產品描(miáo)述：

自備物品：

15毫升(shēng)錐(zhuī)形(xíng)離心(xīn)管：用於(yú)製(zhì)備(bèi)樣(yàng)品的(dí)容器

比(bǐ)色(sè)皿(mǐn)：用(yòng)於比色的容(róng)器

96孔(kǒng)酶(méi)標板：用於(yú)比(bǐ)色的容器

分光光度儀(yí)：用(yòng)於(yú)比色分析(xī)

酶(méi)標儀：用於微量樣品比(bǐ)色分析(xī)

儲(chǔ)存條(tiáo)件(jiàn)：

14℃或(huò)－20℃

準備(bèi)物品

清理液（A）                                   毫升(shēng)

染(rǎn)色液（t B）                                   微升

稀(xī)釋液（C）                                   毫升

溶(róng)解液(yè)（tD）                                   毫(háo)升(shēng)

產(chǎn)品說(shuō)明書                                   1份

特(tè)點(diǎn)：

1. 一管式操作，用(yòng)戶(hù)隻(zhī)需要提供樣(yàng)品即可。

2. 根據大豆(dòu)熱(rè)休(xiū)克(kè)蛋白基因保(bǎo)守區域(yù)設(shè)計引物(wù)，能專(zhuān)一(yī)性(xìng)檢(jiǎn)測出(chū)樣(yàng)品中(zhōng)的(dí)大豆(dòu)成分，但(dàn)不(bù)能(néng)檢測其(qí)他非大豆成分。

3. 快速，整(zhěng)個(gè)檢測過程(chéng)（按(àn)一個(gè)樣品(pǐn)計）所需時間(jiān)僅為 2.0 小時。

4. 隻(zhī)需(xū)要(yào)普通 PCR 儀和凝(níng)膠電(diàn)泳儀，無需配置貴(guì)重儀(yí)器(qì)設(shè)備。

5. 對混合樣品(pǐn)中(zhōng)大豆成分的(dí)檢測下限為 0.1%，對樣(yàng)品中(zhōng)大豆成(chéng)分(fēn)的(dí)核酸檢測(cè)下限為 1.0ng/μL。

6. 本隻(zhī)能用於(yú)科研，足(zú)夠 50 次 40uL 體(tǐ)係(xì)的(dí)常規 PCR。

1）RT-PCR可以檢測組(zǔ)織(zhī)，細胞(bāo)，血液(yè)，細菌等(děng)很多(duō)材料，不(bù)同的樣本有不(bù)同(tóng)要求(qiú)，實(shí)驗前請充(chōng)分溝通(tōng)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況(kuàng)；

2）客(kè)戶盡可能(néng)提供(gōng)實驗(yàn)的背(bèi)景(jǐng)信息，物(wù)種，基(jī)因準確(què)的(dí)名(míng)稱(chēng)和ID號(hào)；

3）客戶(hù)盡量不(bù)要(yào)提供DNA或RNA樣(yàng)品(pǐn)。

4）樣本(běn)保存(cún)於(yú)液(yè)氮或幹冰，也(yě)可以保存於Trizol液(yè)中。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指(zhǐ)在PCR反(fǎn)應體係中加(jiā)入熒(yíng)光(guāng)基(jī)團(tuán)，利用熒光(guāng)信(xìn)號(hào)積(jī)累(léi)實(shí)時監(jiān)測整(zhěng)個PCR進程，通過標準曲綫對未知模板進行定量(liáng)分析的(dí)方(fāng)法。實(shí)時熒光定(dìng)量PCR的(dí)化(huà)學原理包括探(tàn)針類和非(fēi)探針類兩(liǎng)類(lèi)，探針類(lèi)是利(lì)用(yòng)與(yǔ)靶細胞序列特異(yì)性(xìng)雜交(jiāo)的探針(zhēn)來指(zhǐ)示擴增產物(wù)的增加，非(fēi)探針(zhēn)類(lèi)是(shì)利(lì)用熒光染料(liào)或(huò)者特(tè)異性(xìng)設計的引(yǐn)物(wù)來指示擴(kuò)增的(dí)增加。運用(yòng)該(gāi)技(jì)術可(kě)以(yǐ)對DNA，RNA樣(yàng)品進行定(dìng)量(liáng)（包括(kuò)*定量和相(xiāng)對定(dìng)量(liáng)）和定性(xìng)分(fēn)析(xī)。

