產品中心(xīn)
PCR檢(jiǎn)測試(shì)劑盒(hé)
商品(pǐn)屬性(xìng)
| 產(chǎn)品(pǐn)名稱 | 英文名(míng)稱(chēng) | 貨(huò)號 |
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沃爾巴克(kè)氏菌(jūn)通用(yòng)PCR檢(jiǎn)測試(shì)劑盒(hé) |
Wolbachia spp.PCR |
YS-P014924 |
分(fēn)類(lèi)：PCR檢(jiǎn)測試劑盒(hé)
儲存(cún)條件(jiàn)：-20℃避光保存(cún)，避(bì)免(miǎn)反復(fù)凍融(róng)。
運(yùn)輸(shū)：低溫，避(bì)光。
有(yǒu)效(xiào)期：一(yī)年(nián)
貨期(qī)：現貨PCR試(shì)劑(jì)盒(hé)的有(yǒu)效期一般為(wéi)1年(nián)，這(zhè)是(shì)指(zhǐ)在適(shì)當的儲(chǔ)存溫度下。核(hé)酸擴增部分(fēn)的試劑(jì)一(yī)般要貯(zhù)存於-20℃下(xià)，產物(wù)檢(jiǎn)測(cè)部(bù)分(fēn)試(shì)劑(jì)則貯存(cún)於(yú)2-8℃。盡(jìn)量避免反復凍(dòng)融。
【結果分(fēn)析條件設定】
u 閾值(zhí)(Threshold)設定(dìng)：將(jiāng)閾值綫(xiàn)設定(dìng)在剛好超過(guò)正常(cháng)陰性質控品擴增曲(qū)綫的最(zuì)高點。
【質控標準(zhǔn)】
2. 陽(yáng)性(xìng)質(zhì)控(kòng)品(pǐn)的(dí)檢(jiǎn)測(cè)結(jié)果應為(wéi)陽性，有明(míng)顯的指數(shù)擴增(zēng)期(qī)，Ct值應小(xiǎo)於等(děng)於35；
3. 以(yǐ)上要(yào)求需在(zài)一(yī)次實(shí)驗中同時滿足，否則(zé)該(gāi)次(cì)實(shí)驗視(shì)為無(wú)效(xiào)。
【結(jié)果(guǒ)判斷(duàn)】
2.可(kě)疑(yí)：有(yǒu)明(míng)顯的指數擴(kuò)增期，且(qiě)38≤Ct<40，此時樣(yàng)本為可疑(yí)樣本(běn)；對(duì)於可疑(yí)樣(yàng)本建(jiàn)議復(fù)核一次，若復(fù)核(hé)結果Ct<40且有(yǒu)指數(shù)擴增(zēng)期(qī)，則(zé)判(pàn)定(dìng)為陽(yáng)性，否則判(pàn)定為陰性(xìng)；
3. 陰(yīn)性：無(wú)指數(shù)擴(kuò)增(zēng)期，Ct=40或(huò)無(wú)Ct值(zhí)均判定為陰性(xìng)樣本(běn)。
【對(duì)檢驗結果(guǒ)的(dí)解釋(shì)】
1. 實驗(yàn)室(shì)環(huán)境汙染(rǎn)，試劑汙染，樣品(pǐn)交叉汙(wū)染會出現(xiàn)假(jiǎ)陽性(xìng)結(jié)果(guǒ)；
2. 試劑運(yùn)輸，保存(cún)不(bù)當(dāng)或(huò)試(shì)劑配製(zhì)不準確(què)引(yǐn)起(qǐ)的(dí)試劑檢(jiǎn)測(cè)效(xiào)能(néng)下降，可能會導致出現(xiàn)假陰(yīn)性(xìng)結果(guǒ)。
PCR反(fǎn)應(yīng)的(dí)特(tè)異性(xìng)：
②鹼基配(pèi)對原則(zé)；
③Taq DNA聚合酶(méi)合成(chéng)反(fǎn)應(yīng)的(dí)忠(zhōng)實性；
④靶基因(yīn)的特異(yì)性(xìng)與(yǔ)保(bǎo)守性。
沃爾(ěr)巴克氏(shì)菌通(tōng)用PCR檢測試(shì)劑盒(hé)其中引物與(yǔ)模板(bǎn)的(dí)正(zhèng)確結合是關鍵。引(yǐn)物與(yǔ)模(mó)板的結(jié)合(hé)及引物鏈(liàn)的(dí)延伸(shēn)是(shì)遵循(xún)鹼(jiǎn)基配(pèi)對(duì)原則的。聚(jù)合酶合成反(fǎn)應的忠實性及Taq DNA聚(jù)合酶耐高溫性(xìng)，使(shǐ)反(fǎn)應中(zhōng)模板與(yǔ)引(yǐn)物的結(jié)合(復(fù)性)可(kě)以在(zài)較(jiào)高的(dí)溫度下進行(háng)，結(jié)合的特(tè)異(yì)性(xìng)大大增加(jiā)，被擴(kuò)增的靶(bǎ)基因(yīn)片(piàn)段也(yě)就能(néng)保(bǎo)持很高的正確(què)度。再(zài)通(tōng)過選擇特(tè)異(yì)性和保(bǎo)守性(xìng)高的(dí)靶(bǎ)基因區，其特異性(xìng)程度就更(gēng)高。
(2) 靈(líng)敏度高
PCR產物的生成量(liáng)是以指數方式增(zēng)加的，能將(jiāng)皮(pí)克(pg=10-12g)量級的(dí)起始(shǐ)待(dài)測模(mó)板擴(kuò)增到微(wēi)克(ug=10-6g)水(shuǐ)平(píng)。能從(cóng)100萬(wàn)個(gè)細胞(bāo)中(zhōng)檢(jiǎn)出一個(gè)靶細胞；在病(bìng)毒的檢(jiǎn)測中(zhōng)，PCR的靈敏(mǐn)度(dù)可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形(xíng)成(chéng)單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小(xiǎo)檢出率(shuài)為(wéi)3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便，快速
PCR反應用(yòng)耐高(gāo)溫的Taq DNA聚(jù)合酶(méi)，一次性地將(jiāng)反應(yīng)液加好後(hòu)，即(jí)在DNA擴(kuò)增(zēng)液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一(yī)般在2～4 小時(shí)完(wán)成擴增(zēng)反應。擴增產(chǎn)物(wù)一(yī)般用電(diàn)泳(yǒng)分析(xī)，不一定要用(yòng)同(tóng)位素，無(wú)放(fàng)射性汙染，易(yì)推(tuī)廣(guǎng)。
(4) 對標本的純(chún)度(dù)要(yào)求(qiú)低
不(bù)需要(yào)分(fēn)離(lí)病毒或(huò)細(xì)菌及培養(yǎng)細胞(bāo)，DNA 粗製品(pǐn)及(jí)總(zǒng)RNA均可(kě)作(zuò)為擴增(zēng)模(mó)板。可直接(jiē)用(yòng)臨床(chuáng)標本(běn)如(rú)血液，體腔(qiāng)液，洗嗽液，毛(máo)發(fā)，細胞(bāo)，活PCR技(jì)術(shù)概(gài)論(lùn)。
