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技術文(wén)獻

短波單胞菌說(shuō)明(míng)書

文字(zì):[大][中][小(xiǎo)] 2021-7-9    瀏覽次(cì)數:935    

短波單(dān)胞菌(jūn)菌種(zhǒng)的(dí)培養(yǎng):

,菌(jūn)種(zhǒng)是指食用菌菌絲(sī)體及其生長基質(zhì)組(zǔ)成的繁殖(zhí)材(cái)料(liào)。菌種分為母種(一級(jí)種),原(yuán)種(二(èr)級種(zhǒng))和栽培種(三(sān)級種(zhǒng))三級(jí)。工(gōng)業發酵的(dí)有(yǒu)用(yòng)菌(jūn)種(zhǒng),其篩(shāi)選步驟包括菌(jūn)種(zhǒng)分離(lí),初(chū)篩和復(fù)篩(shāi)。

2,挑選具有(yǒu)某種能(néng)力的有(yǒu)用(yòng)菌種(zhǒng),也稱種子製備(bèi),是(shì)指菌(jūn)種在一定條件(jiàn)下(xià),經(jīng)過(guò)擴(kuò)大(dà)培(péi)養(yǎng)成(chéng)為具有一(yī)定數量和質量的純生(shēng)產菌(jūn)種的製備(bèi)過(guò)程。以作(zuò)接(jiē)入發酵罐(guàn)中(zhōng)進一(yī)步(bù)擴大(dà)菌體量(liáng)及(jí)合成產物之(zhī)用(yòng)。

3,種子製(zhì)備包括(kuò)孢子(zǐ)製備和菌絲(sī)體製(zhì)備(見圖(tú)) 菌種製備(bèi) ,其中()~(4)為孢(bāo)子(zǐ)製(zhì)備(bèi)過程(chéng)。

4,保(bǎo)存在(zài)沙(shā)土(tǔ)管或(huò)冷凍管(guǎn)中(zhōng)的生(shēng)產(chǎn)菌種,用無菌手續挑取少許,接(jiē)入(rù)瓊脂(zhī)斜(xié)麵培(péi)養(yǎng)基(jī)上(shàng),在25℃(或較(jiào)高溫(wēn)度)下培養5~7天(tiān)(或較長(cháng)時間。所得孢子還需(xū)進一步(bù)用較大表麵(miàn)積(jī)的(dí)固體培養(yǎng)基(jī)以獲得更多孢(bāo)子(對於(yú)黴(méi)菌(jūn)類孢子製(zhì)備,多數采用(yòng)大米(mǐ),小米(mǐ)之(zhī)類(lèi)的天(tiān)然培(péi)養基)。

5,將培(péi)養成熟的斜麵(miàn)孢子製(zhì)成懸浮液,接種到扁(biǎn)瓶固體(tǐ)培養基上,於25~28℃培養4天。將成熟的(dí)扁瓶孢子於真(zhēn)空中(zhōng)抽(chōu)幹,使水分降至(zhì)0%以(yǐ)下(xià),並放(fàng)入 4℃冰箱(xiāng)中備(bèi)用。一次製得的孢子瓶可(kě)在(zài)生產上(shàng)延續(xù)使(shǐ)用半(bàn)年左右。

放綫菌孢(bāo)子的培養基大多是(shì)采用麩皮(pí)或豌(wān)豆浸(jìn)出液及(jí)無(wú)機鹽與(yǔ)瓊(qióng)脂製成的。將斜麵(miàn)孢子接入擴(kuò)大(dà)的扁瓶孢(bāo)子(zǐ)培養(yǎng)基(jī)中,於(yú)28~37℃培(péi)養(yǎng)5~4天。所(suǒ)獲得的大(dà)量孢子(zǐ)可(kě)直接作為種子罐(6)的(dí)種(zhǒng)子。

6,如果有些(xiē)生產菌(jūn)種(zhǒng)不(bù)產孢(bāo)子(zǐ),如赤黴素產生菌或(huò)產孢(bāo)子(zǐ)不多的,則(zé)可(kě)采(cǎi)用(yòng)搖瓶(5)液體(tǐ)培養製得(dé)菌絲體,作種子(zǐ)罐(guàn)的種(zhǒng)子(zǐ)。種子罐的(dí)目(mù)的是使(shǐ)接(jiē)入有限的孢子或(huò)菌(jūn)絲(sī)體(tǐ)迅速(sù)發(fā)芽,生長(cháng),繁殖(zhí)成(chéng)大量菌體(tǐ)。其中的培(péi)養基組(zǔ)分(fēn)應是易於被菌(jūn)體(tǐ)利用的碳(tàn)源(如葡萄(táo)糖(táng))和(hé)氮源(yuán)(如玉(yù)米漿(jiāng)),及無機鹽(yán)(如(rú)磷酸鹽(yán))等。作(zuò)為(wéi)發酵(jiào)罐(7)的種子應(yīng)生命力(lì)旺(wàng)盛,染色深,菌(jūn)絲粗壯(zhuàng),無(wú)雜菌及(jí)異常(cháng)菌體(tǐ)。接種量(liáng)一(yī)般在0%~20%。

