人抗副流感病(bìng)毒(dú)IgG抗(kàng)體(tǐ)(anti-PIVIgG)ELISA試劑盒間接(jiē)法(fǎ)(檢測未(wèi)知(zhī)抗(kàng)體(tǐ))

1，用(yòng)包被(bèi)緩衝(chōng)液(yè)將已知(zhī)抗(kàng)原(yuán)稀(xī)釋(shì)至1-10ug/ml， 每(měi)孔加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日洗(xǐ)滌3次(cì)。

2，加(jiā)樣：加一定稀釋(shì)的待(dài)檢樣品(未知抗體)0.05ml於上述(shù)已(yǐ)包被(bèi)之(zhī)反(fǎn)應(yīng)孔(kǒng)中(zhōng),置37℃孵育(yù)1小時,洗滌(dí)。(同時(shí)做(zuò)空(kōng)白，陰性及陽性孔對(duì)照(zhào))
3，加酶標抗體：於(yú)反應孔中，加入新(xīn)鮮稀釋的酶標(biāo)第(dì)二抗(kàng)體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘(zhōng)，洗(xǐ)滌(dí),最(zuì)後(hòu)一(yī)遍用(yòng)DDW洗滌(dí)。
4，加(jiā)底(dǐ)物(wù)液顯(xiǎn)色(sè)：於各反(fǎn)應(yīng)孔中(zhōng)加入(rù)臨時配製的TMB底物溶液(yè)0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5，終止(zhǐ)反應：於(yú)各反(fǎn)應孔中(zhōng)加入2M硫(liú)酸0.05ml
6，結果(guǒ)判(pàn)定(dìng)：可於白色背景(jǐng)上，直接用(yòng)肉(ròu)眼觀察結(jié)果：反(fǎn)應(yīng)孔內顏(yán)色越(yuè)深，陽性(xìng)程度越強，陰性反(fǎn)應為(wéi)無色(sè)或(huò)極淺(qiǎn)，依(yī)據所(suǒ)呈顏色的(dí)深(shēn)淺，以“+”，“-”號表(biǎo)示。也可(kě)測(cè)OD值：在ELISA檢(jiǎn)測儀上(shàng)，於450nm(若以ABTS顯(xiǎn)色(sè)，則410nm)處，以空(kōng)白對(duì)照孔調零後測各孔OD值，若(ruò)大(dà)於(yú)規定(dìng)的(dí)陰性(xìng)對照(zhào)OD值的2.1倍(bèi)，即為(wéi)陽(yáng)性(xìng)。