英(yīng)文(wén)簡稱：5-NT ELISA Kit
規(guī)格：96T/48T
代(dài)測服務
，全(quán)程Elisa實驗(yàn)技(jì)術指導(dǎo)
，免(miǎn)費(fèi)代(dài)做實驗。
特(tè)點：靈敏(mǐn)性高(gāo)，特異性強，重(zhòng)復性好(hǎo)
運(yùn)輸：現貨供應
，一(yī)般(bān)為快遞運(yùn)輸
，江浙滬(hù)隔天到
，外地(dì)及偏遠地方三至五天時(shí)間到(dào)貨(huò)。
保存:2~8℃
有效期(qī):6個(gè)月
標本:血清，血漿，細(xì)胞上清液(yè)，尿液，體(tǐ)液(yè)，灌洗液(yè)，腦(nǎo)脊髓，心(xīn)房水(shuǐ)，胸(xiōng)房水(shuǐ)，組織(zhī)等。
檢(jiǎn)測目的:用於測定血(xiě)清,血(xiě)漿及相關液體(tǐ)等(děng)樣本。例如適(shì)合(hé)檢測包(bāo)括血(xiě)清(qīng)，血漿(jiāng)，尿(niào)液，胸腹水(shuǐ)，灌洗(xǐ)液，腦脊液，細胞培養上清，組織匀(yún)漿等標(biāo)本。
用途(tú):科(kē)研實(shí)驗等領(lǐng)域科(kē)學(xué)研(yán)究,不得(dé)用於臨(lín)床(chuáng)診斷。
樣(yàng)本處(chǔ)理(lǐ)及要(yào)求：
1. 血清：室(shì)溫(wēn)血(xiě)液自然凝固10-20分(fēn)鐘
，離(lí)心(xīn)20分鐘左(zuǒ)右（2000-3000轉/分(fēn)）。仔細(xì)收集(jí)上清
，保存(cún)過程中如出(chū)現沉澱
，應再(zài)次離心。
2. 血(xiě)漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的(dí)要(yào)求選(xuǎn)擇(zé)EDTA或(huò)檸(níng)檬(méng)酸鈉作(zuò)為抗凝劑(jì)
，混(hùn)合(hé)10-20分鐘(zhōng)後(hòu)
，離(lí)心20分(fēn)鐘左右(yòu)（2000-3000轉/分(fēn)）。仔(zī)細收集上清
，保(bǎo)存過(guò)程中如有沉澱形(xíng)成(chéng)
，應(yīng)該再(zài)次離(lí)心。
3. 尿(niào)液：用無菌管收集
，離心(xīn)20分鐘左(zuǒ)右（2000-3000轉(zhuǎn)/分(fēn)）。仔細收(shōu)集(jí)上(shàng)清(qīng)
，保(bǎo)存(cún)過(guò)程(chéng)中(zhōng)如有沉(chén)澱形成
，應(yīng)再次離(lí)心。胸腹水(shuǐ)，腦脊(jǐ)液參照(zhào)實(shí)行(háng)。
4. 細胞培養上(shàng)清(qīng)：檢(jiǎn)測(cè)分泌性的成(chéng)份(fèn)時
，用無(wú)菌(jūn)管(guǎn)收集(jí)。離心(xīn)20分(fēn)鐘左(zuǒ)右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清(qīng)。檢(jiǎn)測(cè)細胞內(nèi)的成份時
，用PBS（PH7.2-7.4）稀(xī)釋細(xì)胞(bāo)懸液
，細胞濃(nóng)度達(dá)到
100萬(wàn)/ml左(zuǒ)右。通(tōng)過(guò)反復(fù)凍(dòng)融(róng)
，以(yǐ)使細胞破壞並(bìng)放(fàng)出細(xì)胞(bāo)內成份。離心(xīn)20分鐘左右(yòu)（2000-3000轉(zhuǎn)/分(fēn)）。仔細收(shōu)集(jí)上清。保存過(guò)程(chéng)中如有(yǒu)沉澱形成
，應(yīng)再次離(lí)心(xīn)。
5. 組織標(biāo)本(běn)：切(qiē)割(gē)標本後(hòu)
，稱取重(zhòng)量。加(jiā)入一(yī)定量的(dí)PBS
，PH7.4。用液氮迅速冷(lěng)凍(dòng)保存備(bèi)用。標(biāo)本融(róng)化(huà)後仍然保持2-8℃的(dí)溫(wēn)度。加入一(yī)定(dìng)量(liáng)的(dí)PBS（PH7.4）
，用(yòng)手工或匀漿(jiāng)器將(jiāng)標(biāo)本匀漿充分。離心20分(fēn)鐘(zhōng)左右（2000-3000轉/分(fēn)）。仔(zī)細(xì)收集上(shàng)清(qīng)。分裝後(hòu)一份待(dài)檢(jiǎn)測(cè)
，其(qí)餘冷凍備用。
6. 標(biāo)本(běn)采集(jí)後盡早進行(háng)提(tí)取
，提取(qǔ)按相關(guān)文(wén)獻(xiàn)進(jìn)行
，提取後應(yīng)盡(jìn)快(kuài)進行實(shí)驗(yàn)。若(ruò)不能(néng)馬(mǎ)上進行試驗
，可將(jiāng)標本放(fàng)於(yú)-20℃保(bǎo)存(cún)
，但(dàn)應(yīng)避免反復凍融.
