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PCR檢測試(shì)劑盒
商品(pǐn)屬(shǔ)性(xìng)
| 產(chǎn)品名稱(chēng) | 英(yīng)文名稱 | 貨號(hào) |
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馬(mǎ)輪(lún)狀病(bìng)毒PCR檢(jiǎn)測試劑(jì)盒 |
Equine RotavirusRTPCR |
YS-P014171 |
分(fēn)類(lèi)：PCR檢測(cè)試劑盒(hé)
儲存條件(jiàn)：-20℃避(bì)光保(bǎo)存(cún)，避免(miǎn)反(fǎn)復凍融。
運輸(shū)：低溫，避光(guāng)。
有效期(qī)：一(yī)年
貨(huò)期：現貨PCR試劑盒的有效期(qī)一(yī)般為(wéi)1年，這(zhè)是(shì)指在適當(dāng)的儲存(cún)溫(wēn)度下。核(hé)酸擴(kuò)增部(bù)分的(dí)試劑一般要(yào)貯存(cún)於(yú)-20℃下(xià)，產物(wù)檢測(cè)部分試劑(jì)則貯存(cún)於2-8℃。盡量(liáng)避(bì)免反(fǎn)復凍融。
【結(jié)果分(fēn)析(xī)條件設定】
u 閾值(Threshold)設定：將閾值綫設(shè)定在(zài)剛好超(chāo)過(guò)正(zhèng)常陰性質(zhì)控品擴增(zēng)曲綫的最高(gāo)點(diǎn)。
【質(zhì)控標準(zhǔn)】
2. 陽性質控品(pǐn)的檢(jiǎn)測結果應(yīng)為陽性(xìng)，有明(míng)顯(xiǎn)的(dí)指(zhǐ)數擴增(zēng)期，Ct值應(yīng)小於(yú)等(děng)於(yú)35；
3. 以上要(yào)求需在一(yī)次實驗中同(tóng)時滿(mǎn)足(zú)，否則該(gāi)次(cì)實(shí)驗視(shì)為(wéi)無(wú)效。
【結果判斷】
2.可疑(yí)：有明(míng)顯的(dí)指(zhǐ)數(shù)擴增期，且38≤Ct<40，此時樣本(běn)為(wéi)可疑(yí)樣本；對於可疑樣(yàng)本建議復(fù)核一(yī)次(cì)，若復(fù)核(hé)結(jié)果Ct<40且(qiě)有指(zhǐ)數(shù)擴增(zēng)期，則判定為(wéi)陽(yáng)性(xìng)，否(fǒu)則判定為(wéi)陰性；
3. 陰(yīn)性：無(wú)指(zhǐ)數(shù)擴增(zēng)期，Ct=40或無(wú)Ct值(zhí)均判(pàn)定(dìng)為(wéi)陰(yīn)性樣(yàng)本(běn)。
【對檢驗結果(guǒ)的(dí)解(jiě)釋】
1. 實驗室環境(jìng)汙染(rǎn)，試(shì)劑汙染，樣品交(jiāo)叉(chā)汙染會出現假陽性(xìng)結果(guǒ)；
2. 試(shì)劑(jì)運(yùn)輸，保(bǎo)存(cún)不當或(huò)試劑配製(zhì)不(bù)準確(què)引起(qǐ)的試劑(jì)檢測(cè)效能下(xià)降，可(kě)能(néng)會導致(zhì)出現(xiàn)假陰(yīn)性結果。
PCR反應的特異性：
②鹼基配(pèi)對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶(méi)合(hé)成(chéng)反應的忠(zhōng)實性；
④靶(bǎ)基(jī)因的特異性與保(bǎo)守(shǒu)性(xìng)。
馬輪狀(zhuàng)病毒(dú)PCR檢(jiǎn)測試劑盒其中引物與(yǔ)模(mó)板(bǎn)的正確結合(hé)是關鍵。引(yǐn)物與模板(bǎn)的(dí)結(jié)合及(jí)引(yǐn)物(wù)鏈(liàn)的(dí)延(yán)伸(shēn)是遵循鹼基(jī)配對(duì)原(yuán)則(zé)的。聚(jù)合酶(méi)合成反應(yīng)的(dí)忠實性及(jí)Taq DNA聚(jù)合(hé)酶(méi)耐高(gāo)溫性，使(shǐ)反應中模板與引物(wù)的(dí)結合(復性(xìng))可(kě)以(yǐ)在(zài)較(jiào)高的溫度下(xià)進(jìn)行(háng)，結(jié)合(hé)的特異性(xìng)大大增(zēng)加，被擴增的靶(bǎ)基因(yīn)片(piàn)段也(yě)就能保(bǎo)持(chí)很高的(dí)正確(què)度。再通過(guò)選(xuǎn)擇特異性(xìng)和(hé)保(bǎo)守性高的靶基(jī)因(yīn)區(qū)，其特異(yì)性程度就更(gēng)高(gāo)。
(2) 靈敏度(dù)高(gāo)
PCR產物(wù)的生成量(liáng)是(shì)以指數方(fāng)式(shì)增加(jiā)的，能將皮克(kè)(pg=10-12g)量(liáng)級的起始(shǐ)待測模板擴增(zēng)到(dào)微克(kè)(ug=10-6g)水平(píng)。能從(cóng)100萬(wàn)個細(xì)胞中(zhōng)檢出(chū)一個(gè)靶(bǎ)細胞；在病(bìng)毒(dú)的檢測中(zhōng)，PCR的(dí)靈敏度(dù)可(kě)達(dá)3個RFU(空斑形(xíng)成單(dān)位(wèi))；在細菌學(xué)中(zhōng)zui小檢(jiǎn)出率(shuài)為3個細菌。
(3) 簡便(biàn)，快速(sù)
PCR反應用(yòng)耐(nài)高溫(wēn)的Taq DNA聚合(hé)酶(méi)，一(yī)次性地(dì)將反應液(yè)加好(hǎo)後，即在(zài)DNA擴增(zēng)液和水浴鍋上(shàng)進(jìn)行(háng)變(biàn)性-退(tuì)火-延伸反(fǎn)應，一(yī)般在(zài)2～4 小時完成(chéng)擴(kuò)增反(fǎn)應(yīng)。擴增(zēng)產物(wù)一(yī)般(bān)用電泳(yǒng)分析，不一定要(yào)用同(tóng)位(wèi)素(sù)，無(wú)放射性汙(wū)染(rǎn)，易(yì)推(tuī)廣(guǎng)。
(4) 對標(biāo)本(běn)的純度要求低(dī)
不(bù)需(xū)要分(fēn)離(lí)病(bìng)毒或細(xì)菌(jūn)及培養(yǎng)細胞，DNA 粗(cū)製(zhì)品及總(zǒng)RNA均可作(zuò)為擴增模板。可直(zhí)接用臨床標(biāo)本(běn)如血(xiě)液(yè)，體(tǐ)腔(qiāng)液，洗(xǐ)嗽液，毛發，細(xì)胞，活PCR技術(shù)概(gài)論。
