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定量PCR試(shì)劑盒
豬流(liú)行性(xìng)腹瀉病毒(dú)定量RT-PCR檢(jiǎn)測試(shì)劑(jì)盒
商(shāng)品(pǐn)屬性
| 產(chǎn)品名稱 | 規格 | 貨號 |
|
豬流行性腹瀉(xiè)病毒(dú)定(dìng)量(liáng)RT-PCR檢測(cè)試劑盒 |
50T |
YS-P015346 |
儲存條(tiáo)件：-20℃避(bì)光保存(cún)，避(bì)免(miǎn)反(fǎn)復凍融。
運輸：低溫，避光。
有效(xiào)期：一(yī)年
貨期(qī)：現(xiàn)貨PCR試(shì)劑(jì)盒的(dí)有(yǒu)效期一般為1年(nián)，這(zhè)是指在適當(dāng)的儲存溫度下(xià)。核(hé)酸擴(kuò)增(zēng)部分的試劑一(yī)般(bān)要貯(zhù)存於(yú)-20℃下(xià)，產(chǎn)物(wù)檢測(cè)部分(fēn)試(shì)劑則貯存於(yú)2-8℃。盡(jìn)量(liáng)避免(miǎn)反(fǎn)復凍(dòng)融。
【結果分析(xī)條件設定】
u 閾值(Threshold)設定：將(jiāng)閾(yù)值綫(xiàn)設定(dìng)在剛(gāng)好超過(guò)正常(cháng)陰性(xìng)質控品(pǐn)擴(kuò)增(zēng)曲(qū)綫(xiàn)的(dí)最(zuì)高點。
【質控標準】
2. 陽(yáng)性質(zhì)控品(pǐn)的檢(jiǎn)測(cè)結(jié)果(guǒ)應為陽性(xìng)，有明(míng)顯的(dí)指(zhǐ)數擴增期，Ct值應(yīng)小於(yú)等於35；
3. 以上要求需在(zài)一次(cì)實驗中同(tóng)時滿足，否則(zé)該(gāi)次實驗(yàn)視為(wéi)無(wú)效。
【結果判斷】
2.可疑：有(yǒu)明(míng)顯的指數擴(kuò)增期(qī)，且(qiě)38≤Ct<40，此時(shí)樣本(běn)為可疑樣本(běn)；對於可疑樣本(běn)建議(yì)復(fù)核一(yī)次，若復核結果(guǒ)Ct<40且有指(zhǐ)數(shù)擴增期，則(zé)判(pàn)定為(wéi)陽(yáng)性(xìng)，否(fǒu)則判定(dìng)為(wéi)陰(yīn)性；
3. 陰性(xìng)：無指(zhǐ)數擴增期，Ct=40或無Ct值均(jūn)判(pàn)定為陰性(xìng)樣(yàng)本(běn)。
【對檢驗(yàn)結果的解釋(shì)】
1. 實(shí)驗室(shì)環境(jìng)汙染(rǎn)，試劑汙染(rǎn)，樣(yàng)品(pǐn)交(jiāo)叉(chā)汙染(rǎn)會出(chū)現假(jiǎ)陽性(xìng)結果(guǒ)；
2. 試劑運(yùn)輸(shū)，保存不(bù)當或試劑配製不(bù)準確引(yǐn)起的試劑(jì)檢測效(xiào)能下降，可能(néng)會(huì)導致出(chū)現假陰性(xìng)結果(guǒ)。
PCR反應(yīng)的特異性(xìng)：
②鹼(jiǎn)基配對(duì)原(yuán)則(zé)；
③Taq DNA聚合酶(méi)合(hé)成(chéng)反(fǎn)應(yīng)的(dí)忠(zhōng)實(shí)性；
④靶基因(yīn)的(dí)特(tè)異(yì)性與保(bǎo)守性(xìng)。
豬流行(háng)性腹(fù)瀉(xiè)病毒定(dìng)量RT-PCR檢測試劑盒其(qí)中(zhōng)引物(wù)與模(mó)板(bǎn)的正確結(jié)合是關鍵。引物與模(mó)板(bǎn)的結合及引物(wù)鏈的(dí)延(yán)伸(shēn)是遵循鹼(jiǎn)基(jī)配(pèi)對原則的。聚合酶(méi)合成反(fǎn)應(yīng)的(dí)忠(zhōng)實(shí)性(xìng)及Taq DNA聚(jù)合(hé)酶耐(nài)高溫(wēn)性(xìng)，使反(fǎn)應(yīng)中模板與引物(wù)的(dí)結合(hé)(復性)可以(yǐ)在較(jiào)高的(dí)溫度下(xià)進(jìn)行，結合的特(tè)異(yì)性大(dà)大增加(jiā)，被(bèi)擴(kuò)增的(dí)靶(bǎ)基因(yīn)片段也就(jiù)能(néng)保持很高(gāo)的(dí)正確度。再(zài)通(tōng)過選(xuǎn)擇特(tè)異(yì)性(xìng)和(hé)保守性高的靶(bǎ)基(jī)因區(qū)，其特異性程(chéng)度(dù)就更高。
(2) 靈(líng)敏(mǐn)度(dù)高
PCR產物(wù)的(dí)生成量是以指數(shù)方式增(zēng)加(jiā)的(dí)，能將皮(pí)克(kè)(pg=10-12g)量級的起(qǐ)始待(dài)測模(mó)板(bǎn)擴(kuò)增(zēng)到微(wēi)克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一(yī)個靶細(xì)胞；在病毒的(dí)檢(jiǎn)測(cè)中，PCR的靈敏(mǐn)度可(kě)達3個(gè)RFU(空(kōng)斑形(xíng)成單位)；在細(xì)菌學中zui小檢(jiǎn)出(chū)率(shuài)為3個細(xì)菌。
(3) 簡便，快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一(yī)次性地將反應液(yè)加(jiā)好後，即在(zài)DNA擴增(zēng)液(yè)和(hé)水浴(yù)鍋上進行變性(xìng)-退火-延伸(shēn)反應，一般在(zài)2～4 小時完成擴(kuò)增(zēng)反(fǎn)應(yīng)。擴增(zēng)產(chǎn)物一(yī)般(bān)用電泳分(fēn)析(xī)，不(bù)一定(dìng)要(yào)用(yòng)同(tóng)位(wèi)素(sù)，無(wú)放射(shè)性汙染，易(yì)推廣(guǎng)。
(4) 對標本(běn)的(dí)純度要(yào)求低(dī)
不需(xū)要分離病(bìng)毒或細菌(jūn)及(jí)培(péi)養細胞(bāo)，DNA 粗製品(pǐn)及總RNA均(jūn)可作(zuò)為擴增(zēng)模板(bǎn)。可直(zhí)接用臨床標(biāo)本如血液，體(tǐ)腔液(yè)，洗(xǐ)嗽液(yè)，毛發(fā)，細胞，活(huó)PCR技(jì)術(shù)概論(lùn)。
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