大鼠(shǔ)角膜成纖(xiān)維(wéi)細胞

大鼠角(jiǎo)膜成纖維細胞分離自(zì)眼角(jiǎo)膜組織；角膜(mó)位於(yú)眼球(qiú)前(qián)壁(bì)的一(yī)層透(tòu)明膜，約占(zhān)纖(xiān)維膜的前1/6，從(cóng)後麵(miàn)看角(jiǎo)膜(mó)呈正(zhèng)圓(yuán)形，從(cóng)前(qián)麵看為(wéi)橫橢圓形。角(jiǎo)膜厚(hòu)度(dù)各部(bù)分不(bù)盡相(xiāng)同，中央部最薄。角膜有十分敏感的(dí)神經末(mò)梢，如有外物(wù)接(jiē)觸(chù)角(jiǎo)膜，眼瞼便會不(bù)由(yóu)自主地合上(shàng)以(yǐ)保(bǎo)護眼(yǎn)睛。為了(liǎo)保持透明，角(jiǎo)膜並沒有血(xiě)管，透過(guò)外界空(kōng)氣(qì)，淚液及(jí)房水獲取(qǔ)養份及氧氣(qì)。角膜(mó)分為(wéi)五層(céng)，由前(qián)向(xiàng)後(hòu)依(yī)次(cì)為上(shàng)皮(pí)細(xì)胞(bāo)層，前彈(dàn)力層(céng)，基(jī)質(zhì)層，後彈力(lì)層(céng)，內(nèi)皮(pí)細(xì)胞層。成(chéng)纖維(wéi)細胞（Fibroblast）是(shì)疏鬆結締組織的(dí)主要細胞成(chéng)分(fēn)，由(yóu)胚胎時(shí)期(qī)的間充(chōng)質(zhì)細(xì)胞分化而(ér)來。成纖維(wéi)細(xì)胞較大(dà)，輪廓清楚，多為突(tū)起的紡錘(chuí)形(xíng)或星(xīng)形(xíng)的(dí)扁平狀結構，其細胞(bāo)核(hé)呈規則的卵圓(yuán)形，核仁大(dà)而(ér)明顯(xiǎn)。成(chéng)纖(xiān)維細胞功能(néng)活(huó)動旺(wàng)盛，細胞質嗜(shì)弱(ruò)鹼性，具明顯的蛋白(bái)質(zhì)合(hé)成和(hé)分泌活動，在一(yī)定(dìng)條件下(xià)，它可(kě)以實現跟纖維細(xì)胞(bāo)的互(hù)相轉化；成(chéng)纖(xiān)維細胞對不同程(chéng)度(dù)的細(xì)胞變性，壞死和(hé)組織缺損的(dí)修(xiū)復(fù)有(yǒu)著(zhuó)十分重(zhòng)要的作用。剛分(fēn)離(lí)的角膜成(chéng)纖維細(xì)胞呈圓(yuán)形，折光性良(liáng)好，懸(xuán)浮(fú)於培養基中。30 min細(xì)胞(bāo)貼壁(bì)，其(qí)中部分(fēn)開始伸(shēn)出偽足，表(biǎo)現(xiàn)為小的(dí)突(tū)起(qǐ)；6 h後細(xì)胞基(jī)本貼壁(bì)完全(quán)，伸(shēn)展(zhǎn)成梭(suō)形(xíng)，胞(bāo)核清晰，分布較(jiào)均(jūn)匀(yún)，散(sàn)在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞(bāo)生長(cháng)迅(xùn)速(sù)，5-7天(tiān)即呈融合狀態，細(xì)胞排列緊密，有(yǒu)的(dí)交叉(chā)重(zhòng)疊生(shēng)長(cháng)，平坦，胞體(tǐ)較大(dà)，細(xì)胞(bāo)質(zhì)透明，細胞(bāo)核較大，呈(chéng)橢圓(yuán)形(xíng)，顏色淡。細(xì)胞(bāo)融合，並(bìng)彼(bǐ)此連(lián)接(jiē)成(chéng)網狀(zhuàng)；細胞(bāo)呈突起(qǐ)的(dí)紡錘形或星(xīng)形(xíng)的(dí)扁平分布。角膜成(chéng)纖維(wéi)細胞(bāo)在生(shēng)理條件(jiàn)下的主(zhǔ)要功(gōng)能包(bāo)括構造(zào)和維持角(jiǎo)膜的正(zhèng)常(cháng)形態，合成和(hé)釋放細胞外基質(zhì)以(yǐ)及(jí)組織(zhī)損傷後及(jí)時大量(liáng)聚集修復(fù)損傷(shāng)組織(zhī)。

自(zì)備(bèi)試(shì)劑： 0.25%胰(yí)蛋白(bái)酶(méi)  ，PBS  ，完全培養基(jī)

培養基： 大鼠角膜成(chéng)纖維(wéi)細胞完全(quán)培養基(jī)(含FBS，生長添加劑，Penicillin，Streptomycin等)

換液頻率(shuài)： 每2-3天換液一次

生長特性(xìng)： 貼(tiē)壁

細胞形態： 成纖(xiān)維細胞樣(yàng)

傳代(dài)比例(lì)： 1:2

傳代特性(xìng)： 可(kě)傳5代左(zuǒ)右(yòu)；3代以(yǐ)內(nèi)狀(zhuàng)態最佳

消化液(yè)： 0.25%胰(yí)蛋白酶

大鼠(shǔ)角膜成纖(xiān)維(wéi)細胞(bāo)體外培養(yǎng)周期(qī)有限；建(jiàn)議使(shǐ)用配套(tào)的專(zhuān)用生長(cháng)培養(yǎng)基及正確(què)的操作(zuò)方(fāng)法(fǎ)來培養(yǎng)，以(yǐ)此保證該細胞的(dí)最佳培養狀態。

方(fāng)法簡(jiǎn)介 實(shí)驗室分離的大鼠角(jiǎo)膜成纖維(wéi)細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原(yuán)酶混合消(xiāo)化法結合(hé)差速(sù)貼(tiē)壁(bì)法(fǎ)製備而來(lái)，細(xì)胞總(zǒng)量(liáng)約(yuē)為(wéi)5×10⁵ cells/瓶。

質(zhì)量(liáng)檢測 實驗室分離(lí)的大鼠(shǔ)角(jiǎo)膜(mó)成(chéng)纖(xiān)維(wéi)細胞經(jīng)Vimentin免(miǎn)疫熒(yíng)光鑒(jiàn)定(dìng)，純(chún)度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1，HBV，HCV，支原體，細菌(jūn)，酵(jiào)母和(hé)真菌等。