產品(pǐn)中(zhōng)心(xīn)
PCR檢測(cè)試(shì)劑盒
| 產品名稱(chēng) | 英文名稱 | 貨(huò)號 |
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綿(mián)羊腺(xiàn)病(bìng)毒PCR檢測試劑盒 |
Ovine AdenovirusPCR |
YS-P014544 |
分類:PCR檢(jiǎn)測(cè)試劑(jì)盒
儲存(cún)條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低(dī)溫,避(bì)光(guāng)。
有效(xiào)期:一(yī)年(nián)
貨期(qī):現貨(huò)PCR試(shì)劑(jì)盒(hé)的有(yǒu)效期(qī)一般(bān)為1年,這是指(zhǐ)在適(shì)當的(dí)儲存溫(wēn)度下。核(hé)酸擴(kuò)增部分的試(shì)劑一(yī)般(bān)要貯存於(yú)-20℃下,產物檢測部分試劑(jì)則(zé)貯存(cún)於2-8℃。盡量避(bì)免反復(fù)凍(dòng)融。
u 閾值(Threshold)設定:將(jiāng)閾值(zhí)綫(xiàn)設定(dìng)在剛好(hǎo)超過(guò)正(zhèng)常(cháng)陰(yīn)性(xìng)質控品擴增曲(qū)綫的(dí)最高(gāo)點。
2. 陽性質控品的檢(jiǎn)測結(jié)果應為陽(yáng)性(xìng),有明顯(xiǎn)的(dí)指(zhǐ)數擴增(zēng)期(qī),Ct值應小於等(děng)於35;
3. 以上要(yào)求需在一次(cì)實(shí)驗中(zhōng)同時滿足(zú),否則(zé)該(gāi)次實(shí)驗視(shì)為(wéi)無效。
2.可疑:有明顯(xiǎn)的(dí)指數擴(kuò)增期,且(qiě)38≤Ct<40,此時樣(yàng)本為可疑樣本(běn);對於(yú)可疑樣本建(jiàn)議復核一(yī)次(cì),若復(fù)核結果Ct<40且有指數擴(kuò)增期(qī),則判(pàn)定為(wéi)陽(yáng)性,否則判定為陰性(xìng);
3. 陰性:無指(zhǐ)數擴增(zēng)期,Ct=40或無Ct值(zhí)均判(pàn)定為陰(yīn)性(xìng)樣本。
【對檢(jiǎn)驗結(jié)果的(dí)解釋】
1. 實驗室(shì)環境(jìng)汙(wū)染,試(shì)劑汙染(rǎn),樣(yàng)品交(jiāo)叉汙(wū)染會出現假陽(yáng)性(xìng)結果;
2. 試劑運輸,保存不(bù)當或(huò)試(shì)劑配製不(bù)準(zhǔn)確(què)引起的(dí)試劑檢(jiǎn)測效能(néng)下(xià)降(jiàng),可(kě)能(néng)會導(dǎo)致出現假(jiǎ)陰性(xìng)結果(guǒ)。
②鹼基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成(chéng)反(fǎn)應(yīng)的(dí)忠(zhōng)實(shí)性;
④靶基(jī)因的特(tè)異性(xìng)與保守(shǒu)性。
綿(mián)羊腺(xiàn)病毒PCR檢測試(shì)劑盒其中(zhōng)引物與(yǔ)模板(bǎn)的(dí)正(zhèng)確(què)結合是(shì)關(guān)鍵。引(yǐn)物(wù)與模板的結(jié)合(hé)及引物鏈的(dí)延(yán)伸是(shì)遵循(xún)鹼(jiǎn)基配(pèi)對原(yuán)則(zé)的(dí)。聚合酶合(hé)成反(fǎn)應的(dí)忠(zhōng)實性(xìng)及(jí)Taq DNA聚合(hé)酶耐高溫性(xìng),使(shǐ)反應中模(mó)板與(yǔ)引物的(dí)結合(hé)(復性)可(kě)以在較高的(dí)溫(wēn)度下(xià)進行(háng),結(jié)合的(dí)特(tè)異(yì)性大(dà)大增(zēng)加(jiā),被(bèi)擴增的靶基因(yīn)片(piàn)段(duàn)也就(jiù)能保持很高的(dí)正(zhèng)確(què)度。再(zài)通(tōng)過(guò)選(xuǎn)擇(zé)特(tè)異性和(hé)保守(shǒu)性高的靶(bǎ)基因區,其特(tè)異性(xìng)程度(dù)就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的(dí)生成量(liáng)是(shì)以指(zhǐ)數(shù)方(fāng)式(shì)增(zēng)加的(dí),能將皮克(pg=10-12g)量級的起始(shǐ)待測(cè)模板擴增(zēng)到微克(kè)(ug=10-6g)水(shuǐ)平。能(néng)從(cóng)100萬個細胞中檢(jiǎn)出(chū)一個靶細胞;在(zài)病毒(dú)的(dí)檢測(cè)中(zhōng),PCR的(dí)靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細菌(jūn)學中zui小檢出率為(wéi)3個(gè)細菌。
(3) 簡便,快速
PCR反(fǎn)應用耐高溫的Taq DNA聚(jù)合(hé)酶,一次(cì)性地將反(fǎn)應液加(jiā)好(hǎo)後,即(jí)在DNA擴(kuò)增液和(hé)水浴(yù)鍋上(shàng)進行變(biàn)性-退火-延伸(shēn)反應,一(yī)般在2~4 小(xiǎo)時完(wán)成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一(yī)般用電泳分(fēn)析(xī),不一定(dìng)要用(yòng)同位素(sù),無(wú)放射性汙染,易(yì)推(tuī)廣(guǎng)。
(4) 對標(biāo)本(běn)的(dí)純(chún)度要(yào)求(qiú)低
不(bù)需要(yào)分離(lí)病(bìng)毒(dú)或細菌(jūn)及(jí)培養(yǎng)細胞,DNA 粗(cū)製品及總RNA均(jūn)可作為(wéi)擴增(zēng)模板(bǎn)。可(kě)直接(jiē)用臨(lín)床標本如(rú)血(xiě)液(yè),體(tǐ)腔液(yè),洗(xǐ)嗽(sòu)液,毛(máo)發,細(xì)胞,活PCR技術(shù)概論(lùn)。
