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PCR檢測(cè)試(shì)劑盒(hé)
商(shāng)品屬(shǔ)性
| 產品名稱 | 英(yīng)文名稱(chēng) | 貨號 |
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黑(hēi)色(sè)普(pǔ)雷沃(wò)菌(jūn)PCR檢測(cè)試(shì)劑(jì)盒 |
Prevotella melaninogenicaPCR |
YS-P014632 |
分類(lèi)：PCR檢測試劑(jì)盒(hé)
儲存(cún)條件(jiàn)：-20℃避光保存(cún)，避免反復凍融(róng)。
運輸：低(dī)溫(wēn)，避(bì)光(guāng)。
有效(xiào)期：一(yī)年
貨(huò)期(qī)：現貨(huò)PCR試(shì)劑盒的(dí)有效期一般為1年，這是指在適當的(dí)儲存溫度下。核酸(suān)擴(kuò)增部(bù)分的試劑一(yī)般要(yào)貯存於(yú)-20℃下(xià)，產(chǎn)物(wù)檢測(cè)部分(fēn)試劑則貯(zhù)存(cún)於2-8℃。盡量避(bì)免(miǎn)反復(fù)凍融。
【結果(guǒ)分析(xī)條件設定】
u 閾(yù)值(Threshold)設定(dìng)：將(jiāng)閾值(zhí)綫設定(dìng)在剛(gāng)好超過(guò)正(zhèng)常陰(yīn)性(xìng)質控(kòng)品(pǐn)擴增(zēng)曲綫(xiàn)的最高(gāo)點。
【質控標(biāo)準】
2. 陽性質控(kòng)品(pǐn)的檢測結(jié)果(guǒ)應為陽(yáng)性，有明顯的指(zhǐ)數擴(kuò)增期，Ct值(zhí)應小(xiǎo)於等(děng)於35；
3. 以(yǐ)上(shàng)要(yào)求需(xū)在(zài)一次(cì)實驗中同時滿足(zú)，否則該(gāi)次(cì)實(shí)驗視為無效(xiào)。
【結(jié)果判(pàn)斷】
2.可疑(yí)：有(yǒu)明顯(xiǎn)的指數(shù)擴增期(qī)，且(qiě)38≤Ct<40，此時(shí)樣本(běn)為可(kě)疑樣(yàng)本(běn)；對(duì)於可疑樣本建(jiàn)議(yì)復核(hé)一(yī)次，若復(fù)核(hé)結果Ct<40且(qiě)有(yǒu)指數擴(kuò)增期(qī)，則(zé)判定(dìng)為(wéi)陽性(xìng)，否(fǒu)則(zé)判(pàn)定為陰(yīn)性；
3. 陰性：無指(zhǐ)數(shù)擴(kuò)增(zēng)期(qī)，Ct=40或無Ct值均判(pàn)定(dìng)為(wéi)陰(yīn)性(xìng)樣本(běn)。
【對(duì)檢(jiǎn)驗結果的(dí)解(jiě)釋】
1. 實(shí)驗室(shì)環境汙染，試劑(jì)汙(wū)染(rǎn)，樣(yàng)品交叉汙(wū)染會出現(xiàn)假(jiǎ)陽性(xìng)結(jié)果；
2. 試(shì)劑運(yùn)輸(shū)，保(bǎo)存不當或(huò)試劑配製不準確引起的試劑檢(jiǎn)測效能下(xià)降，可能(néng)會(huì)導致(zhì)出(chū)現假陰(yīn)性結果。
PCR反(fǎn)應(yīng)的特異(yì)性：
②鹼(jiǎn)基配對(duì)原(yuán)則；
③Taq DNA聚合酶合成反(fǎn)應的(dí)忠(zhōng)實性(xìng)；
④靶(bǎ)基因的特(tè)異(yì)性與保守性。
黑色普(pǔ)雷沃菌PCR檢(jiǎn)測(cè)試(shì)劑盒(hé)其中引物(wù)與模(mó)板的正確結(jié)合(hé)是關鍵(jiàn)。引物(wù)與模(mó)板(bǎn)的(dí)結(jié)合(hé)及(jí)引物(wù)鏈的(dí)延(yán)伸是遵(zūn)循(xún)鹼(jiǎn)基(jī)配對(duì)原則的。聚(jù)合(hé)酶合(hé)成反應(yīng)的忠實(shí)性及(jí)Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引(yǐn)物的結(jié)合(hé)(復性)可(kě)以在(zài)較高的溫度下(xià)進行，結(jié)合(hé)的特異(yì)性大大(dà)增加，被(bèi)擴增(zēng)的靶(bǎ)基因片段也就能保持很高的正確度(dù)。再(zài)通過(guò)選擇特異(yì)性和(hé)保守(shǒu)性高的(dí)靶(bǎ)基因區，其(qí)特異(yì)性程度就更(gēng)高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生(shēng)成(chéng)量(liáng)是以指數方式(shì)增加的，能(néng)將(jiāng)皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板(bǎn)擴(kuò)增(zēng)到微(wēi)克(ug=10-6g)水(shuǐ)平(píng)。能從100萬(wàn)個細(xì)胞中檢出一個靶(bǎ)細胞(bāo)；在病(bìng)毒的(dí)檢測中(zhōng)，PCR的靈敏(mǐn)度可達3個(gè)RFU(空(kōng)斑形成單位(wèi))；在細(xì)菌學中zui小檢出率(shuài)為3個細(xì)菌。
(3) 簡便(biàn)，快(kuài)速
PCR反應(yīng)用(yòng)耐高溫的(dí)Taq DNA聚合酶(méi)，一(yī)次性地將(jiāng)反應液(yè)加(jiā)好(hǎo)後，即(jí)在DNA擴(kuò)增(zēng)液和水(shuǐ)浴(yù)鍋(guō)上進(jìn)行變性-退火(huǒ)-延伸反(fǎn)應，一(yī)般在(zài)2～4 小時完成(chéng)擴(kuò)增反(fǎn)應(yīng)。擴增產(chǎn)物(wù)一(yī)般用(yòng)電泳分(fēn)析，不(bù)一定(dìng)要用同位素，無放(fàng)射性汙染，易推廣(guǎng)。
(4) 對標(biāo)本的(dí)純度要(yào)求低(dī)
不需(xū)要分離病毒(dú)或細(xì)菌(jūn)及培(péi)養細胞，DNA 粗製品(pǐn)及總(zǒng)RNA均(jūn)可作(zuò)為(wéi)擴增(zēng)模板。可(kě)直(zhí)接(jiē)用(yòng)臨(lín)床(chuáng)標本(běn)如血液(yè)，體腔(qiāng)液，洗(xǐ)嗽(sòu)液，毛發(fā)，細(xì)胞，活(huó)PCR技(jì)術概(gài)論(lùn)。
