細胞凋(diāo)亡(wáng)陽性(xìng)對照試(shì)劑(jì)盒(hé)細胞(bāo)內總LDH的(dí)檢測(cè)

a.細(xì)胞(bāo)毒性檢測：根據(jù)細胞(bāo)的(dí)大小和(hé)生長速度將(jiāng)適量(liáng)細胞(bāo)接(jiē)種(zhǒng)到(dào)96孔(kǒng)細(xì)胞培養(yǎng)孔(kǒng)板中，使待檢(jiǎn)測(cè)時(shí)細胞密(mì)度不超過80-90%滿
。加(jiā)入(rù)不同藥(yào)物進(jìn)行(háng)處理(lǐ)，並設置適(shì)當對照(zhào)
。藥物刺激完(wán)畢後，將(jiāng)細(xì)胞培養板(bǎn)用(yòng)多(duō)孔(kǒng)板離心機400g離(lí)心5min
。盡量吸除(chú)上清，加入150μl 用PBS稀釋(shì)了(liǎo)10倍的試(shì)劑盒(hé)提(tí)供(gōng)的LDH釋(shì)放試劑(10體積(jī)PBS中加入1體積LDH釋放試(shì)劑(jì)並混匀)，適當搖晃(huǎng)培養板(bǎn)混(hùn)匀，然後(hòu)繼(jì)續在細胞(bāo)培養箱中孵育1小時
。隨後將細(xì)胞(bāo)培養(yǎng)板(bǎn)用多孔板(bǎn)離(lí)心機(jī)400g離心5min
。分(fēn)別(bié)取(qǔ)各(gè)孔(kǒng)的(dí)上清(qīng)液120μl，加(jiā)入到(dào)一新(xīn)的96孔板相應孔中，隨即進(jìn)行樣(yàng)品測(cè)定
。

b.細胞(bāo)增殖檢(jiǎn)測：根據(jù)細胞(bāo)的(dí)大小(xiǎo)和(hé)生(shēng)長速度將(jiāng)適量(liáng)細(xì)胞(bāo)接(jiē)種(zhǒng)到96孔細(xì)胞(bāo)培養孔(kǒng)板(bǎn)中(zhōng)，使促(cù)進(jìn)細胞增殖的藥物(wù)刺激(jī)後細胞(bāo)不超(chāo)過80-90%滿(mǎn)為宜(yí)
。使用(yòng)不(bù)同的藥(yào)物(wù)刺激(jī)細胞，並(bìng)設置(zhì)適(shì)當對照
。藥(yào)物刺激(jī)完畢後，將(jiāng)細胞(bāo)培(péi)養(yǎng)板用多(duō)孔(kǒng)板(bǎn)離心機400g離心(xīn)5min
。盡(jìn)量吸(xī)除上(shàng)清(qīng)，加入150μl 用PBS稀(xī)釋(shì)了10倍的試(shì)劑(jì)盒(hé)提供的LDH釋(shì)放試(shì)劑(jì)(10體(tǐ)積(jī)PBS中(zhōng)加入(rù)1體積LDH釋(shì)放(fàng)試劑並混匀(yún))，適當搖(yáo)晃混(hùn)匀，然後繼續在細(xì)胞(bāo)培養箱中孵育(yù)1小(xiǎo)時(shí)
。隨後將細胞培養(yǎng)板用(yòng)多孔(kǒng)板(bǎn)離心(xīn)機(jī)400g離心5min
。分別取各孔(kǒng)上清(qīng)液(yè)120μl，加入到一新的(dí)96孔板(bǎn)相應孔(kǒng)中(zhōng)，隨(suí)即進行(háng)樣(yàng)品(pǐn)測定(dìng)
。

  注(zhù)：LDH釋(shì)放(fàng)檢(jiǎn)測更(gēng)加常(cháng)用(yòng)一(yī)些，細胞內總(zǒng)LDH檢測(cè)通(tōng)常可以(yǐ)使用MTT
，WST-1或(huò)CCK-8等方法替代
。

二(èr)
，試(shì)劑盒(hé)的準備(bèi)工(gōng)作：

a.INT溶液(yè)(1X)的配(pèi)製：根據(jù)所(suǒ)需的INT溶液(1X)的(dí)量(liáng)，取適量(liáng)INT溶液(yè)(10X)用(yòng)INT稀釋(shì)液(yè)稀釋至(zhì)1X
。例如(rú)，取(qǔ)20μl INT溶液(yè)(10X)，加(jiā)入(rù)180μl INT稀釋(shì)液，混匀後(hòu)即(jí)配(pèi)置為(wéi)200μl INT溶(róng)液(1X)
。INT溶液(yè)(1X)宜現(xiàn)配(pèi)現(xiàn)用，配置後(hòu)4℃保存可(kě)於(yú)當天(tiān)使(shǐ)用(yòng)，不宜配置後凍(dòng)存
。

b.LDH檢測工作(zuò)液的(dí)配置(zhì):根據待測(cè)定的樣品(pǐn)數(shù)(含對(duì)照(zhào))，參(cān)考(kǎo)下(xià)表在(zài)臨(lín)檢(jiǎn)測前新鮮(xiān)配(pèi)製適量的檢測工作(zuò)液(yè)
。

  注(zhù)意：LDH檢測工(gōng)作(zuò)液必(bì)須現(xiàn)配現(xiàn)用，配(pèi)製(zhì)和使用(yòng)過程中均要注意適(shì)當(dāng)避(bì)光
。