測定意(yì)義
輔酶ⅠNAD(H)廣泛(fàn)存(cún)在於(yú)動(dòng)物，植(zhí)物，微生(shēng)物和培養細胞中(zhōng)，NAD+是(shì)糖酵(jiào)解（EMP）和(hé)三(sān)羧酸循環（TCA）的主要(yào)氫受(shòu)體，生成的(dí)NADH經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞(dì)把(bǎ)電子交給(gěi)氧(yǎng)，在(zài)合(hé)成(chéng)ATP的(dí)同時，形成大(dà)量(liáng)的(dí)ROS，同時(shí)NADH再(zài)生(shēng)為NAD+。糖，脂(zhī)，蛋(dàn)白質(zhì)三大代(dài)謝(xiè)物質(zhì)分解(jiě)中的氧(yǎng)化反應絕大部分(fēn)通(tōng)過這一(yī)體(tǐ)係(xì)完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可(kě)用(yòng)於(yú)評價糖(táng)酵解和(hé)TCA循環的(dí)強(qiáng)弱。較高(gāo)的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細(xì)胞呼(hū)吸耗(hào)氧量較高，處(chǔ)於(yú)過氧化(huà)狀(zhuàng)態。此外，NADH/NAD+比值(zhí)升高也(yě)可抑(yì)製糖酵解(jiě)和(hé)TCA循環(huán)。另(lìng)外(wài)，NAD+降(jiàng)解(jiě)產物對細胞信號(hào)傳導(dǎo)，代(dài)謝和基因(yīn)表(biǎo)達等具有(yǒu)重(zhòng)要的調(tiáo)控作(zuò)用。
測定原理(lǐ)
分別用(yòng)酸性和鹼性提(tí)取液提(tí)取(qǔ)樣品中NAD+和NADH，NADH通過PMS的遞氫作用(yòng)，還(huán)原氧化型噻唑(zuò)藍(lán)（MTT）為(wéi)甲(jiǎ)瓚(zàn)，在(zài)570nm下(xià)檢(jiǎn)測吸(xī)光值；而NAD+可(kě)被乙(yǐ)醇(chún)脫氫(qīng)酶還原為NADH，進一(yī)步(bù)采(cǎi)用(yòng)MTT還(huán)原(yuán)法檢測(cè)。
需自(zì)備的儀器(qì)和用(yòng)品
可見分光(guāng)光度計(jì)，台式離心機(jī)，移液器，1 mL玻璃(lí)比(bǐ)色皿，研缽(bō)，冰(bīng)和蒸(zhēng)餾水。