產品(pǐn)描(miáo)述(shù)：

自備(bèi)物品：

15毫升錐(zhuī)形離(lí)心(xīn)管(guǎn)：用於(yú)製(zhì)備樣品(pǐn)的容器(qì)

比色皿(mǐn)：用(yòng)於比色的容器

96孔酶標(biāo)板：用(yòng)於比(bǐ)色的容器(qì)

分光(guāng)光度儀：用於比色分(fēn)析

酶標儀：用於(yú)微(wēi)量(liáng)樣(yàng)品(pǐn)比色分(fēn)析(xī)

儲(chǔ)存條件(jiàn)：

14℃或－20℃

準(zhǔn)備(bèi)物(wù)品(pǐn)

清理(lǐ)液(yè)（A）                                   毫(háo)升(shēng)

染(rǎn)色液（t B）                                   微(wēi)升(shēng)

稀(xī)釋(shì)液（C）                                   毫升(shēng)

溶(róng)解液(yè)（tD）                                   毫(háo)升(shēng)

產品說明(míng)書                                   1份(fèn)

特(tè)點：

1. 一管式操作(zuò)，用戶隻需(xū)要提供(gōng)樣品即可。

2. 根(gēn)據(jù)大(dà)豆(dòu)熱休(xiū)克蛋白基因(yīn)保(bǎo)守(shǒu)區域(yù)設計(jì)引(yǐn)物，能專一性檢(jiǎn)測(cè)出樣(yàng)品(pǐn)中的大豆(dòu)成(chéng)分(fēn)，但(dàn)不(bù)能檢(jiǎn)測其(qí)他非(fēi)大豆(dòu)成分(fēn)。

3. 快(kuài)速，整(zhěng)個(gè)檢測過(guò)程（按一個(gè)樣(yàng)品計）所(suǒ)需時間(jiān)僅(jǐn)為 2.0 小時(shí)。

4. 隻需要普通(tōng) PCR 儀(yí)和凝膠電泳(yǒng)儀，無(wú)需配置貴(guì)重儀器(qì)設備(bèi)。

5. 對混合樣(yàng)品(pǐn)中(zhōng)大豆(dòu)成分的檢測(cè)下(xià)限為(wéi) 0.1%，對樣品中大豆成(chéng)分的核酸檢測下限為(wéi) 1.0ng/μL。

6. 本隻能用於(yú)科(kē)研，足夠(gòu) 50 次 40uL 體係的常規 PCR。

1）RT-PCR可以(yǐ)檢(jiǎn)測組(zǔ)織，細(xì)胞(bāo)，血液，細菌等很多材(cái)料，不(bù)同的(dí)樣本有不同要求(qiú)，實驗前請充分溝通確(què)認(rèn)實(shí)驗(yàn)方(fāng)案(àn)和(hé)樣(yàng)本情況；

2）客戶盡可能(néng)提(tí)供實驗(yàn)的(dí)背景信(xìn)息(xī)，物種(zhǒng)，基(jī)因(yīn)準(zhǔn)確(què)的名稱(chēng)和ID號；