    

低溫存法:

①簡單保存法(fǎ),將瓊脂(zhī)斜麵(miàn)孢子培(péi)養(yǎng)物(wù),菌(jūn)絲懸(xuán)浮(fú)液(yè)以(yǐ)及(jí)由麩皮,大(dà)米(mǐ),小米等穀物原料(liào)製成(chéng)的孢子(zǐ)培養物置於4℃冰箱保存,保(bǎo)存(cún)時(shí)間不超(chāo)過~2個月(yuè),若將穀物(wù)原(yuán)料製(zhì)備(bèi)的(dí)孢子(zǐ)瓶抽(chōu)真(zhēn)空(kōng)並在(zài)棉塞上(shàng)浸蠟,以(yǐ)隔絕(jué)外界空氣和水汽,保(bǎo)持(chí)時間可達(dá)3~4個月;②液(yè)氮超低(dī)溫(wēn)保存(cún)法,將(jiāng)生(shēng)長穩定(dìng)期的細胞(bāo)懸浮在0%甘(gān)油(yóu)或其(qí)他(tā)低(dī)冰點(diǎn)液(yè)體(tǐ)中,密封(fēng)於安(ān)瓿管內(nèi),然後控(kòng)製冷卻速度(dù),使(shǐ)安瓿管溫(wēn)度逐步(bù)下(xià)降至 -35℃時,即可置(zhì)於-50~-96℃的液氮(dàn)罐(guàn)中保(bǎo)存。大多數(shù)微(wēi)生(shēng)物(wù)如病(bìng)毒,噬(shì)菌(jūn)體,多(duō)種細(xì)菌,放綫菌,酵母和(hé)原(yuán)蟲(chóng),特別是一(yī)些用(yòng)冷凍(dòng)幹(gān)燥(zào)法(fǎ)有困難的微生物,都可(kě)用(yòng)此(cǐ)法(fǎ)長期(qī)保存。

我司專業代(dài)理ATCC菌(jūn)種,質量保證(zhèng),為(wéi)大中(zhōng)型科研提(tí)供嚴(yán)格(gé)質量體(tǐ)係控製的ATCC,CMCC,CICC,DSMZ標準菌(jūn)株。

短(duǎn)波單胞菌 培養(yǎng)溫(wēn)度(dù):  35-37℃ 英文名(míng)稱(chēng):Short wave single cell 培養保(bǎo)藏法(fǎ):培養(yǎng)後於(yú)4—6℃冰箱(xiāng)內保存。

脫水存法(fǎ):

①沙土(tǔ)保(bǎo)存法,能(néng)產(chǎn)孢子的細(xì)菌(jūn),放綫菌及黴(méi)菌可采用此法(fǎ)保存,即(jí)將沙和土以3:2比例混合,經(jīng)稀酸處(chǔ)理洗淨過(guò)篩,裝(zhuāng)入小(xiǎo)試管(guǎn)內,裝(zhuāng)置(zhì)高度(dù)為(wéi)cm;滅菌2~3次,烘幹後即可(kě)將在斜麵培養(yǎng)基(jī)上(shàng)生(shēng)長良(liáng)好(hǎo)的(dí)孢子(zǐ),用無(wú)菌蒸餾水(shuǐ)2~2.5ml製成孢(bāo)子(zǐ)懸(xuán)液(yè),吸(xī)取少(shǎo)許加入(rù)沙土管(guǎn)中,經(jīng)真空(kōng)抽幹,外(wài)觀(guān)呈鬆散狀態(tài),於4℃冰箱保(bǎo)存,保存期(qī)可達(dá)5~7年(nián)。

② 冷(lěng)凍(dòng)幹燥(zào)法(fǎ),將孢子(zǐ)懸(xuán)浮液與保(bǎo)護劑(一(yī)般(bān)用脫脂牛(niú)奶(nǎi)或血清)相(xiāng)混合(hé),放(fàng)在安瓿(bù)管內於(yú)-20~-30℃的乙(yǐ)醇浴中速(sù)凍。然後(hòu),在(zài)低溫(wēn)下用(yòng)真空(kōng)泵(bèng)抽幹,並(bìng)用五(wǔ)氧化(huà)二磷(lín)或幹(gān)冰使水汽(qì)結凍(dòng),熔(róng)封(fēng)安瓿(bù)管,於低溫下保(bǎo)存。保存(cún)期可達(dá)5~0年之(zhī)久。

③ 石蠟油封存法(fǎ),在斜麵(miàn)菌種培(péi)養物(wù)上(shàng),倒上滅菌後的石(shí)蠟油,高出斜麵cm,於(yú)4℃冰(bīng)箱(xiāng)或(huò)低(dī)溫幹(gān)燥(zào)處(chǔ)保(bǎo)存(cún),此(cǐ)法(fǎ)不(bù)適(shì)用於(yú)能利(lì)用石蠟油作(zuò)碳(tàn)源的微(wēi)生物(wù),保(bǎo)存(cún)期為(wéi)一(yī)年以上(shàng)。


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