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技術文獻
人(rén)小(xiǎo)泛素(sù)相關(guān)修飾(shì)蛋白2(SUMO2)快速檢測(cè)ELISA試劑盒正(zhèng)確(què)使用作(zuò)用(yòng)
SUMO2 ELISA試(shì)劑(jì)盒主(zhǔ)要用(yòng)於體(tǐ)外定量(liáng)檢(jiǎn)測(cè)人(rén)血清,血漿,組(zǔ)織匀(yún)漿(jiāng),細(xì)胞(bāo)培養(yǎng)上清等樣本中的SUMO2蛋(dàn)白含(hán)量。其(qí)核(hé)心作(zuò)用是通(tōng)過酶聯(lián)免(miǎn)疫吸附(fù)實驗(ELISA)技術(shù),利用雙抗(kàng)體夾(jiā)心法原(yuán)理,實現對SUMO2蛋(dàn)白的高(gāo)靈敏度,高(gāo)特異性(xìng)檢測。
一,檢(jiǎn)測原(yuán)理
試劑(jì)盒采用雙(shuāng)抗(kàng)體夾(jiā)心(xīn)法:用純化的SUMO2抗體(tǐ)包(bāo)被(bèi)微孔板(bǎn),製成(chéng)固(gù)相(xiāng)抗體;往(wǎng)包被(bèi)單抗的(dí)微(wēi)孔中依次加(jiā)入(rù)樣(yàng)本(běn)和(hé)HRP標記(jì)的SUMO2抗(kàng)體(tǐ),形成抗體-抗(kàng)原-酶標抗體復合物(wù);經(jīng)過洗(xǐ)滌後(hòu)加底物TMB顯色,TMB在HRP酶的催化(huà)下(xià)轉(zhuǎn)化(huà)成(chéng)藍色,最(zuì)終(zhōng)在酸的(dí)作(zuò)用下轉化(huà)成黃色。顏(yán)色的深(shēn)淺(qiǎn)和(hé)樣(yàng)品(pǐn)中SUMO2的(dí)含量呈正(zhèng)相關。
二,檢測範(fàn)圍與靈敏(mǐn)度
檢(jiǎn)測範圍(wéi):0.312-20ng/mL。
靈(líng)敏(mǐn)度(dù):高(gāo)靈敏度(dù),適(shì)用於多(duō)種樣本(běn)類型(xíng)。
三,樣本(běn)類型
適用(yòng)樣(yàng)本(běn):血清(qīng),血漿(jiāng),組(zǔ)織匀漿,細(xì)胞培(péi)養(yǎng)上清,尿液,體(tǐ)液,灌洗液,腦(nǎo)脊髓(suǐ),心(xīn)房水(shuǐ),胸(xiōng)房水,組織等(děng)。
四,實驗注(zhù)意事(shì)項(xiàng)
洗(xǐ)滌(dí):不(bù)充分的(dí)洗(xǐ)滌(dí)會導(dǎo)致差異(yì)和高背(bèi)景,必要時(shí)可增(zēng)加(jiā)洗滌(dí)液(yè)中的鹽濃(nóng)度或(huò)洗滌(dí)次數(shù)。
封閉:封閉(bì)液的作用是(shì)降低(dī)非(fēi)特異(yì)性(xìng)結(jié)合,若背(bèi)景過(guò)高(gāo),可(kě)嘗(cháng)試(shì)使用更高濃(nóng)度(dù)的封閉(bì)液(yè)或延長(cháng)封閉時(shí)間。
抗體濃度:試(shì)劑稍有不(bù)同,可(kě)能(néng)需要優化抗體的(dí)量。
五(wǔ),試劑盒(hé)選擇
規格(gé):48T/盒,96T/盒(hé)。
品(pǐn)牌(pái):國產。
貨(huò)期(qī):現(xiàn)貨。
有效期:6個月。
六,實驗步(bù)驟(zhòu)
樣(yàng)本(běn)處(chǔ)理:血清需室溫血液自然凝固(gù)10-20分鐘,離心(xīn)20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分(fēn))。
加樣(yàng)與孵(fū)育(yù):標準品和(hé)樣本(běn)加樣後(hòu),加(jiā)入酶(méi)連(lián)接(jiē)物(wù)和抗(kàng)體(tǐ)溶(róng)液,室溫孵(fū)育1小時。
洗(xǐ)板與顯(xiǎn)色:倒(dǎo)出(chū)液(yè)體(tǐ)後洗板(bǎn),加(jiā)入TMB顯(xiǎn)色液,避光(guāng)反(fǎn)應(yīng)15分(fēn)鐘。
讀數:加終止液後,450nm處讀OD值(zhí)。
七(qī),結果計算
OD值(zhí)處(chǔ)理(lǐ):建議(yì)減除(chú)空白(bái)孔(kǒng)值(若(ruò)空(kōng)白孔OD低(dī)於0.1可直接(jiē)計(jì)算(suàn))。
標(biāo)準(zhǔn)曲綫(xiàn):以標準品濃(nóng)度為橫坐標,OD值為縱坐(zuò)標(biāo)繪(huì)製(zhì)曲(qū)綫,根(gēn)據(jù)樣品(pǐn)OD值(zhí)計算含(hán)量(liáng)。
八,注意事項(xiàng)
樣本(běn)處(chǔ)理(lǐ):樣本和(hé)標準品需(xū)做雙(shuāng)孔(kǒng)平行(háng)實驗。
