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技術文(wén)獻(xiàn)
如何判(pàn)斷植物樣本中是(shì)否(fǒu)含(hán)有25羥基維(wéi)生素D3
可(kě)以通(tōng)過植(zhí)物25羥(qiǎng)基(jī)維生(shēng)素D3 ELISA試劑盒(hé)結合(hé)檢測(cè)結果(guǒ)進行定(dìng)性判斷,判斷(duàn)邏輯基於ELISA檢測的顯(xiǎn)色反應與(yǔ)標準(zhǔn)曲綫對(duì)比實(shí)現(xiàn),具體(tǐ)方(fāng)法如下(xià):
一,試劑盒檢測判(pàn)斷(duàn)流(liú)程(chéng)
完成完整檢測(cè)操(cāo)作:按(àn)照操(cāo)作(zuò)流程(chéng)對樣(yàng)本進(jìn)行(háng)前處理,加樣(yàng),溫(wēn)育(yù),洗滌,顯色(sè),終止(zhǐ),最終用酶標儀讀取(qǔ)樣本(běn)的吸光(guāng)度(dù)(OD值)。
對照(zhào)結果判(pàn)定:
陰(yīn)性(xìng)判定(dìng)(不(bù)含有(yǒu)):若樣本OD值(zhí)<試劑(jì)盒檢(jiǎn)測下限(xiàn)(常(cháng)規(guī)為(wéi)60ng/L對(duì)應(yīng)的(dí)OD值),且樣本(běn)顯色(sè)未發(fā)生明顯變(biàn)色(sè)(仍(réng)接近(jìn)空白孔(kǒng)底色),即可(kě)判定(dìng)樣本中(zhōng)不含(hán)有(yǒu)可檢(jiǎn)測(cè)到(dào)的25羥基維生(shēng)素D3,或含量(liáng)低於試(shì)劑(jì)盒的檢測靈(líng)敏度。
陽(yáng)性判(pàn)定(含有):若樣本(běn)OD值(zhí)落在(zài)試(shì)劑(jì)盒(hé)標(biāo)準曲綫範(fàn)圍內(常規(guī)60ng/L-2500ng/L),且出現(xiàn)明顯顯色(sè)(最終呈黃(huáng)色,顏(yán)色深淺(qiǎn)與含(hán)量(liáng)正相(xiāng)關(guān)),即(jí)可(kě)判(pàn)定(dìng)樣本(běn)中含有25羥(qiǎng)基維生素D3,還(huán)可通(tōng)過(guò)標準曲綫(xiàn)計(jì)算出(chū)具體濃(nóng)度(dù)。
樣本濃度(dù)過(guò)高(gāo)情(qíng)況(kuàng):若樣(yàng)本OD值(zhí)大於最(zuì)高(gāo)濃(nóng)度(dù)標準(zhǔn)品(pǐn)的OD值(zhí),說(shuō)明(míng)樣本中25羥基維生素D3含量超(chāo)過檢(jiǎn)測範(fàn)圍(wéi),需要對樣(yàng)本稀釋(shì)後(hòu)重(zhòng)新(xīn)檢(jiǎn)測,仍顯陽性(xìng)則確認(rèn)含有高濃度(dù)目(mù)標(biāo)物。
二,補(bǔ)充驗(yàn)證說(shuō)明
ELISA檢測為免疫(yì)結(jié)合法(fǎ),若需要(yào)進一步(bù)確認(rèn)結果,可搭(dā)配(pèi)LC-MS(液相(xiāng)色譜-質譜聯(lián)用(yòng))方法驗(yàn)證,已有研(yán)究顯示:經(jīng)紫外綫UVB處理的(dí)番茄(qié),辣(là)椒葉片中可檢出25羥(qiǎng)基維生(shēng)素D3,而未(wèi)處理樣本通(tōng)常低於(yú)檢測(cè)下限。
一,試劑盒檢測判(pàn)斷(duàn)流(liú)程(chéng)
完成完整檢測(cè)操(cāo)作:按(àn)照操(cāo)作(zuò)流程(chéng)對樣(yàng)本進(jìn)行(háng)前處理,加樣(yàng),溫(wēn)育(yù),洗滌,顯色(sè),終止(zhǐ),最終用酶標儀讀取(qǔ)樣本(běn)的吸光(guāng)度(dù)(OD值)。
對照(zhào)結果判(pàn)定:
陰(yīn)性(xìng)判定(dìng)(不(bù)含有(yǒu)):若樣本OD值(zhí)<試劑(jì)盒檢(jiǎn)測下限(xiàn)(常(cháng)規(guī)為(wéi)60ng/L對(duì)應(yīng)的(dí)OD值),且樣本(běn)顯色(sè)未發(fā)生明顯變(biàn)色(sè)(仍(réng)接近(jìn)空白孔(kǒng)底色),即可(kě)判定(dìng)樣本中(zhōng)不含(hán)有(yǒu)可檢(jiǎn)測(cè)到(dào)的25羥基維生(shēng)素D3,或含量(liáng)低於試(shì)劑(jì)盒的檢測靈(líng)敏度。
陽(yáng)性判(pàn)定(含有):若樣本(běn)OD值(zhí)落在(zài)試(shì)劑(jì)盒(hé)標(biāo)準曲綫範(fàn)圍內(常規(guī)60ng/L-2500ng/L),且出現(xiàn)明顯顯色(sè)(最終呈黃(huáng)色,顏(yán)色深淺(qiǎn)與含(hán)量(liáng)正相(xiāng)關(guān)),即(jí)可(kě)判(pàn)定(dìng)樣本(běn)中含有25羥(qiǎng)基維生素D3,還(huán)可通(tōng)過(guò)標準曲綫(xiàn)計(jì)算出(chū)具體濃(nóng)度(dù)。
樣本濃度(dù)過(guò)高(gāo)情(qíng)況(kuàng):若樣(yàng)本OD值(zhí)大於最(zuì)高(gāo)濃(nóng)度(dù)標準(zhǔn)品(pǐn)的OD值(zhí),說(shuō)明(míng)樣本中25羥基維生素D3含量超(chāo)過檢(jiǎn)測範(fàn)圍(wéi),需要對樣(yàng)本稀釋(shì)後(hòu)重(zhòng)新(xīn)檢(jiǎn)測,仍顯陽性(xìng)則確認(rèn)含有高濃度(dù)目(mù)標(biāo)物。
二,補(bǔ)充驗(yàn)證說(shuō)明
ELISA檢測為免疫(yì)結(jié)合法(fǎ),若需要(yào)進一步(bù)確認(rèn)結果,可搭(dā)配(pèi)LC-MS(液相(xiāng)色譜-質譜聯(lián)用(yòng))方法驗(yàn)證,已有研(yán)究顯示:經(jīng)紫外綫UVB處理的(dí)番茄(qié),辣(là)椒葉片中可檢出25羥(qiǎng)基維生(shēng)素D3,而未(wèi)處理樣本通(tōng)常低於(yú)檢測(cè)下限。
