó)板的結合(hé)及(jí)引物(wù)鏈的延伸是遵循(xún)鹼基配對原(yuán)則(zé)的。聚合酶合(hé)成反應的忠(zhōng)實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性(xìng)，使反應(yīng)中模(mó)板與引物(wù)的(dí)結合(復性(xìng))可(kě)以在較(jiào)高的(dí)溫度下進行(háng)，結合(hé)的(dí)特異性(xìng)大大增(zēng)加，被(bèi)擴增(zēng)的靶基(jī)因片段(duàn)也(yě)就能保持(chí)很高的正確度。再(zài)通(tōng)過選(xuǎn)擇特異性(xìng)和(hé)保(bǎo)守性(xìng)高(gāo)的靶(bǎ)基因區，其(qí)特異性程(chéng)度就更高(gāo)。
(2) 靈(líng)敏(mǐn)度(dù)高(gāo)
PCR產(chǎn)物的生成(chéng)量是以指(zhǐ)數(shù)方式增加的(dí)，能將(jiāng)皮克(pg=10-12g)量(liáng)級的(dí)起(qǐ)始待測(cè)模(mó)板擴增到(dào)微克(ug=10-6g)水(shuǐ)平。能(néng)從(cóng)100萬個(gè)細(xì)胞(bāo)中(zhōng)檢出一(yī)個靶細胞(bāo)；在(zài)病(bìng)毒(dú)的(dí)檢測中，PCR的靈敏(mǐn)度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑(bān)形成單位(wèi))；在細菌(jūn)學(xué)中zui小檢出率為(wéi)3個(gè)細菌(jūn)。
(3) 簡便，快速
PCR反應用耐(nài)高溫的Taq DNA聚合酶，一次性(xìng)地將(jiāng)反應液加好後，即(jí)在DNA擴(kuò)增液和水(shuǐ)浴(yù)鍋上進(jìn)行(háng)變性-退火-延伸(shēn)反(fǎn)應，一般(bān)在2～4 小時完成(chéng)擴增(zēng)反應(yīng)。擴增產(chǎn)物(wù)一(yī)般(bān)用電泳分(fēn)析(xī)，不(bù)一定要(yào)用(yòng)同(tóng)位素(sù)，無放(fàng)射性汙(wū)染，易推(tuī)廣(guǎng)。
(4) 對標本的純(chún)度要(yào)求低
不(bù)需要(yào)分離(lí)病(bìng)毒(dú)或(huò)細(xì)菌及(jí)培養細胞，DNA 粗(cū)製品(pǐn)及(jí)總(zǒng)RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨(lín)床標(biāo)本如血(xiě)液，體腔(qiāng)液，洗(xǐ)嗽(sòu)液(yè)，毛(máo)發，細(xì)胞(bāo)，活PCR技(jì)術概論。
