犬諾(nuò)瓦克病毒PCR檢測試劑(jì)盒使(shǐ)用方(fāng)法：
測(cè)定法(fǎ)的靈(líng)敏(mǐn)度來自作為(wéi)報(bào)告(gào)的(dí)酶(méi)。酶是一(yī)種有(yǒu)機催化劑(jì)，很少量的酶(méi)即可(kě)誘(yòu)導大量的催化(huà)反應(yīng)，產(chǎn)生(shēng)可供觀察的(dí)顯色反應現象(xiàng)。因此該體係常被稱(chēng)為(wéi)酶放大體(tǐ)係。
1. 標準(zhǔn)品的稀(xī)釋(shì)：本(běn)試劑盒提(tí)供原倍標準(zhǔn)品(pǐn)一(yī)支，用(yòng)戶可(kě)按(àn)照(zhào)下(xià)列圖表在小試(shì)管(guǎn)中進(jìn)行稀(xī)釋。   24μg/ml    5號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標準品(pǐn)加(jiā)入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 12μg/ml    4號(hào)標準品    150μl的(dí)5號標準品(pǐn)加(jiā)入150μl標準(zhǔn)品稀釋(shì)液
 6μg/ml     3號標準(zhǔn)品(pǐn)    150μl的4號(hào)標準品(pǐn)加入150μl標準(zhǔn)品稀(xī)釋液(yè)
 3μg/ml     2號標準(zhǔn)品    150μl的(dí)3號標(biāo)準品加(jiā)入(rù)150μl標準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋液
 1.5μg/ml   1號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)    150μl的(dí)2號標準(zhǔn)品加入150μl標準(zhǔn)品稀(xī)釋液
2. 加樣(yàng)：分(fēn)別(bié)設(shè)空(kōng)白(bái)孔(kǒng)，標準(zhǔn)孔(kǒng)，待(dài)測(cè)樣品(pǐn)孔(kǒng)。在酶(méi)標包被(bèi)板上標(biāo)準品(pǐn)準確(què)加樣50μl，待(dài)測樣(yàng)品(pǐn)孔中(zhōng)先(xiān)加樣品稀(xī)釋(shì)液40μl，然後(hòu)再加待測(cè)樣品(pǐn)10μl（樣品終稀(xī)釋(shì)度為(wéi)5倍）。加(jiā)樣(yàng)將(jiāng)樣品(pǐn)加於酶標(biāo)板孔底(dǐ)部，盡(jìn)量(liáng)不(bù)觸及(jí)孔(kǒng)壁，輕(qīng)輕晃(huǎng)動混(hùn)匀。|
3. 溫育：用(yòng)封(fēng)板(bǎn)膜封板後(hòu)置(zhì)37℃溫(wēn)育(yù)30分鐘(zhōng)。   
4. 配(pèi)液(yè)：將(jiāng)30倍濃(nóng)縮洗滌(dí)液(yè)用蒸(zhēng)餾(liù)水(shuǐ)30倍稀(xī)釋後備用(yòng)
5. 洗滌：小心揭掉(diào)封(fēng)板(bǎn)膜(mó)，棄(qì)去(qù)液體，甩幹(gān)，每(měi)孔加滿洗滌液，靜(jìng)置(zhì)30秒(miǎo)後(hòu)棄(qì)去，如此(cǐ)重復5次，拍幹(gān)。
6. 加酶：每(měi)孔(kǒng)加入酶標試劑50μl，空白(bái)孔除(chú)外(wài)。
7. 溫育：操作(zuò)同(tóng)3。
8. 洗滌：操作(zuò)同(tóng)5。
9. 顯(xiǎn)色：每孔(kǒng)先(xiān)加入(rù)顯(xiǎn)色(sè)劑A50μl，再加(jiā)入顯(xiǎn)色劑(jì)B50μl，輕輕(qīng)震蕩混匀，37℃避光(guāng)顯(xiǎn)色15分(fēn)鐘.
10. 終止：每孔(kǒng)加終止(zhǐ)液50μl，終(zhōng)止反(fǎn)應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以(yǐ)空白空調(tiáo)零，450nm波(bō)長(cháng)依序測量各(gè)孔(kǒng)的吸(xī)光度（OD值）。 測定應在加(jiā)終(zhōng)止(zhǐ)液後15分(fēn)鐘(zhōng)以內(nèi)進(jìn)行。