當從細胞庫購買的凍存或正處於增殖期的細胞，可對其進行擴增和重新凍存。不過，凍存操作可能會對細胞的生長狀態有所影響。下列實驗方案為大家提供了一份使用無蛋白成份的凍存培養基凍存細胞的基礎指南。

● 使用37°C水浴化凍無蛋白成份的凍存培養基或4°C條件下過夜化凍。

● 如果在水浴中進行化凍，請確保溫度不要超過37°C，也勿將該產品延長時間置於37°C。

● 無蛋白成份的凍存培養基在使用前應置於4°C條件下徹底平衡。為獲得最優結果，推薦大家使用能夠控製變溫速率的冰箱。如果缺少能夠控製變溫速率的冰箱，也可使用細胞凍存盒。

● 如需用酶試劑解離培養器皿表麵的細胞，則需使用對應的終止溶液重懸細胞以中和酶的效果。

● 通過離心沉澱細胞。

● 去除上清液後，使用預冷的無蛋白成份的凍存培養基以5x10E5至3x10E6細胞/毫升的密度重懸細胞。

● 將細胞懸液分裝至合適數量的凍存管中。

● 將細胞盡快冷卻至4°C。

● 如果使用控製變溫速率的冰箱:以每分鐘降低1°C的速率冰凍樣品，直至–40°C。之後按照每分鐘降低2°C的速率降至–90°C左右。

● 如果使用細胞凍存盒:請按照說明書來準備凍存盒。

● 為獲得最佳結果，推薦大家在細胞溫度降至–80°C後，盡快將凍存管轉移至液氮儲存設備的氣相中。

● 作為無蛋白成份的凍存培養基的替代品，可使用該凍存細胞推薦的基礎培養基，添加10%胎牛血清(FBS)和10% DMSO進行細胞凍存。

請注意:由於凍存設備與個人技術之間的差異，我們無法確保使用本方案凍存的細胞在復蘇後能夠保持活力，我們也無法為研究用戶實驗室凍存細胞的效果進行擔保。