顯色後(hòu)讀數(shù):顯(xiǎn)色後5分鐘內(nèi)讀(dú)數。
儲存:未開(kāi)封(fēng)的(dí)試劑(jì)盒所有試(shì)劑(jì)均按試(shì)劑瓶(píng)標(biāo)簽(qiān)上(shàng)所(suǒ)示(shì)保存(cún)。
一,檢(jiǎn)測原(yuán)理
試劑(jì)盒采用雙(shuāng)抗(kàng)體夾(jiā)心(xīn)法:用純化的SUMO2抗體(tǐ)包(bāo)被(bèi)微孔板(bǎn),製成(chéng)固(gù)相(xiāng)抗體;往(wǎng)包被(bèi)單抗的(dí)微(wēi)孔中依次加(jiā)入(rù)樣(yàng)本(běn)和(hé)HRP標記(jì)的SUMO2抗(kàng)體(tǐ),形成抗體-抗(kàng)原-酶標抗體復合物(wù);經(jīng)過洗(xǐ)滌後(hòu)加底物TMB顯色,TMB在HRP酶的催化(huà)下(xià)轉(zhuǎn)化(huà)成(chéng)藍色,最(zuì)終(zhōng)在酸的(dí)作(zuò)用下轉化(huà)成黃色。顏(yán)色的深(shēn)淺(qiǎn)和(hé)樣(yàng)品(pǐn)中SUMO2的(dí)含量呈正(zhèng)相關。
二,檢測範(fàn)圍與靈敏(mǐn)度
檢(jiǎn)測範圍(wéi):0.312-20ng/mL。
靈(líng)敏(mǐn)度(dù):高(gāo)靈敏度(dù),適(shì)用於多(duō)種樣本(běn)類型(xíng)。
三,樣本(běn)類型
適用(yòng)樣(yàng)本(běn):血清(qīng),血漿(jiāng),組(zǔ)織匀漿,細(xì)胞培(péi)養(yǎng)上清,尿液,體(tǐ)液,灌洗液,腦(nǎo)脊髓(suǐ),心(xīn)房水(shuǐ),胸(xiōng)房水,組織等(děng)。
四,實驗注(zhù)意事(shì)項(xiàng)
洗(xǐ)滌(dí):不(bù)充分的(dí)洗(xǐ)滌(dí)會導(dǎo)致差異(yì)和高背(bèi)景,必要時(shí)可增(zēng)加(jiā)洗滌(dí)液(yè)中的鹽濃(nóng)度或(huò)洗滌(dí)次數(shù)。
封閉:封閉(bì)液的作用是(shì)降低(dī)非(fēi)特異(yì)性(xìng)結(jié)合,若背(bèi)景過(guò)高(gāo),可(kě)嘗(cháng)試(shì)使用更高濃(nóng)度(dù)的封閉(bì)液(yè)或延長(cháng)封閉時(shí)間。
抗體濃度:試(shì)劑稍有不(bù)同,可(kě)能(néng)需要優化抗體的(dí)量。
五(wǔ),試劑盒(hé)選擇
規格(gé):48T/盒,96T/盒(hé)。
品(pǐn)牌(pái):國產。
貨(huò)期(qī):現(xiàn)貨。
有效期:6個月。
六,實驗步(bù)驟(zhòu)
樣(yàng)本(běn)處(chǔ)理:血清需室溫血液自然凝固(gù)10-20分鐘,離心(xīn)20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分(fēn))。
加樣(yàng)與孵(fū)育(yù):標準品和(hé)樣本(běn)加樣後(hòu),加(jiā)入酶(méi)連(lián)接(jiē)物(wù)和抗(kàng)體(tǐ)溶(róng)液,室溫孵(fū)育1小時。
洗(xǐ)板與顯(xiǎn)色:倒(dǎo)出(chū)液(yè)體(tǐ)後洗板(bǎn),加(jiā)入TMB顯(xiǎn)色液,避光(guāng)反(fǎn)應(yīng)15分(fēn)鐘。
讀數:加終止液後,450nm處讀OD值(zhí)。
七(qī),結果計算
OD值(zhí)處(chǔ)理(lǐ):建議(yì)減除(chú)空白(bái)孔(kǒng)值(若(ruò)空(kōng)白孔OD低(dī)於0.1可直接(jiē)計(jì)算(suàn))。
標(biāo)準(zhǔn)曲綫(xiàn):以標準品濃(nóng)度為橫坐標,OD值為縱坐(zuò)標(biāo)繪(huì)製(zhì)曲(qū)綫,根(gēn)據(jù)樣品(pǐn)OD值(zhí)計算含(hán)量(liáng)。
八,注意事項(xiàng)
樣本(běn)處(chǔ)理(lǐ):樣本和(hé)標準品需(xū)做雙(shuāng)孔(kǒng)平行(háng)實驗。
顯色後(hòu)讀數(shù):顯(xiǎn)色後5分鐘內(nèi)讀(dú)數。
儲存:未開(kāi)封(fēng)的(dí)試劑(jì)盒所有試(shì)劑(jì)均按試(shì)劑瓶(píng)標(biāo)簽(qiān)上(shàng)所(suǒ)示(shì)保存(cún)。
- 上(shàng)一(yī)條(tiáo):如何判(pàn)斷組織是否被固定(dìng)不當
- 下(xià)一(yī)條(tiáo):如(rú)何(hé)避免(miǎn)外部(bù)溫度對細胞或活(huó)體組織(zhī)的(dí)影響