7. 不(bù)能檢測(cè)含(hán)NaN3的樣(yàng)品(pǐn)
，因(yīn)NaN3抑(yì)製辣根過(guò)氧(yǎng)化(huà)物酶的(dí)（HRP）活性(xìng)。
操(cāo)作(zuò)步驟
1. 標(biāo)準品的稀釋與加樣：在(zài)酶標(biāo)包被板(bǎn)上設標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔
，在(zài)di一，第二孔(kǒng)中(zhōng)分別加標(biāo)準品(pǐn)100μl
，然(rán)後在di一，第二孔中(zhōng)加標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)稀(xī)釋液50μl
，混匀；然(rán)後(hòu)從di一孔(kǒng)，第二孔(kǒng)中(zhōng)各取100μl分別加到第三孔和第(dì)四孔
，再(zài)在第三，第(dì)四(sì)孔分別加標準品(pǐn)稀釋(shì)液(yè)50μl
，混(hùn)匀(yún)；然後(hòu)在第(dì)三(sān)孔和(hé)第四(sì)孔中先各取50μl棄(qì)掉
，再各取(qǔ)50μl分(fēn)別取50μl分別(bié)加(jiā)到第(dì)七(qī)，第(dì)八孔中
，再(zài)在(zài)第七(qī)，第(dì)八孔中分別(bié)加(jiā)標(biāo)準品稀釋(shì)液50μl
，混匀後(hòu)從(cóng)第七，第八孔中(zhōng)加到第(dì)五，第六(liù)孔(kǒng)中(zhōng)
，再在(zài)第五，第六孔中分別加標(biāo)準品(pǐn)稀釋液(yè)50ul
，混(hùn)匀(yún)；混匀後(hòu)從第(dì)五，第六(liù)孔(kǒng)中(zhōng)各(gè)分別取(qǔ)50μl加(jiā)到(dào)第(dì)九，第十孔(kǒng)中(zhōng)
，再在第九第十孔(kǒng)分別加(jiā)標準品(pǐn)稀釋液(yè)50μl
，混匀後(hòu)從(cóng)第九(jiǔ)第十(shí)孔中各(gè)取50μl棄(qì)掉。（稀釋後(hòu)各(gè)孔(kǒng)加樣量都為50μl
，濃度分(fēn)別為(wéi)180 ng/L
，120 ng/L
，60 ng/L
，30 ng/
，15 ng/L）。
2. 加樣(yàng)：分(fēn)別設(shè)空白(bái)孔(kǒng)（空白對(duì)照孔不加樣品及(jí)酶標試劑(jì)
，其(qí)餘各步操作(zuò)相同），待測樣品(pǐn)孔。在(zài)酶標包(bāo)被板上(shàng)待測樣(yàng)品孔中先加樣品(pǐn)稀釋液40μl
，然(rán)後再加(jiā)待測樣品10μl（樣(yàng)品(pǐn)最(zuì)終稀(xī)釋度為5倍(bèi)）。加(jiā)樣將樣(yàng)品加(jiā)於酶(méi)標板孔底部(bù)
，盡(jìn)量不觸及孔(kǒng)壁
，輕輕晃(huǎng)動混(hùn)匀(yún)。
3. 溫育：用封板(bǎn)膜(mó)封(fēng)板後置37℃溫(wēn)育30分(fēn)鐘。
4. 配液：將30（48T的(dí)20倍(bèi)）倍(bèi)濃縮洗(xǐ)滌液(yè)用蒸餾(liù)水30（48T的20倍）倍(bèi)稀釋後備用。
5. 洗滌(dí)：小心揭(jiē)掉封板膜
，棄去(qù)液體(tǐ)
，甩幹
，每孔(kǒng)加滿(mǎn)洗(xǐ)滌液
，靜(jìng)置(zhì)30秒(miǎo)後棄去
，如(rú)此(cǐ)重復5次
，拍幹(gān)。
6. 加酶(méi)：每(měi)孔加入(rù)酶標(biāo)試(shì)劑50μl
，空(kōng)白(bái)孔除外(wài)。
7. 溫(wēn)育(yù)：操作同3。
8. 洗(xǐ)滌：操(cāo)作同(tóng)5。
9. 顯色(sè)：每(měi)孔先(xiān)加(jiā)入顯(xiǎn)色劑(jì)A50μl
，再加入顯色(sè)劑B50μl
，輕輕(qīng)震蕩(dàng)混匀(yún)
，37℃避光(guāng)顯(xiǎn)色(sè)15分鐘.