主(zhǔ)要服(fú)務：DNA或RNA的*定量分析(xī)，基因表(biǎo)達(dá)差異(yì)分(fēn)析，基因(yīn)分型。

實驗方(fāng)法(fǎ)步(bù)驟(zhòu)：
鮑(bào)肌肉萎縮(suō)症病(bìng)毒探針(zhēn)法(fǎ)熒(yíng)光定量(liáng)PCR試劑盒方法
1：在(zài)冰(bīng)浴中，按以下次序將(jiāng)各成(chéng)分(fēn)加入一無菌(jūn)0.5ml離心(xīn)管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物(wù)1（10pM）                 
2 μl     引物(wù)2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板(bǎn)（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加(jiā)ddH2O至 50 μl  
視(shì)PCR儀(yí)有無(wú)熱蓋，不(bù)加(jiā)或添(tiān)加石(shí)蠟油。
2：調整(zhěng)好反應程序(xù)。將上述混(hùn)合液稍加離心(xīn)，立即(jí)置PCR儀上(shàng)，執行(háng)擴增。一般：在(zài)93℃預變(biàn)性3-5min，進入循(xún)環擴增階(jiē)段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次(cì)，在(zài)72℃ 保溫7min。
3：結束反應(yīng)，PCR產物(wù)放置(zhì)於(yú)4℃待(dài)電(diàn)泳(yǒng)檢測或-20℃長期保(bǎo)存(cún)。
4：PCR的電泳檢(jiǎn)測(cè)：如(rú)在(zài)反(fǎn)應(yīng)管中加(jiā)有石蠟油，需(xū)用(yòng)100μl氯(lǜ)仿(fǎng)進行抽提(tí)反應(yīng)混合(hé)液(yè)，以(yǐ)除去(qù)石蠟(là)油(yóu)；否(fǒu)則(zé)，直接(jiē)取(qǔ)5-10μl電泳(yǒng)檢測(cè)。
PCR實驗步驟(zhòu)
典(diǎn)型的PCR由（1）高(gāo)溫(wēn)變性(xìng)模板；（2）引(yǐn)物(wù)與模(mó)板退火；（3）引物(wù)沿(yán)模(mó)板(bǎn)延(yán)伸(shēn)三步反應組(zǔ)成一個循(xún)環，通(tōng)過(guò)多(duō)次(cì)循環(huán)反(fǎn)應，使(shǐ)目(mù)的(dí)DNA得(dé)以迅速擴(kuò)增(zēng)。其主要步驟是：
將待(dài)擴(kuò)增的模(mó)板DNA置高溫(wēn)下(xià)（通常(cháng)為(wéi)93℃-94℃）使(shǐ)其變性(xìng)解成單鏈(liàn)；
人工合成的兩個寡(guǎ)核苷(gān)酸(suān)引物(wù)在其合(hé)適的(dí)復性(xìng)溫(wēn)度下(xià)分(fēn)別與(yǔ)目(mù)的基因兩(liǎng)側(cè)的(dí)兩條(tiáo)單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引(yǐn)物在模板上結(jié)合的位置決定了(liǎo)擴增片段(duàn)的(dí)長短(duǎn)；
耐(nài)熱的DNA聚合酶（Taq酶(méi)）在72℃將單(dān)核(hé)苷酸從引物的(dí)3’端開始摻入，以目的基(jī)因為(wéi)模板從(cóng)5’→3’方(fāng)向延伸(shēn)，合成DNA的新互補鏈。