小鼠(shǔ)D-乳酸(suān)elisa檢(jiǎn)測試(shì)劑盒培養(yǎng)步(bù)驟(zhòu):
一(yī)．培(péi)養基(jī)及(jí)培養(yǎng)凍存條件(jiàn)準(zhǔn)備：
1）準備(bèi)MEM培(péi)養基(MEM:GIBCO,貨(huò)號(hào)11095-080)，85%；北美(měi)胎(tāi)牛血(xiě)清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培(péi)養條(tiáo)件(jiàn)： 氣相：空(kōng)氣，95%；二(èr)氧化碳(tàn)，5%。 溫度：37攝氏(shì)度，培(péi)養箱濕(shī)度(dù)為(wéi)70%-80%。
3）凍存(cún)液：90%*培養基，10%DMSO，現(xiàn)用現配。液氮儲(chǔ)存(cún)。
二．細胞(bāo)處(chǔ)理(lǐ)：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有(yǒu)1mL細胞懸(xuán)液(yè)的凍存管(guǎn)在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加(jiā)入4mL培(péi)養基混合均匀。在1000RPM條(tiáo)件下(xià)離心4分(fēn)鐘，棄去上(shàng)清(qīng)液(yè)，補(bǔ)加(jiā)1-2mL培養(yǎng)基(jī)後吹匀(yún)。然(rán)後(hòu)將所(suǒ)有(yǒu)細(xì)胞(bāo)懸液(yè)加(jiā)入(rù)培養(yǎng)瓶中(zhōng)培養(yǎng)過夜(yè)（或將細(xì)胞懸(xuán)液(yè)加入(rù)10cm皿(mǐn)中(zhōng)，加(jiā)入(rù)約8ml培養基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天(tiān)換液並檢查(chá)細胞密度。
2）細胞傳(chuán)代(dài)：如(rú)果(guǒ)細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代(dài)培養。
對(duì)於貼壁(bì)細胞(bāo)，傳代可(kě)參考以下方法：
1.棄(qì)去(qù)培(péi)養上清，用(yòng)不(bù)含鈣(gài)，鎂(měi)離(lí)子(zǐ)的PBS潤(rùn)洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(yè)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(péi)養瓶(píng)中，置於37℃培養箱中(zhōng)消(xiāo)化1-2分(fēn)鐘，然後(hòu)在顯微鏡(jìng)下觀(guān)察細胞消化(huà)情況，若細(xì)胞大(dà)部分(fēn)變(biàn)圓(yuán)並(bìng)脫落，迅速拿回(huí)操作台(tái)，輕敲(qiāo)幾下(xià)培(péi)養瓶後(hòu)加(jiā)少量培(péi)養(yǎng)基終(zhōng)止消化。
3.按(àn)6-8ml/瓶(píng)補(bǔ)加培(péi)養(yǎng)基，輕輕(qīng)打匀後吸(xī)出，在1000RPM條件下離心4分(fēn)鐘，棄去(qù)上(shàng)清液(yè)，補加1-2mL培(péi)養液(yè)後(hòu)吹(chuī)匀。
4.將(jiāng)細(xì)胞(bāo)懸(xuán)液按1：2到(dào)1：5的(dí)比(bǐ)例(lì)分到新(xīn)的含8ml培養基的新(xīn)皿中(zhōng)或(huò)者(zhě)瓶中(zhōng)。
3）細胞凍存：待(dài)細胞生長狀(zhuàng)態(tài)良好(hǎo)時，可進行(háng)細胞凍(dòng)存。貼(tiē)壁(bì)細胞凍存時(shí)，棄(qì)去(qù)培養基後(hòu)加入少(shǎo)量(liáng)胰酶(méi)，細(xì)胞變(biàn)圓(yuán)脫(tuō)落(là)後(hòu)，加入約(yuē)1ml含血(xiě)清的培養(yǎng)基(jī)後(hòu)加(jiā)入凍存管中，再添加10%DMSO後進(jìn)行(háng)凍存(cún)。