10. 終止：每(měi)孔(kǒng)加終(zhōng)止(zhǐ)液(yè)50μl
，終止反應（此(cǐ)時藍色立(lì)轉(zhuǎn)黃色(sè)）。
11. 測(cè)定(dìng)：以空(kōng)白(bái)空調零(líng)
，450nm波長(cháng)依序(xù)測量各(gè)孔的(dí)吸(xī)光(guāng)度（OD值(zhí)）。 測定(dìng)應(yīng)在(zài)加(jiā)終(zhōng)止液(yè)後(hòu)15分(fēn)鐘(zhōng)。
注意事項
1. 試(shì)劑(jì)盒從冷藏環境(jìng)中取出應在室(shì)溫平(píng)衡(héng)15-30 分(fēn)鐘(zhōng)後方可使(shǐ)用
，酶標包被板開封後如未(wèi)用完(wán)
，板條應(yīng)裝入密封(fēng)袋(dài)中(zhōng)保存(cún)。
2. 濃(nóng)洗(xǐ)滌液(yè)可能會有結(jié)晶析出(chū)
，稀(xī)釋時可(kě)在水(shuǐ)浴(yù)中加溫助(zhù)溶(róng)
，洗滌(dí)時不影響(xiǎng)結(jié)果(guǒ)。
3. 各步(bù)加樣均(jūn)應使(shǐ)用加樣(yàng)器(qì)
，並(bìng)經(jīng)常校對其準(zhǔn)確(què)性
，以避(bì)免試驗(yàn)誤差。一次加(jiā)樣(yàng)時間(jiān)好控製(zhì)在5 分鐘內
，如標本數(shù)量多
，推薦使(shǐ)用排槍(qiāng)加樣(yàng)。
4. 封板膜(mó)隻(zhī)限一次性使(shǐ)用(yòng)
，以(yǐ)避(bì)免交(jiāo)叉(chā)汙染(rǎn)。
5. 底物請(qǐng)避光保(bǎo)存(cún)。
6. 嚴格(gé)按(àn)照(zhào)說(shuō)明(míng)書的操(cāo)作(zuò)進行
，試驗結(jié)果判定必(bì)須以(yǐ)酶標儀讀(dú)數為(wéi)準(zhǔn).
7. 所(suǒ)有樣(yàng)品(pǐn)
，洗滌液(yè)和各(gè)種廢(fèi)棄(qì)物都應(yīng)按傳染物(wù)處理。
8. 本(běn)試劑不同(tóng)批(pī)號組分不得(dé)混(hùn)用。
9.如需(xū)代(dài)測或者(zhě)樣本暫時不測定
，可立即低(dī)溫(wēn)凍存(cún)
，溫度(dù)越低越(yuè)好
，中間(jiān)避(bì)免(miǎn)反復(fù)凍(dòng)融(róng)
，-20℃以(yǐ)下(xià)可保存(cún)三個月(yuè),-70℃以下可(kě)保(bǎo)存(cún)六個月(yuè)。
10.試劑使用須知(zhī)：
11.（1）請參(cān)照相關法規，文(wén)獻，MSDS等(děng)信息
，理(lǐ)解並(bìng)掌握好試劑(jì)的特(tè)性
，再進行安全(quán)操(cāo)作(zuò)。
12.（2）通常購(gòu)買(mǎi)試(shì)劑(jì)時一定要(yào)想到一(yī)次(cì)性(xìng)用(yòng)完。若估算不足(zú)有(yǒu)剩(shèng)餘(yú)的話(huà)
，更加注意(yì)其他保管和管(guǎn)理。
13.（3）萬一試(shì)劑操作者(zhě)並非專業(yè)技(jì)術(shù)人員(yuán)。必(bì)須(xū)在專(zhuān)業(yè)人士(shì)的(dí)指導監督下進(jìn)行操(cāo)作(zuò)。對於使用(yòng)後的廢棄物
，不要或者舊(jiù)的試劑(jì)
，應按照相(xiāng)關(guān)法律(lǜ)法(fǎ)規(guī)正當處(chǔ)理。
14.（4）購(gòu)買(mǎi)後
，請務(wù)必確認(rèn)標(biāo)簽上的(dí)注意(yì)事項(xiàng)；做(zuò)好預(yù)防顛倒
，摔壞(huài)的(dí)措施(shī)和(hé)管(guǎn)理體製(zhì)；在使用前再次確認(rèn)標(biāo)簽(qiān)上的(dí)注意事項
，做好必(bì)要的(dí)安(ān)全對策(cè)；對沒有標(biāo)明(míng)其危(wēi)害特性(xìng)，有害(hài)特(tè)性的
，也(yě)要慎重地進(jìn)行(háng)操作；必須帶好(hǎo)防護(hù)用具(jù)
，小心(xīn)翼翼(yì)進(jìn)行操(cāo)作。