大(dà)鼠P0蛋白ELISA檢測試(shì)劑(jì)盒(hé)操作步(bù)驟

1. 標準品的稀釋(shì)與加樣：在酶(méi)標包被板上(shàng)設標準品(pǐn)孔10孔，在di一，第二(èr)孔中分(fēn)別加(jiā)標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然(rán)後(hòu)在di一，第二孔(kǒng)中加(jiā)標(biāo)準品(pǐn)稀(xī)釋液50μl，混(hùn)匀；然後(hòu)從(cóng)di一孔，第二(èr)孔(kǒng)中(zhōng)各(gè)取(qǔ)100μl分(fēn)別(bié)加到第三(sān)孔和(hé)第四(sì)孔(kǒng)，再在第(dì)三(sān)，第四孔(kǒng)分(fēn)別加標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋(shì)液(yè)50μl，混(hùn)匀(yún)；然後在第三(sān)孔和(hé)第四孔(kǒng)中先各取50μl棄掉(diào)，再各取(qǔ)50μl分(fēn)別取50μl分別(bié)加(jiā)到第(dì)七，第八(bā)孔中(zhōng)，再在第七(qī)，第(dì)八孔中(zhōng)分(fēn)別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混匀(yún)後(hòu)從第(dì)七，第八孔(kǒng)中加到第五，第(dì)六(liù)孔中，再在(zài)第五(wǔ)，第六孔中分別加(jiā)標(biāo)準品稀(xī)釋液50ul，混匀(yún)；混(hùn)匀後(hòu)從(cóng)第五，第(dì)六(liù)孔中(zhōng)各分別取50μl加(jiā)到(dào)第九，第十孔中，再在第(dì)九第(dì)十孔分(fēn)別(bié)加(jiā)標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋(shì)液50μl，混(hùn)匀後(hòu)從第九第十孔中(zhōng)各取50μl棄(qì)掉。（稀(xī)釋後各孔(kǒng)加樣量(liáng)都為50μl，濃(nóng)度(dù)分(fēn)別為(wéi)180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加樣：分別(bié)設空白(bái)孔(kǒng)（空(kōng)白對照孔(kǒng)不(bù)加(jiā)樣(yàng)品(pǐn)及酶標(biāo)試劑，其餘各步操(cāo)作(zuò)相同），待(dài)測(cè)樣品孔。在(zài)酶標包被(bèi)板上待(dài)測樣品孔(kǒng)中先加樣(yàng)品稀(xī)釋(shì)液40μl，然後再加(jiā)待(dài)測樣品10μl（樣品最(zuì)終稀釋度(dù)為5倍）。加樣(yàng)將樣品(pǐn)加(jiā)於(yú)酶(méi)標板孔底部(bù)，盡量不觸及(jí)孔壁，輕(qīng)輕晃動(dòng)混(hùn)匀。
3. 溫(wēn)育：用(yòng)封板(bǎn)膜封板(bǎn)後置(zhì)37℃溫育30分鐘。
4. 配(pèi)液：將30（48T的(dí)20倍）倍(bèi)濃(nóng)縮洗滌(dí)液用蒸(zhēng)餾水(shuǐ)30（48T的20倍(bèi)）倍稀釋(shì)後(hòu)備用。
5. 洗滌：小心揭掉(diào)封板膜(mó)，棄去液體，甩幹，每孔(kǒng)加滿(mǎn)洗(xǐ)滌液，靜(jìng)置(zhì)30秒後棄(qì)去，如此重復(fù)5次，拍幹。
6. 加酶(méi)：每(měi)孔(kǒng)加入(rù)酶標(biāo)試劑(jì)50μl，空(kōng)白孔除外(wài)。
7. 溫育(yù)：操作(zuò)同3。
8. 洗(xǐ)滌(dí)：操作(zuò)同(tóng)5。
9. 顯(xiǎn)色(sè)：每孔(kǒng)先加(jiā)入顯(xiǎn)色劑A50μl，再(zài)加入(rù)顯色(sè)劑(jì)B50μl，輕(qīng)輕震(zhèn)蕩(dàng)混匀，37℃避(bì)光(guāng)顯色15分鐘.
10. 終(zhōng)止：每(měi)孔加終止液(yè)50μl，終止反(fǎn)應（此(cǐ)時藍色(sè)立轉黃色(sè)）。
11. 測(cè)定：以(yǐ)空(kōng)白空(kōng)調(tiáo)零(líng)，450nm波長(cháng)依(yī)序測量各孔(kǒng)的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在(zài)加(jiā)終止(zhǐ)液(yè)後15分鐘(zhōng)。