測定意(yì)義
輔(fǔ)酶ⅠNAD(H)廣泛存在(zài)於動(dòng)物，植(zhí)物，微生(shēng)物(wù)和培養(yǎng)細(xì)胞(bāo)中
，NAD+是(shì)糖酵(jiào)解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的(dí)主要(yào)氫受(shòu)體
，生(shēng)成的(dí)NADH經呼吸電(diàn)子鏈（ETC）傳遞把(bǎ)電(diàn)子交(jiāo)給(gěi)氧
，在(zài)合成(chéng)ATP的(dí)同(tóng)時
，形成(chéng)大量(liáng)的ROS
，同時(shí)NADH再(zài)生為(wéi)NAD+。糖，脂(zhī)，蛋白質(zhì)三大(dà)代謝(xiè)物(wù)質分解中的氧化反(fǎn)應絕大部分(fēn)通(tōng)過(guò)這一(yī)體(tǐ)係(xì)完(wán)成(chéng)。NAD(H)含量(liáng)和NADH/NAD+比值的高低(dī)可(kě)用(yòng)於評價(jià)糖酵解和(hé)TCA循環的強弱。較(jiào)高的(dí)NAD(H)及(jí)NADH/NAD+比值(zhí)說(shuō)明細胞(bāo)呼(hū)吸(xī)耗氧量(liáng)較(jiào)高
，處(chǔ)於(yú)過氧(yǎng)化(huà)狀(zhuàng)態。此外
，NADH/NAD+比(bǐ)值(zhí)升高也可(kě)抑(yì)製(zhì)糖(táng)酵解(jiě)和TCA循環(huán)。另外
，NAD+降(jiàng)解產(chǎn)物(wù)對細(xì)胞信號傳(chuán)導(dǎo)，代(dài)謝和基因表(biǎo)達等具有(yǒu)重要(yào)的調控(kòng)作用(yòng)。
測(cè)定原(yuán)理
分(fēn)別用酸性和鹼(jiǎn)性提(tí)取(qǔ)液(yè)提取(qǔ)樣(yàng)品中NAD+和NADH
，NADH通過(guò)PMS的遞(dì)氫(qīng)作用(yòng)
，還原氧(yǎng)化(huà)型(xíng)噻唑藍（MTT）為甲瓚(zàn)
，在570nm下(xià)檢測(cè)吸(xī)光值
；而(ér)NAD+可被乙醇(chún)脫(tuō)氫酶還原(yuán)為(wéi)NADH
，進一步(bù)采用(yòng)MTT還原(yuán)法檢(jiǎn)測(cè)。
需(xū)自(zì)備的(dí)儀器和(hé)用品(pǐn)
可見分光光度(dù)計(jì)/酶標(biāo)儀，台式離(lí)心(xīn)機，移(yí)液器，微量石英(yīng)比色皿/96孔(kǒng)板，研(yán)缽，冰(bīng)和蒸(zhēng)餾(liù)水。