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產(chǎn)品中(zhōng)心
定(dìng)量PCR試劑盒(hé)
商(shāng)品屬性
| 產(chǎn)品(pǐn)名稱(chēng) | 規格(gé) | 貨號 |
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豬(zhū)傳染性胃(wèi)腸炎(yán)病(bìng)毒定量RT-PCR檢(jiǎn)測(cè)試(shì)劑盒 |
50T |
YS-P015333 |
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍(dòng)融。
運(yùn)輸：低(dī)溫(wēn)，避(bì)光(guāng)。
有效(xiào)期(qī)：一年(nián)
貨期：現貨PCR試劑(jì)盒的有(yǒu)效期一(yī)般(bān)為1年，這(zhè)是(shì)指在(zài)適當的儲存溫(wēn)度下。核(hé)酸(suān)擴增(zēng)部分(fēn)的試劑(jì)一般要(yào)貯(zhù)存(cún)於(yú)-20℃下(xià)，產(chǎn)物(wù)檢測部(bù)分試(shì)劑則(zé)貯存(cún)於2-8℃。盡(jìn)量避免反(fǎn)復凍融。
【結果(guǒ)分析條(tiáo)件設(shè)定】
u 閾(yù)值(zhí)(Threshold)設定：將閾值綫(xiàn)設(shè)定在剛好超(chāo)過正(zhèng)常陰(yīn)性質(zhì)控(kòng)品擴增(zēng)曲綫的(dí)最(zuì)高(gāo)點。
【質控標準】
2. 陽性(xìng)質控品的(dí)檢(jiǎn)測結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性(xìng)，有明(míng)顯(xiǎn)的指數(shù)擴(kuò)增(zēng)期，Ct值應小(xiǎo)於(yú)等於(yú)35；
3. 以(yǐ)上(shàng)要求需在一次(cì)實驗(yàn)中同時滿足，否則(zé)該(gāi)次(cì)實(shí)驗(yàn)視為無效(xiào)。
【結(jié)果(guǒ)判斷】
2.可疑：有明顯(xiǎn)的指數擴增期(qī)，且38≤Ct<40，此時樣(yàng)本為可疑樣(yàng)本(běn)；對(duì)於(yú)可疑(yí)樣(yàng)本(běn)建(jiàn)議復(fù)核一次，若(ruò)復核(hé)結果Ct<40且有指數擴(kuò)增(zēng)期，則判定為陽性，否則(zé)判定(dìng)為陰性(xìng)；
3. 陰(yīn)性：無指數(shù)擴增期(qī)，Ct=40或無Ct值(zhí)均(jūn)判定為陰性(xìng)樣本(běn)。
【對檢驗結果的解(jiě)釋】
1. 實驗室(shì)環境汙染(rǎn)，試劑汙染，樣品(pǐn)交叉汙(wū)染會出(chū)現假陽性(xìng)結(jié)果；
2. 試劑(jì)運(yùn)輸，保存(cún)不(bù)當或試劑配(pèi)製不準(zhǔn)確(què)引起的(dí)試(shì)劑檢(jiǎn)測(cè)效能(néng)下降，可(kě)能會導致(zhì)出現假陰性(xìng)結果。
PCR反應的特異性：
②鹼基配對原則(zé)；
③Taq DNA聚(jù)合(hé)酶合成(chéng)反應的(dí)忠實(shí)性(xìng)；
④靶(bǎ)基(jī)因的特異(yì)性(xìng)與(yǔ)保(bǎo)守性(xìng)。
豬(zhū)傳染性胃腸(cháng)炎(yán)病毒定量(liáng)RT-PCR檢測試劑(jì)盒其中引物(wù)與(yǔ)模(mó)板的正確結(jié)合是(shì)關鍵。引物(wù)與模板(bǎn)的(dí)結(jié)合(hé)及(jí)引物鏈(liàn)的延伸是(shì)遵(zūn)循鹼基配對(duì)原(yuán)則的(dí)。聚(jù)合(hé)酶合(hé)成反應(yīng)的忠(zhōng)實(shí)性(xìng)及Taq DNA聚(jù)合(hé)酶耐(nài)高(gāo)溫性，使反應中模板(bǎn)與引物的結合(復性)可以(yǐ)在(zài)較(jiào)高的溫(wēn)度(dù)下進行(háng)，結(jié)合(hé)的(dí)特(tè)異性大大(dà)增(zēng)加，被擴(kuò)增的靶(bǎ)基(jī)因片段也就能保(bǎo)持很高的(dí)正確度(dù)。再通過(guò)選(xuǎn)擇(zé)特異性和保(bǎo)守(shǒu)性高的(dí)靶基(jī)因區，其特異性程度就(jiù)更高。
(2) 靈敏(mǐn)度高
PCR產物的(dí)生成量是以(yǐ)指數(shù)方(fāng)式增加的(dí)，能(néng)將皮(pí)克(pg=10-12g)量級(jí)的起(qǐ)始待測模板(bǎn)擴增(zēng)到微克(ug=10-6g)水平(píng)。能從(cóng)100萬個細胞中檢出一(yī)個(gè)靶(bǎ)細胞(bāo)；在(zài)病毒的檢測中，PCR的靈敏度(dù)可達3個(gè)RFU(空斑形(xíng)成(chéng)單位)；在細(xì)菌(jūn)學中(zhōng)zui小(xiǎo)檢(jiǎn)出率為(wéi)3個(gè)細(xì)菌(jūn)。
(3) 簡便，快速(sù)
PCR反(fǎn)應用(yòng)耐高溫的(dí)Taq DNA聚(jù)合酶，一次(cì)性(xìng)地(dì)將反應液(yè)加好(hǎo)後(hòu)，即(jí)在DNA擴增液和(hé)水浴鍋上進(jìn)行變性-退(tuì)火-延(yán)伸(shēn)反(fǎn)應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電(diàn)泳(yǒng)分(fēn)析(xī)，不一定要(yào)用同(tóng)位素，無放(fàng)射(shè)性汙染(rǎn)，易推(tuī)廣。
(4) 對標(biāo)本的純(chún)度(dù)要(yào)求低(dī)
不需要(yào)分離病毒或細(xì)菌及培養細(xì)胞，DNA 粗(cū)製品及(jí)總RNA均可作為(wéi)擴增模(mó)板(bǎn)。可直(zhí)接(jiē)用臨(lín)床標本(běn)如血(xiě)液，體腔液，洗(xǐ)嗽(sòu)液(yè)，毛(máo)發(fā)，細(xì)胞(bāo)，活(huó)PCR技術概論(lùn)。
