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PCR檢測試劑盒(hé)
布(bù)魯(lǔ)氏杆(gān)菌屬(shǔ)通(tōng)用PCR檢(jiǎn)測試(shì)劑(jì)盒(hé)
商(shāng)品(pǐn)屬(shǔ)性(xìng)
| 產品名稱(chēng) | 英文(wén)名稱(chēng) | 貨(huò)號(hào) |
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布魯(lǔ)氏(shì)杆(gān)菌(jūn)屬通(tōng)用(yòng)PCR檢測試(shì)劑盒 |
Brucella spp.PCR |
YS-P013960 |
分類：PCR檢測試(shì)劑(jì)盒
儲存(cún)條件：-20℃避光保(bǎo)存，避免反復(fù)凍融。
運輸(shū)：低溫，避(bì)光。
有效期(qī)：一年
貨期：現(xiàn)貨(huò)PCR試劑(jì)盒的有效(xiào)期一般(bān)為(wéi)1年，這(zhè)是指在適(shì)當的(dí)儲(chǔ)存溫度(dù)下(xià)。核酸擴增(zēng)部分的試劑(jì)一般(bān)要(yào)貯(zhù)存於-20℃下(xià)，產物檢測部分試(shì)劑則貯(zhù)存(cún)於2-8℃。盡(jìn)量(liáng)避免反(fǎn)復凍(dòng)融。
【結果分析(xī)條件設(shè)定(dìng)】
u 閾(yù)值(Threshold)設(shè)定：將閾(yù)值綫設定在(zài)剛(gāng)好超過正常(cháng)陰性(xìng)質(zhì)控(kòng)品(pǐn)擴增(zēng)曲綫的最(zuì)高點。
【質控(kòng)標準(zhǔn)】
2. 陽性質控品的(dí)檢測結(jié)果應為陽性，有(yǒu)明(míng)顯的指數(shù)擴增期，Ct值(zhí)應(yīng)小於等於35；
3. 以上(shàng)要求需在(zài)一(yī)次(cì)實驗中同時滿足，否則該(gāi)次(cì)實(shí)驗視(shì)為無效(xiào)。
【結果判(pàn)斷(duàn)】
2.可疑：有明(míng)顯(xiǎn)的指數(shù)擴增期，且(qiě)38≤Ct<40，此時(shí)樣本為(wéi)可(kě)疑(yí)樣本(běn)；對於可疑樣(yàng)本(běn)建議(yì)復(fù)核(hé)一(yī)次，若復(fù)核(hé)結果Ct<40且有指數擴增(zēng)期，則(zé)判定為陽(yáng)性，否(fǒu)則判(pàn)定(dìng)為陰性(xìng)；
3. 陰(yīn)性(xìng)：無(wú)指(zhǐ)數擴增期，Ct=40或無Ct值(zhí)均判定(dìng)為陰性樣(yàng)本。
【對檢驗(yàn)結果的(dí)解釋】
1. 實驗室(shì)環境(jìng)汙染，試劑汙染，樣品(pǐn)交叉(chā)汙(wū)染(rǎn)會(huì)出(chū)現(xiàn)假陽(yáng)性(xìng)結果(guǒ)；
2. 試(shì)劑運(yùn)輸，保存(cún)不當或(huò)試劑配製不準確(què)引起的(dí)試劑檢(jiǎn)測效能下降(jiàng)，可(kě)能(néng)會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)假陰(yīn)性(xìng)結果(guǒ)。
PCR反應(yīng)的特(tè)異性：
②鹼基(jī)配對原則(zé)；
③Taq DNA聚合酶(méi)合(hé)成反應的(dí)忠實性；
④靶基因的特異性(xìng)與保守(shǒu)性。
布魯(lǔ)氏杆菌屬(shǔ)通用(yòng)PCR檢(jiǎn)測(cè)試(shì)劑盒(hé)其中引(yǐn)物(wù)與模板的正確結合(hé)是關(guān)鍵(jiàn)。引物(wù)與(yǔ)模(mó)板的結(jié)合及(jí)引(yǐn)物鏈的延伸(shēn)是遵(zūn)循鹼(jiǎn)基(jī)配(pèi)對(duì)原則的。聚(jù)合(hé)酶合成(chéng)反應的忠(zhōng)實(shí)性(xìng)及Taq DNA聚合酶(méi)耐高溫(wēn)性，使反(fǎn)應(yīng)中(zhōng)模(mó)板與(yǔ)引(yǐn)物的結合(復(fù)性(xìng))可(kě)以在較高(gāo)的溫(wēn)度(dù)下進行(háng)，結合的特(tè)異性(xìng)大(dà)大增(zēng)加，被(bèi)擴增(zēng)的(dí)靶(bǎ)基因片段也就能保持(chí)很高的(dí)正確(què)度。再(zài)通過(guò)選擇特(tè)異性(xìng)和保(bǎo)守性(xìng)高的(dí)靶(bǎ)基因(yīn)區，其特異性程度就更(gēng)高(gāo)。
(2) 靈敏(mǐn)度高
PCR產物的(dí)生(shēng)成量是(shì)以指數(shù)方式(shì)增加(jiā)的(dí)，能將皮(pí)克(pg=10-12g)量級(jí)的起始(shǐ)待測模板擴增到微克(kè)(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細胞中檢(jiǎn)出(chū)一(yī)個靶(bǎ)細(xì)胞(bāo)；在(zài)病(bìng)毒(dú)的(dí)檢測中，PCR的靈敏度(dù)可達(dá)3個RFU(空(kōng)斑形(xíng)成單位(wèi))；在(zài)細菌學中(zhōng)zui小檢(jiǎn)出(chū)率為(wéi)3個細菌。
(3) 簡便，快速
PCR反應用(yòng)耐(nài)高溫的(dí)Taq DNA聚合酶，一(yī)次性地(dì)將(jiāng)反(fǎn)應液(yè)加(jiā)好(hǎo)後(hòu)，即在DNA擴(kuò)增液和水(shuǐ)浴(yù)鍋(guō)上(shàng)進行變性-退火(huǒ)-延伸(shēn)反應(yīng)，一(yī)般在(zài)2～4 小(xiǎo)時完(wán)成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增(zēng)產物一(yī)般用電泳分析，不(bù)一(yī)定(dìng)要(yào)用同(tóng)位素(sù)，無放(fàng)射性(xìng)汙(wū)染(rǎn)，易推廣。
(4) 對(duì)標本的(dí)純度(dù)要(yào)求低
不需要分(fēn)離(lí)病(bìng)毒(dú)或細(xì)菌及培養細胞(bāo)，DNA 粗製品及(jí)總RNA均(jūn)可作(zuò)為(wéi)擴增模(mó)板。可直(zhí)接用(yòng)臨(lín)床標本如血液，體腔液(yè)，洗(xǐ)嗽(sòu)液(yè)，毛發，細胞(bāo)，活(huó)PCR技術(shù)概論(lùn)。