3）客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣(yàng)品(pǐn)。

4）樣本(běn)保存於(yú)液氮或幹冰(bīng)，也可(kě)以保存於Trizol液中。

實時(shí)熒(yíng)光(guāng)定量(liáng)PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是(shì)指在(zài)PCR反應體(tǐ)係中加(jiā)入熒(yíng)光(guāng)基團(tuán)，利用熒光(guāng)信號積累(léi)實時(shí)監測整個PCR進程(chéng)，通過標準曲(qū)綫(xiàn)對未知模(mó)板進行定量分(fēn)析的方法。實時熒光定(dìng)量PCR的化(huà)學(xué)原(yuán)理包(bāo)括探(tàn)針(zhēn)類和非(fēi)探(tàn)針(zhēn)類(lèi)兩類，探針類(lèi)是利(lì)用與靶(bǎ)細胞序列特(tè)異性雜(zá)交(jiāo)的探針(zhēn)來指(zhǐ)示擴(kuò)增(zēng)產(chǎn)物(wù)的增加(jiā)，非(fēi)探(tàn)針類(lèi)是利用熒(yíng)光染料或(huò)者(zhě)特異(yì)性設計的引物來指(zhǐ)示擴(kuò)增的增加。運用(yòng)該技(jì)術(shù)可(kě)以對DNA，RNA樣品(pǐn)進行(háng)定(dìng)量(liáng)（包(bāo)括*定量(liáng)和相(xiāng)對(duì)定量）和定性(xìng)分析。

主(zhǔ)要服務：DNA或RNA的*定(dìng)量分(fēn)析，基因(yīn)表(biǎo)達(dá)差異分析(xī)，基因分(fēn)型。

實驗方法步(bù)驟：
鮑(bào)皰(pào)疹樣(yàng)病(bìng)毒探針法熒(yíng)光(guāng)定(dìng)量(liáng)PCR試劑盒方法(fǎ)
1：在冰浴(yù)中，按以下次序(xù)將(jiāng)各成分(fēn)加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物(wù)2（10pM）                 
2 μl     Taq酶(méi) （2U/μl）               
1 μl     DNA模板(bǎn)（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至(zhì) 50 μl  
視(shì)PCR儀(yí)有(yǒu)無(wú)熱蓋，不(bù)加或(huò)添加石蠟油。
2：調(tiáo)整好反應(yīng)程(chéng)序。將上述混(hùn)合(hé)液稍加(jiā)離心，立(lì)即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增(zēng)。一般：在93℃預變(biàn)性(xìng)3-5min，進入(rù)循環擴增階段(duàn)：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫(wēn)7min。
3：結(jié)束(shù)反(fǎn)應(yīng)，PCR產物(wù)放置於4℃待(dài)電泳(yǒng)檢(jiǎn)測(cè)或-20℃長期(qī)保(bǎo)存。
4：PCR的電泳檢測：如在(zài)反應管中加(jiā)有(yǒu)石(shí)蠟(là)油，需用100μl氯(lǜ)仿進行(háng)抽提(tí)反(fǎn)應混合(hé)液，以(yǐ)除(chú)去(qù)石(shí)蠟油；否則，直接取(qǔ)5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗步驟
典型(xíng)的PCR由(yóu)（1）高溫變性模板(bǎn)；（2）引(yǐn)物與模(mó)板退(tuì)火(huǒ)；（3）引物沿模板(bǎn)延伸三步(bù)反(fǎn)應組成一(yī)個循環，通過多次循環反(fǎn)應(yīng)，使目的DNA得以(yǐ)迅速擴增(zēng)。其主(zhǔ)要步(bù)驟是(shì)：
將待擴(kuò)增的(dí)模板DNA置高(gāo)溫下(xià)（通(tōng)常為93℃-94℃）使其變(biàn)性解成單(dān)鏈；
人工(gōng)合成(chéng)的兩個(gè)寡(guǎ)核苷酸(suān)引(yǐn)物在(zài)其合適的復(fù)性(xìng)溫(wēn)度(dù)下分(fēn)別與(yǔ)目的(dí)基因(yīn)兩側的(dí)兩條(tiáo)單(dān)鏈互(hù)補結合(hé)，兩個(gè)引(yǐn)物(wù)在模板上(shàng)結合的位置決定(dìng)了擴(kuò)增片段的長短；
耐熱的DNA聚(jù)合酶（Taq酶）在(zài)72℃將單核苷酸從引(yǐn)物的3’端(duān)開(kāi)始摻入(rù)，以目(mù)的基因(yīn)為(wéi)模板(bǎn)從5’→3’方(fāng)向(xiàng)延(yán)伸，合成(chéng)DNA的新互補鏈(liàn)。